Avaliação de um novo teste de diagnóstico microbiológico para infecção latente por Mycobacterium Tuberculosis (MICRO-LTBI)

Objetivos:

i) Determinar se o DNA de M. tuberculosis (Mtb) pode ser detectado em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) CD34+ isoladas de

• adultos assintomáticos sendo rastreados para ILTB (rastreados para ILTB)
• adultos com tuberculose ativa recém-diagnosticada (casos ativos) ii) Determinar se as cepas de Mtb isoladas de PBMC CD34+ de contatos domiciliares recentes de TB são geneticamente idênticas àquelas isoladas do escarro de casos índices com TB pulmonar aos quais foram expostos iii ) Caracterizar os correlatos imunológicos, clínicos e epidemiológicos da capacidade de detectar Mtb em PBMC CD34+ em uma população heterogênea de ILTB positiva e negativa para IGRA selecionados.

iv) Determinar se a presença de DNA de Mtb em PBMC CD34+ de pacientes com ILTBI positivos para IGRA se associa à presença de uma assinatura transcricional de sangue periférico recentemente relatada para prever o risco de progressão para TB ativa v) Avaliar a mudança longitudinal nos resultados do ensaio de PCR CD34+ em

- Indivíduos examinados com ILTB completando quimioprofilaxia para ILTB

• Pessoas examinadas com ILTB que não receberam quimioprofilaxia
• Pacientes completando tratamento para TB ativa

4.1. Fundo

A tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por organismos do complexo M. tuberculosis (MTBC). O principal patógeno em humanos é M.tuberculosis (Mtb). A TB comumente afeta os pulmões e é transmitida através da inalação de gotículas infecciosas expectoradas por um paciente com TB pulmonar ativa. A tuberculose tem sido uma das principais causas de morbidade e mortalidade ao longo da história humana. Na Europa e na América do Norte, um aumento nos casos de TB nos séculos XVII e XVIII foi seguido por um rápido declínio atribuído principalmente à melhoria das condições socioeconómicas, à aplicação de medidas de saúde pública e ao isolamento dos pacientes com TB.1 No final do século XIX, após a tendência decrescente de casos e mortes por TB na Europa e na América do Norte, dois grandes eventos, a descoberta do Mtb e dos raios X, tornaram-se fundamentais no diagnóstico e tratamento da TB.1 Posteriormente, a vacinação com o bacilo M. bovis Calmette-Guérin (BCG) e o tratamento com antibióticos na primeira metade do século XX levaram ao optimismo global de que o controlo e a eliminação da TB estavam ao nosso alcance. No entanto, a TB continua a ser uma grave ameaça à saúde pública até hoje e é a segunda principal causa infecciosa de morte a nível mundial. 2, 3 De acordo com o relatório da OMS de 2015, estima-se que 9,6 milhões de novos casos de TB (12% dos quais co-infectados pelo VIH) e 1,5 milhões de mortes (das quais 0,4 milhões ocorreram entre pessoas co-infectadas pelo VIH) ocorreram globalmente em 2014.4 Além disso, estima-se que um terço da população mundial tenha infecção latente por Mtb (LTBI), da qual cerca de 10% desenvolverão TB activa durante a sua vida.5

Embora apenas 22 países de rendimento baixo ou médio (PRMB) representem 80% do fardo global, a TB ainda é uma doença importante entre as populações imigrantes em países de rendimento elevado. No Reino Unido (UK), as reduções na incidência de TB alcançadas no século XX foram revertidas com um aumento de 50% nas notificações de TB entre 1998 e 2009.6 Em 2013, foram notificados um total de 7.892 casos de TB equivalentes a uma incidência de 12,3 por 100.000 habitantes por ano, a mais elevada entre os países de rendimento elevado.7 Uma elevada proporção (37,8%) de casos de TB no Reino Unido ocorre em Londres, onde a taxa de incidência de TB é de 35,5 por 100.000 habitantes por ano; imigrantes da Índia (30%), Paquistão (20%) e Somália (5%) representaram a maioria destes casos.7

