Evaluatie van een nieuwe microbiologische diagnostische test voor latente Mycobacterium Tuberculosis-infectie (MICRO-LTBI)

Doelstellingen:

i) Om te bepalen of DNA van M. tuberculosis (Mtb) kan worden gedetecteerd in CD34+ mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) geïsoleerd uit

• asymptomatische volwassenen die worden gescreend op LTBI (LTBI-gescreenden)
• volwassenen met nieuw gediagnosticeerde actieve tuberculose (actieve gevallen) ii) Om te bepalen of stammen van Mtb geïsoleerd uit CD34+ PBMC van recente tbc-contacten in huishoudens genetisch identiek zijn aan de stammen geïsoleerd uit het sputum van indexgevallen met longtuberculose waaraan ze zijn blootgesteld iii ) Het karakteriseren van immunologische, klinische en epidemiologische correlaten van het vermogen om Mtb te detecteren in CD34+ PBMC in een heterogene populatie van IGRA-positieve en -negatieve LTBI-screeners.

iv) Om te bepalen of de aanwezigheid van Mtb-DNA in CD34+ PBMC van IGRA-positieve LTBI-gescreenden verband houdt met de aanwezigheid van een transcriptionele handtekening van perifeer bloed die onlangs is gerapporteerd om het risico op progressie naar actieve tuberculose te voorspellen. v) Om de longitudinale verandering in de CD34+ PCR-testresultaten te beoordelen

- LTBI-gescreenden die chemoprofylaxe voor LTBI voltooien

• LTBI-gescreenden ontvangen geen chemoprofylaxe
• Patiënten die de behandeling voor actieve tuberculose voltooien

4.1. Achtergrond

Tuberculose (tbc) is een infectieziekte die wordt veroorzaakt door organismen van het M. tuberculosis-complex (MTBC). De belangrijkste ziekteverwekker bij de mens is M.tuberculosis (Mtb). Tbc tast gewoonlijk de longen aan en wordt overgedragen door het inademen van infectieuze druppeltjes die worden uitgespuugd door een patiënt met actieve longtbc. Tuberculose is in de geschiedenis van de mensheid een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit geweest. In Europa en Noord-Amerika werd een stijging van het aantal gevallen van tuberculose in de zeventiende en achttiende eeuw gevolgd door een snelle daling, die voornamelijk werd toegeschreven aan de verbeterde sociaal-economische omstandigheden, de toepassing van maatregelen op het gebied van de volksgezondheid en de isolatie van tuberculosepatiënten.1 Tegen het einde van de negentiende eeuw na de neerwaartse trend van het aantal gevallen en sterfgevallen door tuberculose in Europa en Noord-Amerika, werden twee grote gebeurtenissen, de ontdekking van Mtb en röntgenstraling, van cruciaal belang voor de diagnose en behandeling van tuberculose.1 Vervolgens werd vaccinatie met M. bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) en behandeling met antibiotica in de eerste helft van de 20e eeuw leidden tot mondiaal optimisme dat de bestrijding en eliminatie van tuberculose binnen handbereik was. Tbc blijft echter tot op de dag van vandaag een ernstige bedreiging voor de volksgezondheid en is wereldwijd de tweede belangrijkste infectieuze doodsoorzaak. 2, 3 Volgens het WHO-rapport uit 2015 vonden er in 2014 wereldwijd naar schatting 9,6 miljoen nieuwe gevallen van tuberculose plaats (waarvan 12% mede-geïnfecteerd met HIV) en 1,5 miljoen sterfgevallen (waarvan 0,4 miljoen onder mensen die gelijktijdig met HIV besmet waren).4 Bovendien heeft naar schatting een derde van de wereldbevolking een latente Mtb-infectie (LTBI), van wie ongeveer 10% tijdens zijn leven actieve tuberculose zal ontwikkelen.5

Hoewel slechts 22 lage- of middeninkomenslanden (LMICs) verantwoordelijk zijn voor 80% van de mondiale lasten, is tuberculose nog steeds een belangrijke ziekte onder immigrantenpopulaties in hoge-inkomenslanden. In het Verenigd Koninkrijk (VK) zijn de in de 20e eeuw bereikte dalingen in de tbc-incidentie omgedraaid, met een toename van 50% in tbc-meldingen tussen 1998 en 2009.6 In 2013 werden in totaal 7.892 gevallen van tuberculose gerapporteerd, wat overeenkomt met een incidentie van 12,3 per 100.000 inwoners per jaar, het hoogste onder de landen met een hoog inkomen.7 Een groot deel (37,8%) van de gevallen van tuberculose in Groot-Brittannië wordt aangetroffen in Londen, waar de incidentie van tuberculose 35,5 per 100.000 inwoners per jaar bedraagt; immigranten uit India (30%), Pakistan (20%) en Somalië (5%) waren verantwoordelijk voor het merendeel van deze gevallen.7

