Evaluierung eines neuartigen mikrobiologischen Diagnosetests für latente Mycobacterium Tuberculosis-Infektionen (MICRO-LTBI)

Ziele:

i) Um festzustellen, ob M. tuberculosis (Mtb)-DNA in isolierten CD34+-mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMC) nachgewiesen werden kann

• asymptomatische Erwachsene, die auf LTBI untersucht werden (LTBI-Screenees)
• Erwachsene mit neu diagnostizierter aktiver Tuberkulose (aktive Fälle) ii) Bestimmung, ob Mtb-Stämme, die aus CD34+ PBMC von kürzlich in Haushalten mit Tuberkulose in Berührung gekommenen Kontakten isoliert wurden, genetisch mit denen identisch sind, die aus dem Sputum von Indexfällen mit Lungentuberkulose isoliert wurden, denen sie ausgesetzt waren iii ) Zur Charakterisierung immunologischer, klinischer und epidemiologischer Korrelate der Fähigkeit, Mtb in CD34+ PBMC in einer heterogenen Population von IGRA-positiven und -negative LTBI-Screenees.

iv) Um festzustellen, ob das Vorhandensein von Mtb-DNA in CD34+-PBMC von IGRA-positiven LTBI-Screeningteilnehmern mit dem Vorhandensein einer Transkriptionssignatur im peripheren Blut zusammenhängt, von der kürzlich berichtet wurde, dass sie das Risiko einer Progression zu aktiver TB vorhersagt. v) Um die Längsveränderung der Ergebnisse des CD34+-PCR-Assays zu beurteilen

- LTBI-Untersuchungsteilnehmer, die eine Chemoprophylaxe für LTBI abschließen

• LTBI-Screeningteilnehmer, die keine Chemoprophylaxe erhalten
• Patienten, die eine Behandlung wegen aktiver Tuberkulose abschließen

4.1. Hintergrund

Tuberkulose (TB) ist eine Infektionskrankheit, die durch Organismen des M. tuberculosis-Komplexes (MTBC) verursacht wird. Der Haupterreger beim Menschen ist M.tuberculosis (Mtb). Tuberkulose befällt häufig die Lunge und wird durch das Einatmen infektiöser Tröpfchen übertragen, die ein Patient mit aktiver Lungentuberkulose ausspuckt. Tuberkulose war in der gesamten Menschheitsgeschichte eine der Hauptursachen für Morbidität und Mortalität. In Europa und Nordamerika folgte auf einen Anstieg der Tuberkulosefälle im 17. und 18. Jahrhundert ein rascher Rückgang, der hauptsächlich auf verbesserte sozioökonomische Bedingungen, die Anwendung öffentlicher Gesundheitsmaßnahmen und die Isolierung von Tuberkulosepatienten zurückzuführen war.1 Gegen Ende des 19. Jahrhunderts Nach dem rückläufigen Trend bei TB-Fällen und -Todesfällen in Europa und Nordamerika wurden zwei wichtige Ereignisse, die Entdeckung von MTB und Röntgen, für die Diagnose und Behandlung von TB von entscheidender Bedeutung.1 Anschließend erfolgte die Impfung mit M. bovis bacille Calmette-Guérin (BCG) und die Behandlung mit Antibiotika führten in der ersten Hälfte des 20. Jahrhunderts weltweit zu dem Optimismus, dass die Kontrolle und Eliminierung der Tuberkulose in greifbare Nähe gerückt sei. Dennoch stellt Tuberkulose bis heute eine ernsthafte Bedrohung für die öffentliche Gesundheit dar und ist weltweit die zweithäufigste infektiöse Todesursache. 2, 3 Dem WHO-Bericht von 2015 zufolge kam es im Jahr 2014 weltweit zu schätzungsweise 9,6 Millionen neuen Tuberkulosefällen (12 % davon waren HIV-Koinfizierte) und 1,5 Millionen Todesfällen (davon 0,4 Millionen bei HIV-Koinfizierten).4 Darüber hinaus leidet schätzungsweise ein Drittel der Weltbevölkerung an einer latenten Mtb-Infektion (LTBI), von denen etwa 10 % im Laufe ihres Lebens eine aktive Tuberkulose entwickeln werden.5