Actualmente, as principais estratégias no controlo da TB são o diagnóstico preciso e rápido da doença activa, juntamente com um tratamento eficaz para interromper a transmissão. No entanto, o diagnóstico tardio é um grande desafio que facilita a transmissão nas comunidades.8 Geralmente, são necessários vários meses desde o início dos sintomas até que o paciente com TB inicie o tratamento. Por exemplo, no Reino Unido, quase um terço dos pacientes com TB pulmonar iniciam o tratamento 4 meses após o início dos sintomas.7 Esses longos atrasos, juntamente com o grande conjunto de ILTB, sugerem a necessidade de intervenções para identificar e tratar indivíduos com ILTB para alcançar o controlo da TB. O tratamento antimicrobiano da ILTB (quimioprofilaxia) é eficaz na redução do risco de reativação e é implementado rotineiramente em ambientes de alta renda e baixa incidência. No entanto, a implementação desta política, especialmente em contextos de elevada carga, é dificultada pela falta de um teste de diagnóstico para identificar o subconjunto de indivíduos sensibilizados ao Mtb que estão em risco de desenvolver TB activa, aos quais a quimioprofilaxia deve ser direccionada.

Atualmente, o diagnóstico de ILTB é feito pela detecção de uma resposta imune adaptativa à infecção por Mtb, seja in vivo (usando o teste cutâneo tuberculínico) ou ex vivo (usando Ensaios de Liberação de Interferon-Gama [IGRAs]). Esta abordagem, que não detecta directamente o Mtb, é limitada porque não consegue distinguir os 10% de indivíduos sensibilizados que estão em risco de reactivação (nos quais a quimioprofilaxia pode ser benéfica) dos 90% que estão imunologicamente sensibilizados mas que não o fazem. progredir para doença ativa (nos quais a quimioprofilaxia não confere benefício). Este último grupo é potencialmente heterogêneo: alguns podem ter eliminado a infecção, enquanto outros podem ter ILTB, mas serem capazes de contê-la indefinidamente.9 Ferramentas para dissecar estes possíveis fenótipos poderiam permitir um direcionamento mais preciso da quimioprofilaxia, mas atualmente faltam. Neste estudo, os investigadores irão investigar se o Mtb pode ser detectado em células CD34+ isoladas do sangue periférico de a) adultos sendo examinados para ILTB (telegrafados de ILTB), eb) adultos com TB ativa recém-diagnosticada (casos ativos).

4.2. Justificativa para o estudo

Este estudo baseia-se em uma observação recente feita por um dos co-investigadores (Stephen Reece) que fazia parte de um grupo do Instituto Max Planck de Biologia de Infecções, em Berlim, que detectou DNA de Mtb em células-tronco hematopoéticas pluripotentes repovoantes CD34+ de longo prazo. (LTpHSCs) isolados de 100 ml de sangue periférico de sete adultos saudáveis ​​com ILTB (IGRA positivo, excluída TB ativa); O DNA do Mtb não foi detectado em LTpHSCs de sete adultos saudáveis ​​negativos para IGRA. 10 Se esta descoberta notável puder ser replicada noutro cenário, poderá levar ao desenvolvimento de um novo teste microbiológico («o ensaio PCR CD34+») com diversas aplicações potenciais:

a) identificar indivíduos que estão infectados de forma latente com Mtb resistente a antibióticos (permitindo a seleção de um regime de quimioprofilaxia apropriado), b) monitorar a eficácia da quimioprofilaxia e das intervenções destinadas a prevenir a aquisição de ILTB, como vacinas e programas de suplementação de micronutrientes, c ) rastrear a propagação de cepas específicas através de uma população (fornecendo uma ferramenta para intervenção de saúde pública), d) discriminar entre indivíduos sensibilizados ao Mtb que estão em risco de progressão para doença ativa versus aqueles que não o são, permitindo que a quimioprofilaxia seja direcionada às populações que dela possam beneficiar, e e) fornecer novos conhecimentos sobre a imunobiologia da ILTB e a patogénese da tuberculose humana.