Momenteel zijn de belangrijkste strategieën bij de bestrijding van tuberculose een nauwkeurige en snelle diagnose van actieve ziekte, samen met een effectieve behandeling om de overdracht te onderbreken. Een vertraagde diagnose is echter een grote uitdaging bij het vergemakkelijken van de overdracht in gemeenschappen.8 Normaal gesproken duurt het vanaf het begin van de symptomen enkele maanden voordat een tbc-patiënt met de behandeling begint. In Groot-Brittannië bijvoorbeeld begint bijna een derde van de longtuberculosepatiënten vier maanden na het begin van de symptomen met de behandeling.7 Dergelijke lange vertragingen, gekoppeld aan de grote hoeveelheid LTBI, duiden erop dat er behoefte is aan interventies om individuen met LTBI te identificeren en te behandelen om de tuberculose onder controle te krijgen. Antimicrobiële behandeling van LTBI (chemoprofylaxe) is effectief in het verminderen van het risico op reactivatie en wordt routinematig geïmplementeerd in omgevingen met hoge inkomens en lage incidentie. De implementatie van dit beleid, vooral in omgevingen met hoge belasting, wordt echter belemmerd door het ontbreken van een diagnostische test om de subgroep van Mtb-gesensibiliseerde individuen te identificeren die het risico lopen actieve tuberculose te ontwikkelen, op wie chemoprofylaxe zou moeten worden gericht.

Momenteel wordt de diagnose LTBI gesteld door het detecteren van een adaptieve immuunrespons op Mtb-infectie, hetzij in vivo (met behulp van de tuberculinehuidtest) of ex vivo (met behulp van Interferon-Gamma Release Assays [IGRA's]). Deze benadering, die Mtb niet rechtstreeks detecteert, is beperkt in die zin dat zij geen onderscheid kan maken tussen de 10% van de gesensibiliseerde individuen die risico lopen op reactivatie (bij wie chemoprofylaxe van nut kan zijn) en de 90% die immunologisch gesensibiliseerd zijn maar dat niet doen. voortgang naar actieve ziekte (bij wie chemoprofylaxe geen voordeel oplevert). Deze laatste groep is potentieel heterogeen: sommigen hebben de infectie mogelijk geëlimineerd, terwijl anderen mogelijk LTBI hebben, maar deze voor onbepaalde tijd kunnen beheersen.9 Hulpmiddelen om deze mogelijke fenotypes te ontleden zouden een nauwkeurigere doelgerichtheid van chemoprofylaxe mogelijk kunnen maken, maar deze ontbreken momenteel. In deze studie zullen de onderzoekers onderzoeken of Mtb kan worden gedetecteerd in CD34+-cellen geïsoleerd uit perifeer bloed van a) volwassenen die worden gescreend op LTBI (LTBI-gescreenden), en b) volwassenen met nieuw gediagnosticeerde actieve tuberculose (actieve gevallen).

4.2. Reden voor het onderzoek

Deze studie bouwt voort op een recente observatie van een van de mede-onderzoekers (Stephen Reece) die deel uitmaakte van een groep aan het Max Planck Instituut voor Infectiebiologie, Berlijn, die Mtb-DNA heeft gedetecteerd in CD34+ langdurig herbevolkende pluripotente hematopoëtische stamcellen. (LTpHSC's) geïsoleerd uit 100 ml perifeer bloed van zeven gezonde volwassenen met LTBI (positieve IGRA, actieve tuberculose uitgesloten); Mtb-DNA werd niet gedetecteerd in LTpHSC's van zeven IGRA-negatieve gezonde volwassenen. 10 Als deze opmerkelijke bevinding in een andere setting kan worden gerepliceerd, zou dit kunnen leiden tot de ontwikkeling van een nieuwe microbiologische test ('de CD34+ PCR-test') met verschillende potentiële toepassingen:

a) om individuen te identificeren die latent geïnfecteerd zijn met antibioticaresistente Mtb (waardoor selectie van een geschikt chemoprofylaxeregime mogelijk wordt gemaakt), b) om de werkzaamheid van chemoprofylaxe en interventies te monitoren die zijn ontworpen om de verwerving van LTBI te voorkomen, zoals vaccins en programma’s voor suppletie van micronutriënten, c ) om de verspreiding van bepaalde stammen door een populatie te volgen (wat een hulpmiddel biedt voor interventies op het gebied van de volksgezondheid), d) om onderscheid te maken tussen Mtb-gevoelige individuen die het risico lopen zich te ontwikkelen tot actieve ziekte versus degenen die dat niet zijn, waardoor chemoprofylaxe kan worden gericht op populaties die er baat bij kunnen hebben, en e) om nieuwe inzichten te verschaffen in de immunobiologie van LTBI en de pathogenese van menselijke tuberculose.