4.3. Hipóteses

i) O DNA do Mtb pode ser detectado em PBMC CD34+ de adultos assintomáticos positivos para IGRA e casos ativos de TB no momento do diagnóstico, mas não em adultos negativos para IGRA.

ii) As cepas de Mtb isoladas de PBMC CD34+ de contatos de TB assintomáticos positivos para IGRA serão geneticamente idênticas àquelas isoladas do escarro de casos índice de TB pulmonar aos quais foram expostos recentemente.

iii) Capacidade de detectar DNA de Mtb em PBMC CD34+ de indivíduos examinados com ILTB associados a resultados de IGRA, bem como fatores de risco clínicos e epidemiológicos reconhecidos para ILTB iv) Capacidade de detectar DNA de Mtb em PBMC CD34+ de indivíduos com ILTB positivos para IGRA associados a assinaturas transcriptômicas de sangue periférico previamente definido como associado à progressão para TB ativa v) A terapia antimicrobiana é eficaz na eliminação do Mtb do CD34+ PBMC isoladas de indivíduos com ILTB ou TB ativa nos quais foi detectável no início do estudo; e que os resultados do ensaio de PCR CD34+ são reproduzíveis na repetição em pacientes com ILTB que não receberam quimioprofilaxia

5. Objetivos

5.1. Objetivo Primário

Para determinar se o DNA de M. tuberculosis (Mtb) pode ser detectado em células mononucleares do sangue periférico CD34+ (PBMC) isoladas de

• adultos assintomáticos submetidos a triagem de rotina para ILTB (examinados de ILTB)
• adultos com tuberculose ativa recentemente diagnosticada (casos ativos)

5.2. Objetivos Secundários

• Determinar se cepas de Mtb isoladas de PBMC CD34+ de contatos de TB são geneticamente idênticas àquelas isoladas do escarro de casos índice com TB pulmonar aos quais foram expostos
• Caracterizar os correlatos imunológicos, clínicos e epidemiológicos da capacidade de detectar Mtb em PBMC CD34 + em uma população heterogênea de pacientes com IGRA positivos e negativos para ILTB.
• Determinar se a presença de DNA de Mtb em PBMC CD34+ de examinados positivos para IGRA se associa à presença de uma assinatura transcricional de sangue periférico recentemente relatada como prevendo o risco de progressão para TB ativa11
• Para avaliar a mudança longitudinal nos resultados do ensaio de PCR CD34+ em
• Indivíduos examinados com ILTB completando quimioprofilaxia para ILTB
• Pessoas examinadas com ILTB que não receberam quimioprofilaxia
• pacientes que completam o tratamento para TB ativa

Desenho do Estudo e Visitas de Estudo

Os investigadores conduzirão um estudo longitudinal. Dois grupos de participantes serão recrutados: adultos sendo examinados para ILTB (rastreados para ILTB) e pacientes prestes a iniciar o tratamento para TB ativa (casos ativos). Os participantes do rastreio de ILTB são aqueles que estão a ser rastreados para ILTB como parte do tratamento padrão: incluem contactos recentes de um caso de TB com índice infeccioso, recém-chegados de países com elevado fardo de TB, profissionais de saúde submetidos a rastreio de saúde ocupacional e pacientes que estão prestes a ser submetidos a terapêutica imunossupressora. . Pacientes com TB ativa são aqueles que foram diagnosticados com TB ativa e estão prestes a iniciar a terapia anti-TB.

No início do estudo (Visita 1), os participantes que preencherem os critérios de inclusão e derem consentimento informado por escrito para participar do estudo serão solicitados a fornecer informações sociodemográficas, incluindo detalhes de idade, sexo e origem étnica, bem como detalhes do histórico de exposição à TB (incluindo exposição específica aos participantes com TB ativa inscritos no estudo) e outros dados clinicamente relevantes, todos os quais serão registrados em um Formulário de Relato de Caso (CRF). Um teste sorológico para HIV será realizado se ainda não estiver sendo feito como parte dos cuidados de rotina. Uma amostra de sangue de 120 ml (117 ml se o teste de HIV já tiver sido feito como parte dos cuidados de rotina) será coletada para IGRA (QFT-Plus), hemocultura para Mtb, análise de assinatura de risco de transcriptoma de sangue periférico e ensaio PCR CD34+ para DNA de Mtb na linha de base. Aos participantes IGRA-positivos nos quais a TB ativa foi excluída através de avaliação clínica e radiografia de tórax (parte do tratamento padrão) será oferecido um curso de 3 meses de quimioprofilaxia com rifampicina e isoniazida se preencherem os critérios para esta terapia (também parte do padrão cuidado).12

A comunicação de resultados positivos de testes de VIH será tratada de acordo com as recomendações das Diretrizes Nacionais do Reino Unido para Testes de VIH de 2008. Os resultados positivos do teste de HIV serão comunicados em entrevista presencial com um médico do estudo, na presença de uma enfermeira da clínica Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM) (o serviço local de HIV). Os participantes com teste HIV positivo serão encaminhados para a clínica GUM mais próxima para confirmação de seus resultados e tratamento adicional, conforme apropriado.

Aos 3 meses (Visita 2), serão registrados detalhes de prescrição e adesão à quimioprofilaxia, e uma segunda amostra de sangue (117 ml) será coletada para repetição de IGRA (QFT-Plus), hemocultura e ensaio de PCR CD34+. Para os participantes que fizeram quimioprofilaxia, um tubo Tempus também será retirado na Visita 2.

No início do estudo (Visita 1), os participantes que preencherem os critérios de inclusão e derem consentimento informado por escrito para participar do estudo serão solicitados a fornecer informações sociodemográficas básicas, incluindo detalhes de idade, sexo e origem étnica, bem como a duração dos sintomas, contato com qualquer examinado inscrito para LTBI e outros dados clinicamente relevantes, todos os quais serão registrados em um CRF. Sorologia para HIV, hemograma completo e baciloscopia de escarro e cultura para M.tuberculosis são realizados como parte dos cuidados de rotina neste grupo de pacientes. Uma amostra de sangue de 114 ml será coletada para IGRA (QFT-Plus), hemocultura para Mtb e ensaio de PCR CD34+ para DNA de Mtb no início do estudo. Os pacientes com TB serão tratados para doença ativa de acordo com as diretrizes do Reino Unido. 12

Após a conclusão da quimioterapia (Visita 2, geralmente aos 6 meses), serão registados detalhes da prescrição e adesão ao tratamento anti-TB e será recolhida uma segunda amostra de sangue (114 ml) para IGRA (QFT-Plus), hemocultura para Mtb e o ensaio de PCR CD34+.

Procedimentos de estudo

Procedimentos de convite e consentimento informado

Convite

Em Londres, o rastreio de ILTB utilizando um IGRA é habitualmente realizado em quatro grupos: contactos recentes de doentes com TB ativa; novos participantes provenientes de países com elevado fardo de TB; pacientes que estão prestes a iniciar terapias imunossupressoras; e profissionais de saúde submetidos a exames de saúde ocupacional. Os grupos em risco de ILTB podem inicialmente ser identificados em vários locais diferentes (clínica de TB, cuidados primários, clínicas de reumatologia, serviços de saúde ocupacional), mas todos são encaminhados para uma clínica de TB (contactos, novos utentes, pacientes prestes a iniciar terapêutica imunossupressora). ) ou ao Ambulatório de Saúde Ocupacional (trabalhadores de saúde em triagem de saúde ocupacional) para realização do exame de ILTB. Os rastreados de LTBI potencialmente elegíveis serão, portanto, identificados e recrutados para o estudo em clínicas de TB ou na Clínica de Saúde Ocupacional. Pacientes com TB ativa serão identificados e recrutados nas Clínicas de TB Barts Health NHS Trust.