4.3. Hypotheses

i) Mtb-DNA kan bij diagnose worden gedetecteerd in CD34+ PBMC van asymptomatische IGRA-positieve volwassenen en actieve gevallen van tuberculose, maar niet bij IGRA-negatieve volwassenen.

ii) Stammen van Mtb geïsoleerd uit CD34+ PBMC van asymptomatische IGRA-positieve TB-contacten zullen genetisch identiek zijn aan die geïsoleerd uit het sputum van indexgevallen van longTB waaraan ze recentelijk zijn blootgesteld.

iii) Mogelijkheid om Mtb-DNA te detecteren in CD34+ PBMC van IGRA-positieve LTBI-gescreenden geassocieerd met IGRA-resultaten en erkende klinische en epidemiologische risicofactoren voor LTBI iv) Mogelijkheid om Mtb-DNA te detecteren in CD34+ PBMC van IGRA-positieve LTBI-gescreenden geassocieerd met transcriptomische handtekeningen uit perifeer bloed eerder gedefinieerd als geassocieerd met progressie naar actieve tuberculose v) Antimicrobiële therapie is effectief bij het elimineren van Mtb uit CD34+ PBMC geïsoleerd uit personen met LTBI of actieve tuberculose bij wie het bij aanvang detecteerbaar was; en dat de resultaten van de CD34+ PCR-test reproduceerbaar zijn bij herhaling bij LTBI-gescreenden die geen chemoprofylaxe hebben gekregen

5. Doelstellingen

5.1. Primaire doelstelling

Om te bepalen of DNA van M. tuberculosis (Mtb) kan worden gedetecteerd in CD34+ mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) geïsoleerd uit

• asymptomatische volwassenen die routinematige screening op LTBI ondergaan (LTBI-gescreenden)
• volwassenen met nieuw gediagnosticeerde actieve tuberculose (actieve gevallen)

5.2. Secundaire doelstellingen

• Om te bepalen of stammen van Mtb geïsoleerd uit CD34+ PBMC van tbc-contacten genetisch identiek zijn aan de stammen geïsoleerd uit het sputum van indexgevallen met longtuberculose waaraan ze zijn blootgesteld
• Karakteriseren van immunologische, klinische en epidemiologische correlaten van het vermogen om Mtb te detecteren in CD34+ PBMC in een heterogene populatie van IGRA-positieve en -negatieve LTBI-gescreenden.
• Om te bepalen of de aanwezigheid van Mtb-DNA in CD34+ PBMC van IGRA-positieve gescreenden verband houdt met de aanwezigheid van een perifere bloedtranscriptiesignatuur waarvan onlangs is gerapporteerd dat deze het risico op progressie naar actieve TB11 kan voorspellen
• Om de longitudinale verandering in de CD34+ PCR-testresultaten te beoordelen
• LTBI-screenings die chemoprofylaxe voor LTBI voltooien
• LTBI-gescreenden ontvangen geen chemoprofylaxe
• patiënten die de behandeling voor actieve tuberculose voltooien

Studieontwerp en studiebezoeken

De onderzoekers zullen een longitudinaal onderzoek uitvoeren. Er zullen twee groepen deelnemers worden gerekruteerd: volwassenen die worden gescreend op LTBI (LTBI-screenees) en patiënten die op het punt staan ​​een behandeling voor actieve tuberculose te starten (actieve gevallen). LTBI-gescreenden zijn degenen die worden gescreend op LTBI als onderdeel van de standaardzorg: het betreft onder meer recente contacten van een besmettingsgeval met tuberculose, nieuwkomers uit landen met een hoge tuberculose-last, gezondheidswerkers die een screening op de arbeidsgezondheid ondergaan en patiënten die op het punt staan ​​een immunosuppressieve therapie te ondergaan. . Patiënten met actieve tuberculose zijn degenen bij wie de diagnose actieve tuberculose is gesteld en die op het punt staan ​​een antitbc-therapie te gaan gebruiken.