Indivíduos potencialmente elegíveis serão informados sobre o estudo por enfermeiros ou médicos que trabalham em clínicas de TB ou clínicas de Saúde Ocupacional, que realizam exames de TB como parte dos cuidados clínicos habituais. Aqueles que manifestarem interesse no estudo receberão uma Ficha de Informações do Participante de um membro da equipe de atendimento clínico. Isto explicará os objetivos, métodos, benefícios previstos e riscos potenciais do estudo e será apresentado em linguagem não técnica, em inglês ou em outros idiomas, quando necessário. Aqueles que receberem uma Ficha de Informações do Participante serão solicitados a preencher um 'Título de Contato' fornecendo seus dados de contato e autorizando a equipe de pesquisa a entrar em contato com eles assim que tiverem a oportunidade de ler as informações; este 'Recibo de contato' será encaminhado à equipe de pesquisa pela equipe de atendimento habitual do participante.

Procedimentos de consentimento informado

O consentimento informado será conduzido de acordo com os procedimentos operacionais padrão da JRMO. O consentimento informado será obtido em sala privada por pessoal que tenha recebido formação específica em Boas Práticas Clínicas e obtenção de consentimento informado, que podem ser médicos, enfermeiros ou assistentes de investigação. Durante o processo de consentimento, os participantes serão informados de que a participação é voluntária e que podem recusar-se a participar do estudo ou desistir a qualquer momento durante o acompanhamento, por qualquer motivo.

Os participantes serão solicitados a indicar seu consentimento em participar assinando e imprimindo seu nome. Uma testemunha imparcial será obrigada a assinar o consentimento para aqueles que necessitam de um intérprete durante o processo de consentimento. Os participantes serão compensados ​​financeiramente pelas despesas de viagem associadas a cada visita.

Procedimentos de inscrição e acompanhamento

Recrutamento na linha de base

Os participantes potenciais serão avaliados quanto à elegibilidade com base nos critérios de inclusão e exclusão declarados acima. Após o processo de consentimento e depois que um participante der consentimento informado por escrito para participar, um número de identificação exclusivo será atribuído. A avaliação da elegibilidade para participar será realizada por pessoal devidamente treinado, que pode ser médico, enfermeiro ou assistente de pesquisa.

Procedimento de coleta de dados

Usando um CRF, na Visita 1 (V1), todos os participantes serão solicitados a fornecer informações sociodemográficas e histórico médico, incluindo histórico de medicação. Os examinados de ILTB serão solicitados a fornecer detalhes sobre a exposição recente e anterior a pacientes com TB, histórico de TB e outros possíveis determinantes de ILTB, como proximidade física de pacientes com TB ativa, duração média diária da exposição, bem como duração total da exposição aos casos-índice. . Os CRFs também incluirão os seguintes dados: lista de verificação de critérios de elegibilidade, resultados de exames clínicos e laboratoriais iniciais e informações coletadas durante o acompanhamento, incluindo detalhes de retirada, se aplicável. Os membros da equipe do projeto responsáveis ​​pelo preenchimento dos CRFs, que podem ser bolsistas de pesquisa ou trabalhadores de campo, serão listados em um registro de delegação.

Coleta de amostras de base e avaliações laboratoriais

As amostras serão coletadas conforme detalhado na Figura 1 e Tabelas 1 e 2, e as análises laboratoriais serão realizadas conforme detalhado nas Tabelas 3 e 4. Quando os testes são realizados como parte dos cuidados de rotina (por ex. hemograma completo para pacientes com TB ativa, sorologia para HIV para pacientes com TB ativa e exames de ILTB positivos para IGRA), os resultados serão acessados ​​via CRS e documentados no CRF. Os participantes do teste de ILTB negativo para IGRA e os participantes não expostos receberão um teste de HIV na Visita 1.

Para investigar se as cepas de Mtb isoladas de PBMC CD34+ de contatos de TB correspondem àquelas isoladas do escarro de casos-índice aos quais foram expostos, amostras de escarro serão coletadas de 10 pacientes com TB ativa índice que tenham contatos positivos para ensaio de PCR CD34+ inscritos no estudo, e a análise de sequenciamento do genoma completo será realizada em isolados cultivados a partir dessas amostras. Com base nesta análise, primers para criar bibliotecas de amplicons Mtb serão projetados usando abordagens bioinformáticas para capturar a diversidade de cepas. Esses primers serão então usados ​​para gerar bibliotecas de amplicons de Mtb a partir de células CD34+ contendo DNA genômico de Mtb isolado de contatos de TB. Essas bibliotecas serão então sequenciadas e comparadas com o genoma do Mtb do caso índice para determinar se as cepas isoladas dos casos índice e contatos correspondem.

Os participantes com testes de HIV/IGRAs positivos serão encaminhados para clínicas de HIV/TB, respectivamente, para avaliação adicional. Onde testes de HIV e IGRAs foram realizados para fins de pesquisa (ou seja, onde não fazem parte dos cuidados de rotina), a equipe de pesquisa comunicará esses resultados aos participantes quando estiverem disponíveis.

Procedimentos de acompanhamento

• Rastreados LTBI: As visitas e avaliações de acompanhamento estão detalhadas na Figura 1, Tabela 1 e Tabela 3. Os participantes comparecerão à visita 2 em 3 meses (visita 2, V2). Os participantes que completaram a quimioprofilaxia farão uma avaliação clínica de rotina após a conclusão do tratamento. Aqueles que não fazem quimioprofilaxia também serão acompanhados 3 meses após V1. Além de preencher um CRF detalhando sintomas de TB ativa (todos os participantes) e adesão à quimioprofilaxia (aqueles que recebem quimioprofilaxia), uma amostra de sangue de 117 ml será coletada para análise imunológica e molecular conforme detalhado na seção 13.3 abaixo. Ao término da segunda visita, a participação no estudo será encerrada.
• Pacientes com TB ativa: As visitas e o acompanhamento estão detalhados na Figura 1, Tabela 2 e Tabela 4. Os participantes em tratamento anti-TB terão uma avaliação clínica de rotina após a conclusão do tratamento e uma segunda amostra de sangue de 114 ml será coletada durante esta visita para análise imunológica e molecular conforme detalhado na seção 13.3 abaixo. Ao completar a segunda visita, a participação no estudo será encerrada.

Os resultados do teste PCR CD34+ não serão utilizados para orientar o manejo clínico, pois este teste é uma ferramenta de pesquisa nas fases iniciais de desenvolvimento e seus resultados não foram correlacionados com nenhum desfecho clínico.

Retirada de participante

Os participantes serão retirados se retirarem o seu consentimento para participar ou se se concluir que a retirada é do melhor interesse do participante. Os participantes também serão considerados retirados se não comparecerem à segunda visita agendada do estudo, apesar dos lembretes por escrito e por telefone. Caso um participante desista do estudo, o motivo da desistência será registrado no CRF.

Os dados coletados até o momento da retirada serão incluídos nas análises do estudo, a menos que solicitado de outra forma por um participante. Quaisquer amostras clínicas colhidas antes da retirada do participante serão usadas para análises do estudo.

Definição de fim de estudo

O estudo terminará quando todas as avaliações clínicas e laboratoriais forem concluídas para todos os participantes que participam do acompanhamento.