Bij aanvang (bezoek 1) zullen deelnemers die aan de inclusiecriteria voldoen en schriftelijke geïnformeerde toestemming geven om aan het onderzoek deel te nemen, worden gevraagd om sociodemografische informatie te verstrekken, waaronder details over leeftijd, geslacht en etnische afkomst, evenals details over de geschiedenis van blootstelling aan tuberculose (inclusief specifieke blootstelling aan deelnemers met actieve tuberculose die aan het onderzoek deelnamen) en andere klinisch relevante gegevens, die allemaal zullen worden vastgelegd op een Case Report Form (CRF). Er zal een HIV-serologische test worden uitgevoerd als dit nog niet als onderdeel van de routinezorg wordt gedaan. Er wordt een bloedmonster van 120 ml (117 ml als de HIV-test al wordt uitgevoerd als onderdeel van de routinezorg) afgenomen voor IGRA (QFT-Plus), bloedcultuur voor Mtb, perifere bloedtranscriptoomrisicosignatuuranalyse en de CD34+ PCR-test voor Mtb-DNA bij basislijn. IGRA-positieve deelnemers bij wie actieve tuberculose is uitgesloten op basis van klinische evaluatie en röntgenfoto van de borstkas (onderdeel van de standaardzorg), krijgen een drie maanden durende kuur met rifampicine- en isoniazide-chemoprofylaxe aangeboden als ze voldoen aan de criteria voor deze therapie (ook onderdeel van de standaardbehandeling). zorg).12

Het communiceren van positieve HIV-testresultaten zal plaatsvinden in overeenstemming met de aanbevelingen van de Britse National Guidelines for HIV Testing 2008. Positieve HIV-testresultaten zullen worden meegedeeld in een persoonlijk interview met een onderzoeksarts, in aanwezigheid van een verpleegkundige van de Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) kliniek (de plaatselijke HIV-dienst). Deelnemers die HIV-positief testen, worden doorverwezen naar de dichtstbijzijnde GUM-kliniek voor bevestiging van hun resultaten en eventueel verdere behandeling.

Na 3 maanden (bezoek 2) zullen de details van het voorschrijven en naleven van chemoprofylaxe worden geregistreerd, en zal een tweede bloedmonster (117 ml) worden genomen voor herhaalde IGRA (QFT-Plus), bloedkweek en CD34+ PCR-test. Bij deelnemers die chemoprofylaxe hebben ondergaan, wordt bij bezoek 2 ook een Tempus-buisje afgenomen.

Bij aanvang (bezoek 1) zullen deelnemers die aan de inclusiecriteria voldoen en schriftelijke geïnformeerde toestemming geven om aan het onderzoek deel te nemen, worden gevraagd om fundamentele sociodemografische informatie te verstrekken, waaronder details over leeftijd, geslacht en etnische afkomst, evenals de duur van hun symptomen, contact met eventuele ingeschreven LTBI-gescreende en andere klinisch relevante gegevens, die allemaal zullen worden vastgelegd op een CRF. HIV-serologie, volledig bloedbeeld, sputumuitstrijkjesmicroscopie en cutlure voor M.tuberculosis worden uitgevoerd als onderdeel van de routinezorg bij deze patiëntengroep. Er zal een bloedmonster van 114 ml worden verzameld voor IGRA (QFT-Plus), bloedkweek voor Mtb en de CD34+ PCR-test voor Mtb-DNA bij baseline. Tbc-patiënten zullen worden behandeld voor actieve ziekte volgens de Britse richtlijnen. 12

Na voltooiing van de chemotherapie (bezoek 2, meestal na 6 maanden), zullen de gegevens over het voorschrijven en de naleving van de anti-tbc-behandeling worden geregistreerd en zal een tweede bloedmonster (114 ml) worden afgenomen voor IGRA (QFT-Plus), bloedkweek voor Mtb en de CD34+ PCR-test.

Studieprocedures

Procedures voor uitnodiging en geïnformeerde toestemming

Uitnodiging

In Londen wordt screening op LTBI met behulp van een IGRA gewoonlijk in vier groepen uitgevoerd: recente contacten van actieve tbc-patiënten; nieuwkomers uit landen met een hoge tuberculoselast; patiënten die op het punt staan ​​met immunosuppressieve therapieën te beginnen; en gezondheidswerkers die een screening op de arbeidsgezondheid ondergaan. Groepen die risico lopen op LTBI kunnen in eerste instantie worden geïdentificeerd in verschillende settings (tbc-kliniek, eerstelijnszorg, reumatologische klinieken, bedrijfsgezondheidsdiensten), maar ze worden allemaal doorverwezen naar een tbc-kliniek (contacten, nieuwkomers, patiënten die op het punt staan ​​met immunosuppressieve therapie te beginnen). ) of naar de bedrijfsgezondheidskliniek (gezondheidswerkers die een arbeidsgezondheidsonderzoek ondergaan) voor uitvoering van een LTBI-screening. Potentieel in aanmerking komende LTBI-screeners zullen daarom worden geïdentificeerd en gerekruteerd voor het onderzoek in tbc-klinieken of de arbeidsgezondheidskliniek. Patiënten met actieve tuberculose zullen worden geïdentificeerd en gerekruteerd bij Barts Health NHS Trust TB Clinics.

Mogelijk in aanmerking komende personen zullen over het onderzoek worden geïnformeerd door verpleegkundigen of artsen die in tbc-klinieken of arbeidsgeneeskundige klinieken werken en die tbc-screening uitvoeren als onderdeel van de gebruikelijke klinische zorg. Degenen die belangstelling tonen voor het onderzoek, zullen door een lid van het klinische zorgteam een ​​deelnemersinformatieblad ontvangen. Hierin worden de doelstellingen, methoden, verwachte voordelen en potentiële gevaren van het onderzoek toegelicht, en zal het in niet-technische taal worden gepresenteerd, hetzij in het Engels, hetzij in andere talen waar nodig. Degenen die een deelnemersinformatieblad invullen, zullen worden gevraagd een 'Contactformulier' in te vullen met hun contactgegevens en toestemming aan het onderzoeksteam om contact met hen op te nemen zodra ze de kans hebben gehad de informatie te lezen; dit 'Contactformulier' wordt door het gebruikelijke zorgteam van de deelnemer doorgestuurd naar het onderzoeksteam.

Procedures voor geïnformeerde toestemming

Geïnformeerde toestemming zal worden uitgevoerd volgens de standaard operationele procedures van JRMO. Geïnformeerde toestemming wordt in een privékamer verleend door personeel dat een specifieke training heeft gevolgd in goede klinische praktijken en het nemen van geïnformeerde toestemming, dit kunnen artsen, verpleegkundigen of onderzoeksassistenten zijn. Tijdens het toestemmingsproces worden de deelnemers erop gewezen dat deelname vrijwillig is en dat zij op elk moment tijdens de follow-up, om welke reden dan ook, kunnen weigeren deel te nemen aan het onderzoek of zich terug kunnen trekken.

Deelnemers wordt gevraagd hun toestemming voor deelname aan te geven door hun naam te ondertekenen en af ​​te drukken. Een onpartijdige getuige zal de toestemming moeten medeondertekenen voor degenen die tijdens het toestemmingsproces een tolk nodig hebben. Deelnemers krijgen een financiële vergoeding voor de reiskosten die met elk bezoek gepaard gaan.

Inschrijvings- en vervolgprocedures

Werving op basisniveau

Potentiële deelnemers worden beoordeeld op geschiktheid op basis van de hierboven genoemde in- en uitsluitingscriteria. Na het toestemmingsproces en nadat een deelnemer schriftelijk geïnformeerde toestemming heeft gegeven voor deelname, wordt een uniek ID-nummer toegewezen. Beoordeling of u in aanmerking komt voor deelname zal worden uitgevoerd door voldoende opgeleid personeel, zoals artsen, verpleegkundigen of onderzoeksassistenten.

Procedure voor het verzamelen van gegevens

Met behulp van een CRF wordt bij bezoek 1 (V1) aan alle deelnemers gevraagd om sociodemografische informatie en medische geschiedenis, inclusief medicatiegeschiedenis, te verstrekken. LTBI-gescreenden zullen worden gevraagd om details te verstrekken over recente en eerdere blootstelling aan tbc-patiënten, de geschiedenis van tbc en andere potentiële determinanten van LTBI, zoals de fysieke nabijheid van actieve tbc-patiënten, de gemiddelde dagelijkse blootstellingsduur en de totale duur van de blootstelling aan indexgevallen . CRF's zullen ook de volgende gegevens bevatten: checklist met geschiktheidscriteria, resultaten van klinische basisonderzoeken en laboratoriumtests, en informatie verzameld tijdens de follow-up, inclusief details over terugtrekking, indien van toepassing. De leden van het projectteam die verantwoordelijk zijn voor het invullen van CRF's, die onderzoeksfellows of veldwerkers kunnen zijn, worden vermeld in een delegatielogboek.

Basismonsterverzameling en laboratoriumbeoordelingen

Er zullen monsters worden verzameld zoals gedetailleerd in Figuur 1 en Tabellen 1 en 2, en laboratoriumanalyses zullen worden uitgevoerd zoals gedetailleerd in Tabellen 3 en 4. Wanneer tests worden uitgevoerd als onderdeel van routinematige zorg (bijv. volledig bloedbeeld voor patiënten met actieve tuberculose, HIV-serologie voor patiënten met actieve tuberculose en IGRA-positieve LTBI-gescreenden), de resultaten zullen toegankelijk zijn via CRS en worden gedocumenteerd op het CRF. IGRA-negatieve LTBI-gescreenden en niet-blootgestelde deelnemers krijgen bij bezoek 1 een HIV-test aangeboden.