9. Considerações Estatísticas

9.1 Tamanho da amostra

O principal objetivo deste estudo é validar e ampliar os resultados de outro cenário em que o DNA genômico do Mtb foi detectado em células CD34+ isoladas do sangue periférico de sete adultos assintomáticos positivos para IGRA.10 Para atingir este objetivo, um total de 100 examinados de LTBI serão recrutados para o estudo transversal (20 participantes por variável independente a ser testada na análise de regressão). Prevê-se que aproximadamente cinquenta destes participantes serão IGRA-positivos, dos quais aproximadamente quarenta receberão quimioprofilaxia prescrita: o acompanhamento de 25 destes participantes dará poder >80% ao nível de significância de 5% para demonstrar uma redução na proporção de indivíduos CD34+ positivos para PCR de 80% no início do estudo para 30% no acompanhamento.

10. Considerações Éticas

Antes do início do estudo, será solicitada a aprovação do NHS REC para o protocolo do estudo, formulários de consentimento informado e outros documentos relevantes. O estudo não começará até que as aprovações necessárias sejam obtidas do comitê de ética e uma 'luz verde' seja dada para ativar os locais pelo patrocinador. O CI garantirá que este estudo seja conduzido de acordo com a Declaração de Helsinque (2013) e os princípios éticos do Quadro de Governança de Pesquisa para Saúde e Assistência Social, Segunda Edição, 2005 e suas alterações subsequentes. As decisões sobre se uma alteração constitui uma alteração menor ou substancial caberão ao patrocinador. Alterações substanciais que exijam revisão pelo REC não serão implementadas até que sejam aprovadas pelo órgão relevante. Toda a correspondência com o Patrocinador e o REC será mantida no Arquivo Mestre do estudo. O CI notificará o REC e o Patrocinador no final do estudo.

O consentimento informado por escrito será obtido dos participantes por uma pessoa devidamente treinada (que pode ser um médico, enfermeiro ou assistente de pesquisa) antes da participação neste estudo. Fichas informativas serão disponibilizadas em inglês e em outros idiomas, quando necessário. Os potenciais participantes receberão a ficha de informações e os objetivos, métodos, benefícios previstos e riscos potenciais do estudo serão explicados. Durante o processo de consentimento, os participantes serão explicados que a participação é voluntária e podem recusar-se a entrar no estudo ou desistir a qualquer momento durante o acompanhamento, por qualquer motivo.

Conflito de interesses

Não foram identificados quaisquer interesses financeiros ou outros interesses concorrentes para o IC ou qualquer co-investigador.

11. Considerações de Segurança

Como o estudo é observacional, o risco de eventos adversos relacionados ao estudo é insignificante. No entanto, qualquer evento adverso considerado relacionado ao estudo será relatado ao patrocinador dentro de 24 horas. O volume de sangue a ser coletado (até 120 ml) pode ser considerado grande por alguns participantes, mas os adultos que doam sangue geralmente dão 500 ml de cada vez sem sofrer de anemia. Os investigadores, portanto, não prevêem nenhum evento adverso relacionado à coleta deste volume de sangue. As informações sobre o volume da amostra de sangue e se isso terá alguma consequência indesejada para a saúde serão explicadas aos participantes na ficha informativa. Todos os pacientes com TB serão examinados para anemia como parte de seus cuidados clínicos habituais e aqueles com nível de hemoglobina abaixo de 10 g/dl na entrada serão excluídos. Além disso, as seguintes medidas serão tomadas para minimizar possíveis inconvenientes, desconforto e riscos que os participantes possam experimentar durante o curso deste estudo:

- uso de pessoal devidamente treinado para realizar flebotomia

12. Tratamento de dados e manutenção de registros

12.1. Confidencialidade

As Informações de Saúde Protegidas (PHI) necessárias para a condução e análise do estudo serão coletadas para todos os participantes selecionados para o estudo; essas informações incluirão o nome de cada participante, data de nascimento, sexo, endereço, número de telefone, número de registro médico, se aplicável, endereço de e-mail, se aplicável, e origem étnica. A equipe do estudo que necessitar de acesso às PHI para conduzir ou analisar o estudo será listada em um registro de delegação. As PHI permanecerão confidenciais e serão tratadas, processadas, armazenadas e destruídas de acordo com a Lei de Proteção de Dados de 1998. Os participantes manterão o direito de revogar sua autorização para o uso de suas PHI a qualquer momento durante o estudo. Todos os participantes serão anonimizados nas publicações decorrentes deste estudo. Os dados serão pseudo-anonimizados da seguinte forma. As PHI serão mantidas em um banco de dados seguro vinculado a um código de identificação exclusivo. As informações clínicas serão mantidas em um banco de dados seguro separado, vinculado ao mesmo código de identificação exclusivo. O IC e os co-investigadores terão acesso ao conjunto de dados final do estudo pseudo-anonimizado.

Durante o curso da pesquisa, todos os registros serão de responsabilidade do CI e serão mantidos em condições seguras. Quando o estudo estiver concluído, é exigência do patrocinador que os registros e dados sejam mantidos por mais 20 anos. O CI atuará como o 'Custodiante' dos dados da pesquisa. O acesso às PHI será limitado ao número mínimo de indivíduos necessários para a condução do estudo, controle de qualidade, auditoria e análise. O seguinte incluirá documentos de origem: registros de triagem, consentimento informado e CRF em papel. Todos os documentos originais serão armazenados de forma segura em arquivos trancados. A transferência e o transporte de dados serão conduzidos de acordo com a Lei de Proteção de Dados do Reino Unido de 1998. As informações de identificação pessoal não serão armazenadas, transportadas ou enviadas de ou para qualquer dispositivo portátil, a menos que esse dispositivo seja criptografado.

12.2. Coleta, Gravação e Tratamento de Dados

Formulários de consentimento assinados e documentos em papel contendo dados de origem serão armazenados com segurança. Os dados do estudo serão inseridos em um banco de dados no software EpiData Entry. O pessoal receberá formação adequada para utilizar a base de dados para introdução de dados. Os dados laboratoriais serão inseridos no banco de dados.

O CI e os co-investigadores terão acesso aos dados do estudo durante o estudo. A equipe do estudo que precisar desse acesso para conduzir o estudo também terá o acesso necessário. O acesso aos dados do estudo durante o estudo também será concedido a representantes autorizados do Patrocinador, da instituição anfitriã e das autoridades reguladoras, conforme necessário.

12.3. Controle de Qualidade e Garantia de Qualidade

A documentação do estudo será disponibilizada aos representantes do Patrocinador e do REC para controle e garantia de qualidade, conforme solicitado.

13. Laboratórios

13.1. Coleta, rotulagem e processamento de amostras

Amostras de sangue serão coletadas pela equipe do estudo, etiquetadas com a identificação do participante e datadas. Os tubos Tempus serão agitados vigorosamente imediatamente após a coleta de acordo com as recomendações do fabricante. As amostras para hemocultura e sorologia para HIV serão transportadas para Laboratórios Centrais para processamento. As amostras de sangue restantes serão transportadas para o Instituto Blizard, onde será informada a data e hora de recebimento da amostra, bem como a condição da amostra (por exemplo. não coagulado) será registrado em um registro de laboratório. As amostras para o teste QFT-Plus serão incubadas a 37°C logo após o recebimento das amostras por 18 horas, antes da centrifugação e aspiração dos sobrenadantes que serão armazenados a -80°C enquanto se aguarda a análise da concentração de IFN-gama. Amostras de sangue em tubos Tempus serão armazenadas a -80 °C em um rack rotulado enquanto se aguarda o transporte para a Divisão de Infecção e Imunidade da University College London para extração de RNA e perfil de expressão gênica. As PBMC serão separadas da amostra restante (100 ml), com posterior isolamento de células CD34+ usando classificação de esferas magnéticas. A pureza das células CD34+ isoladas será verificada por citometria de fluxo.