Om te onderzoeken of Mtb-stammen geïsoleerd uit CD34+ PBMC van tbc-contacten overeenkomen met die geïsoleerd uit sputum van indexgevallen waaraan ze zijn blootgesteld, zullen sputummonsters worden verzameld van 10 index-actieve tbc-patiënten die CD34+ PCR-assay-positieve contacten hebben die aan het onderzoek deelnemen. en analyse van de sequentie van het hele genoom zal worden uitgevoerd op isolaten die uit deze monsters worden gekweekt. Op basis van deze analyse zullen primers voor het creëren van Mtb-ampliconbibliotheken worden ontworpen met behulp van bioinformatische benaderingen om de diversiteit van stammen vast te leggen. Deze primers zullen vervolgens worden gebruikt om Mtb-ampliconbibliotheken te genereren uit CD34+-cellen die Mtb-genomisch DNA herbergen dat is geïsoleerd uit TB-contacten. Deze bibliotheken zullen vervolgens worden gesequenced en vergeleken met het Mtb-genoom van het indexgeval om te bepalen of stammen geïsoleerd uit indexgevallen en contacten overeenkomen.

Deelnemers met positieve HIV-tests/IGRA's worden respectievelijk doorverwezen naar HIV/TB-klinieken voor verdere beoordeling. Wanneer HIV-tests en IGRA’s zijn uitgevoerd voor onderzoeksdoeleinden (d.w.z. waar ze geen deel uitmaken van de routinematige zorg), zal het onderzoekspersoneel deze resultaten aan de deelnemers communiceren zodra deze beschikbaar komen.

Vervolgprocedures

• LTBI-gescreenden: Bezoeken en vervolgbeoordelingen worden gedetailleerd weergegeven in Figuur 1, Tabel 1 en Tabel 3. Deelnemers zullen bezoek 2 bijwonen na 3 maanden (bezoek 2, V2). Deelnemers die chemoprofylaxe hebben voltooid, zullen na voltooiing van hun behandeling een routinematige klinische evaluatie ondergaan. Degenen die geen chemoprofylaxe gebruiken, zullen ook 3 maanden na V1 worden gevolgd. Naast het invullen van een CRF waarin de symptomen van actieve tuberculose (alle deelnemers) en de naleving van chemoprofylaxe (degenen die chemoprofylaxe krijgen) worden beschreven, zal er een bloedmonster van 117 ml worden verzameld voor immunologische en moleculaire analyse, zoals beschreven in paragraaf 13.3 hieronder. Na voltooiing van het tweede bezoek eindigt de deelname aan het onderzoek.
• Patiënten met actieve tuberculose: Bezoeken en follow-up worden gedetailleerd weergegeven in Figuur 1, Tabel 2 en Tabel 4. Deelnemers die een anti-tbc-behandeling ondergaan, zullen na voltooiing van hun behandeling een routinematige klinische evaluatie ondergaan en tijdens de behandeling zal een tweede bloedmonster van 114 ml worden afgenomen. dit bezoek voor immunologische en moleculaire analyse zoals beschreven in paragraaf 13.3 hieronder. Na voltooiing van het tweede bezoek eindigt de deelname aan het onderzoek.

De resultaten van de CD34+ PCR-test zullen niet worden gebruikt als leidraad voor de klinische behandeling, aangezien deze test een onderzoeksinstrument is in de vroege ontwikkelingsfasen en de resultaten ervan niet zijn gecorreleerd met enige klinische uitkomst.

Terugtrekking van deelnemer

Deelnemers worden teruggetrokken als zij hun toestemming voor deelname intrekken of als wordt geconcludeerd dat terugtrekking in het belang van de deelnemer is. Deelnemers worden ook geacht zich te hebben teruggetrokken als zij ondanks schriftelijke en telefonische herinneringen hun tweede geplande studiebezoek niet bijwonen. Als een deelnemer zich terugtrekt uit het onderzoek, wordt de reden van terugtrekking vastgelegd in het CRF.

Gegevens verzameld tot het moment van terugtrekking worden meegenomen in de onderzoeksanalyses, tenzij anders gevraagd door een deelnemer. Alle klinische monsters die vóór de terugtrekking van een deelnemer zijn genomen, zullen worden gebruikt voor studieanalyses.

Einde van de studiedefinitie

Het onderzoek eindigt wanneer alle klinische en laboratoriumbeoordelingen zijn voltooid voor alle deelnemers aan de follow-up.

9. Statistische overwegingen

9.1 Steekproefomvang

Het belangrijkste doel van deze studie is het valideren en uitbreiden van bevindingen uit een andere setting waarin genomisch DNA van Mtb werd gedetecteerd in CD34+-cellen geïsoleerd uit het perifere bloed van zeven IGRA-positieve asymptomatische volwassenen.10 Om dit doel te bereiken zullen in totaal 100 LTBI-screeners worden gerekruteerd voor het cross-sectionele onderzoek (20 deelnemers per onafhankelijke variabele die in de regressieanalyse moet worden getest). Er wordt verwacht dat ongeveer vijftig van deze deelnemers IGRA-positief zullen zijn, van wie er ongeveer veertig chemoprofylaxe zullen worden voorgeschreven: follow-up van 25 van deze deelnemers zal >80% power opleveren bij een significantieniveau van 5% om een ​​vermindering van de percentage CD34+ PCR-positieve individuen van 80% bij baseline tot 30% bij follow-up.

10. Ethische overwegingen

Vóór aanvang van het onderzoek zal goedkeuring worden gevraagd aan de NHS REC voor het onderzoeksprotocol, formulieren voor geïnformeerde toestemming en andere relevante documenten. Het onderzoek zal pas beginnen als de noodzakelijke goedkeuring is verkregen van de ethische commissie en er 'groen licht' is gegeven om sites te activeren door de sponsor. De CI zal ervoor zorgen dat dit onderzoek wordt uitgevoerd in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki (2013) en de ethische principes in het Research Governance Framework for Health and Social Care, tweede editie, 2005 en de daaropvolgende wijzigingen. De beslissing of een wijziging een kleine of een substantiële wijziging is, ligt bij de sponsor. Substantiële wijzigingen die beoordeling door de REC vereisen, zullen niet worden geïmplementeerd voordat ze zijn goedgekeurd door de relevante instantie. Alle correspondentie met de sponsor en de REC wordt bewaard in het onderzoeksmasterdossier. De CI zal de REC en de sponsor aan het einde van het onderzoek op de hoogte stellen.

Voorafgaand aan deelname aan dit onderzoek zal schriftelijke geïnformeerde toestemming van de deelnemers worden verkregen door een voldoende opgeleide persoon (dit kan een arts, een verpleegkundige of een onderzoeksassistent zijn). Er zullen informatiebladen beschikbaar worden gesteld in het Engels en waar nodig in andere talen. Potentiële deelnemers ontvangen het informatieblad en de doelstellingen, methoden, verwachte voordelen en potentiële gevaren van het onderzoek worden uitgelegd. Tijdens het toestemmingsproces wordt aan de deelnemers uitgelegd dat deelname vrijwillig is en dat zij op elk moment tijdens de follow-up, om welke reden dan ook, kunnen weigeren deel te nemen aan het onderzoek of zich terugtrekken.

Belangenverstrengeling

Er zijn geen financiële of andere concurrerende belangen geïdentificeerd voor de CI of een medeonderzoeker.

11. Veiligheidsoverwegingen

Omdat het onderzoek observationeel is, is het risico op studiegerelateerde bijwerkingen verwaarloosbaar. Elke bijwerking die geacht wordt verband te houden met het onderzoek zal echter binnen 24 uur aan de sponsor worden gemeld. Het bloedvolume dat moet worden afgenomen (tot 120 ml) kan door sommige deelnemers als groot worden ervaren, maar volwassenen die bloed doneren geven gewoonlijk 500 ml per keer zonder dat ze aan bloedarmoede lijden. De onderzoekers verwachten daarom geen nadelige gevolgen die verband houden met het afnemen van dit bloedvolume. Informatie over de hoeveelheid bloedmonster en of dit ongewenste gevolgen voor de gezondheid zal hebben, wordt aan de deelnemers uitgelegd in het informatieblad. Alle tbc-patiënten zullen worden gescreend op bloedarmoede als onderdeel van hun gebruikelijke klinische zorg, en degenen met een hemoglobinegehalte van minder dan 10 g/dl bij binnenkomst zullen worden uitgesloten. Daarnaast zullen de volgende maatregelen worden genomen om mogelijk ongemak, ongemak en risico dat deelnemers tijdens dit onderzoek kunnen ervaren, tot een minimum te beperken:

- gebruik van voldoende opgeleid personeel voor het uitvoeren van aderlatingen

12. Gegevensverwerking en bijhouden van gegevens

12.1. Vertrouwelijkheid

Beschermde gezondheidsinformatie (PHI) die nodig is voor de uitvoering en analyse van het onderzoek zal worden verzameld voor alle deelnemers die voor het onderzoek worden gescreend; deze informatie omvat de naam van elke deelnemer, geboortedatum, geslacht, adres, telefoonnummer, medisch dossiernummer indien van toepassing, e-mailadres indien van toepassing, en etnische afkomst. Studiepersoneel dat toegang tot PHI nodig heeft om het onderzoek uit te voeren of te analyseren, wordt vermeld in een delegatielogboek. PHI blijft vertrouwelijk en wordt behandeld, verwerkt, opgeslagen en vernietigd in overeenstemming met de Data Protection Act 1998. Deelnemers behouden het recht om op elk moment tijdens het onderzoek hun toestemming voor het gebruik van hun PHI in te trekken. In publicaties die voortkomen uit dit onderzoek worden alle deelnemers geanonimiseerd. Gegevens worden als volgt gepseudonimiseerd. PHI wordt bewaard in een beveiligde database gekoppeld aan een unieke identificatiecode. Klinische informatie wordt bewaard in een aparte beveiligde database, gekoppeld aan dezelfde unieke identificatiecode. De CI en medeonderzoekers krijgen toegang tot de pseudo-geanonimiseerde dataset van het definitieve onderzoek.

Tijdens het onderzoek vallen alle gegevens onder de verantwoordelijkheid van de CI en worden ze onder veilige omstandigheden bewaard. Wanneer het onderzoek is afgerond, is het de eis van de sponsor dat de dossiers en gegevens nog eens twintig jaar worden bewaard. Het CI zal optreden als ‘Custodian’ van de onderzoeksdata. De toegang tot PHI zal beperkt zijn tot het minimumaantal personen dat nodig is voor de uitvoering van het onderzoek, de kwaliteitscontrole, de audit en de analyse. Het volgende omvat brondocumenten: screeninglogboeken, geïnformeerde toestemming en papieren CRF. Alle brondocumenten worden veilig bewaard in afgesloten archiefkasten. Gegevensoverdracht en -transport zullen plaatsvinden in overeenstemming met de Britse Data Protection Act 1998. Persoonsidentificeerbare informatie zal niet worden opgeslagen, getransporteerd of verzonden naar of vanaf een draagbaar apparaat, tenzij dat apparaat gecodeerd is.

12.2. Gegevensverzameling, registratie en verwerking

Ondertekende toestemmingsformulieren en papieren documenten met brongegevens worden veilig bewaard. Onderzoeksgegevens worden ingevoerd in een database in de EpiData Entry-software. Het personeel krijgt een passende training in het gebruik van de database voor gegevensinvoer. Laboratoriumgegevens worden in de database ingevoerd.

De CI en medeonderzoekers hebben tijdens het onderzoek toegang tot onderzoeksgegevens. Studiepersoneel dat dergelijke toegang nodig heeft om het onderzoek uit te voeren, krijgt ook de toegang die nodig is. Toegang tot onderzoeksgegevens tijdens het onderzoek wordt indien nodig ook verleend aan bevoegde vertegenwoordigers van de sponsor, de gastinstelling en de regelgevende instanties.

12.3. Kwaliteitscontrole en kwaliteitsborging

Onderzoeksdocumentatie zal op verzoek beschikbaar worden gesteld aan vertegenwoordigers van de sponsor en de REC voor kwaliteitscontrole en kwaliteitsborging.

13. Laboratoria

13.1. Monstername, etikettering en verwerking

Bloedmonsters worden verzameld door het onderzoekspersoneel, voorzien van een label met deelnemers-ID en gedateerd. Tempus-buisjes worden onmiddellijk na afname krachtig geschud, volgens de aanbevelingen van de fabrikant. Monsters voor bloedkweek en HIV-serologie worden voor verwerking naar de Centrale Laboratoria vervoerd. De resterende bloedmonsters worden vervoerd naar The Blizard Institute, waar de datum en tijd van ontvangst van het monster en de toestand van het monster (bijv. niet-gestold) zal worden vastgelegd in een laboratoriumlogboek. Monsters voor de QFT-Plus-test zullen kort na ontvangst van de monsters gedurende 18 uur bij 37 °C worden geïncubeerd, voorafgaand aan het centrifugeren en opzuigen van de supernatanten die bij -80 °C zullen worden bewaard in afwachting van analyse van de IFN-gamma-concentratie. Bloedmonsters in Tempus-buisjes zullen bij -80 °C worden bewaard in een gelabeld rek in afwachting van transport naar de Division of Infection and Immunity, University College London voor RNA-extractie en genexpressieprofilering. PBMC zal worden gescheiden van het resterende monster (100 ml), met daaropvolgende isolatie van CD34+-cellen met behulp van magnetische korrelsortering. De zuiverheid van de geïsoleerde CD34+-cellen zal worden gecontroleerd door middel van flowcytometrie.