Obwohl nur 22 Länder mit niedrigem oder mittlerem Einkommen (LMICs) 80 % der weltweiten Belastung ausmachen, ist Tuberkulose immer noch eine wichtige Krankheit unter Einwanderern in Ländern mit hohem Einkommen. Im Vereinigten Königreich (UK) haben sich die im 20. Jahrhundert erzielten Rückgänge der Tuberkulose-Inzidenz umgekehrt, und zwischen 1998 und 2009 kam es zu einem Anstieg der Tuberkulose-Meldungen um 50 %.6 Im Jahr 2013 wurden insgesamt 7.892 Tuberkulosefälle gemeldet, was einer Inzidenz von 12,3 pro 100.000 Einwohner pro Jahr entspricht, der höchsten unter den Ländern mit hohem Einkommen.7 Ein hoher Anteil (37,8 %) der TB-Fälle im Vereinigten Königreich findet sich in London, wo die Tuberkulose-Inzidenzrate 35,5 pro 100.000 Einwohner pro Jahr beträgt; Die Mehrzahl dieser Fälle waren Einwanderer aus Indien (30 %), Pakistan (20 %) und Somalia (5 %).7

Derzeit sind die Schlüsselstrategien bei der Tuberkulosebekämpfung die genaue und schnelle Diagnose einer aktiven Erkrankung sowie eine wirksame Behandlung zur Unterbrechung der Übertragung. Eine verspätete Diagnose stellt jedoch eine große Herausforderung dar und erleichtert die Übertragung in Gemeinden.8 Im Allgemeinen vergehen vom Auftreten der Symptome bis zum Beginn der Behandlung bei einem Tuberkulosepatienten mehrere Monate. Im Vereinigten Königreich beispielsweise beginnt fast ein Drittel der Patienten mit Lungentuberkulose vier Monate nach Auftreten der Symptome mit der Behandlung.7 Solche langen Verzögerungen in Verbindung mit dem großen Pool an LTBI legen die Notwendigkeit von Interventionen zur Identifizierung und Behandlung von Personen mit LTBI nahe, um eine TB-Kontrolle zu erreichen. Die antimikrobielle Behandlung von LTBI (Chemoprophylaxe) verringert wirksam das Risiko einer Reaktivierung und wird routinemäßig in Umgebungen mit hohem Einkommen und geringer Inzidenz eingesetzt. Allerdings wird die Umsetzung dieser Richtlinie, insbesondere in Umgebungen mit hoher Belastung, durch das Fehlen eines diagnostischen Tests zur Identifizierung der Untergruppe von Mtb-sensibilisierten Personen erschwert, bei denen das Risiko einer aktiven Tuberkulose besteht und auf die eine Chemoprophylaxe ausgerichtet sein sollte.

Derzeit wird die Diagnose von LTBI durch den Nachweis einer adaptiven Immunantwort auf eine Mtb-Infektion gestellt, entweder in vivo (mittels Tuberkulin-Hauttest) oder ex vivo (mittels Interferon-Gamma-Release-Assays [IGRAs]). Dieser Ansatz, der Mtb nicht direkt erkennt, ist insofern eingeschränkt, als er nicht zwischen den 10 % der sensibilisierten Personen, bei denen das Risiko einer Reaktivierung besteht (bei denen eine Chemoprophylaxe von Nutzen sein kann), von den 90 %, die zwar immunologisch sensibilisiert sind, aber nicht unterscheiden können Fortschreiten zu einer aktiven Erkrankung (bei denen eine Chemoprophylaxe keinen Nutzen bringt). Diese letztere Gruppe ist potenziell heterogen: Einige haben die Infektion möglicherweise eliminiert, während andere möglicherweise an LTBI leiden, diese aber auf unbestimmte Zeit eindämmen können.9 Werkzeuge zur Analyse dieser möglichen Phänotypen könnten eine präzisere Ausrichtung der Chemoprophylaxe ermöglichen, aber sie fehlen derzeit. In dieser Studie werden die Forscher untersuchen, ob Mtb in isolierten CD34+-Zellen nachgewiesen werden kann peripheres Blut von a) Erwachsenen, die auf LTBI untersucht werden (LTBI-Screenees), und b) Erwachsenen mit neu diagnostizierter aktiver Tuberkulose (aktive Fälle).

4.2. Begründung für die Studie

Diese Studie baut auf einer aktuellen Beobachtung eines der Co-Forscher (Stephen Reece) auf, der Teil einer Gruppe am Max-Planck-Institut für Infektionsbiologie in Berlin war, die Mtb-DNA in CD34+-langfristig repopulierenden pluripotenten hämatopoetischen Stammzellen nachgewiesen hat (LTpHSCs), isoliert aus 100 ml peripherem Blut von sieben gesunden Erwachsenen mit LTBI (positiver IGRA, aktive TB ausgeschlossen); In LTpHSCs von sieben IGRA-negativen gesunden Erwachsenen wurde keine Mtb-DNA nachgewiesen. 10 Wenn dieser bemerkenswerte Befund in einer anderen Umgebung reproduziert werden kann, könnte dies zur Entwicklung eines neuartigen mikrobiologischen Tests („CD34+ PCR-Assay“) mit mehreren potenziellen Anwendungen führen:

a) um Personen zu identifizieren, die latent mit antibiotikaresistentem Mtb infiziert sind (was die Auswahl eines geeigneten Chemoprophylaxe-Regimes ermöglicht), b) um die Wirksamkeit der Chemoprophylaxe und von Interventionen zur Verhinderung des Erwerbs von LTBI zu überwachen, wie z. B. Impfstoffe und Programme zur Mikronährstoffergänzung, c ) um die Ausbreitung bestimmter Stämme in einer Bevölkerung zu verfolgen (und so ein Instrument für Interventionen im Bereich der öffentlichen Gesundheit bereitzustellen), d) um zwischen Mtb-sensibilisierten Personen zu unterscheiden, die einem Risiko ausgesetzt sind Progression zu einer aktiven Erkrankung im Vergleich zu denen, bei denen dies nicht der Fall ist, wodurch die Chemoprophylaxe gezielt auf Bevölkerungsgruppen ausgerichtet werden kann, die davon profitieren könnten, und e) um neue Einblicke in die Immunbiologie von LTBI und die Pathogenese menschlicher Tuberkulose zu gewinnen.

4.3. Hypothesen

i) Mtb-DNA kann in CD34+ PBMC asymptomatischer IGRA-positiver Erwachsener und aktiver Tuberkulosefälle zum Zeitpunkt der Diagnose nachgewiesen werden, jedoch nicht bei IGRA-negativen Erwachsenen.

ii) Mtb-Stämme, die aus CD34+ PBMC von asymptomatischen IGRA-positiven TB-Kontakten isoliert wurden, sind genetisch identisch mit denen, die aus dem Sputum von Indexfällen mit Lungen-TB isoliert wurden, denen sie kürzlich ausgesetzt waren.

iii) Die Fähigkeit zum Nachweis von Mtb-DNA in CD34+ PBMC von LTBI-Screeningteilnehmern steht im Zusammenhang mit IGRA-Ergebnissen sowie anerkannten klinischen und epidemiologischen Risikofaktoren für LTBI. iv) Die Fähigkeit zum Nachweis von Mtb-DNA in CD34+ PBMC von IGRA-positiven LTBI-Screeningteilnehmern steht im Zusammenhang mit transkriptomischen Signaturen des peripheren Bluts zuvor definiert, dass sie mit dem Fortschreiten zu aktiver Tuberkulose assoziiert sind v) Eine antimikrobielle Therapie ist wirksam bei der Eliminierung von Mtb CD34+ PBMC, isoliert von Personen mit LTBI oder aktiver Tuberkulose, bei denen es zu Studienbeginn nachweisbar war; und dass die Ergebnisse des CD34+-PCR-Assays bei Wiederholung bei LTBI-Screeningteilnehmern, die keine Chemoprophylaxe erhalten haben, reproduzierbar sind

5. Ziele

5.1. Hauptziel

Um festzustellen, ob M. tuberculosis (Mtb)-DNA in isolierten CD34+-mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMC) nachgewiesen werden kann

• asymptomatische Erwachsene, die sich einem Routine-Screening auf LTBI unterziehen (LTBI-Screenees)
• Erwachsene mit neu diagnostizierter aktiver Tuberkulose (aktive Fälle)

5.2. Sekundäre Ziele

• Es sollte festgestellt werden, ob Mtb-Stämme, die aus CD34+ PBMC von TB-Kontakten isoliert wurden, genetisch mit denen identisch sind, die aus dem Sputum von Indexfällen mit Lungentuberkulose isoliert wurden, denen sie ausgesetzt waren
• Charakterisierung immunologischer, klinischer und epidemiologischer Korrelate der Fähigkeit, Mtb in CD34+ PBMC in einer heterogenen Population von IGRA-positiven und -negativen LTBI-Screeningteilnehmern nachzuweisen.
• Es sollte festgestellt werden, ob das Vorhandensein von Mtb-DNA in CD34+ PBMC von IGRA-positiven Screening-Probanden mit dem Vorhandensein einer Transkriptionssignatur im peripheren Blut zusammenhängt, von der kürzlich berichtet wurde, dass sie das Risiko einer Progression zu aktivem TB11 vorhersagt
• Zur Beurteilung der Längsveränderung der CD34+-PCR-Assay-Ergebnisse in
• LTBI-Untersuchungsteilnehmer schließen die Chemoprophylaxe für LTBI ab
• LTBI-Screeningteilnehmer, die keine Chemoprophylaxe erhalten
• Patienten, die eine Behandlung wegen aktiver Tuberkulose abschließen

Studiendesign und Studienbesuche

Die Forscher werden eine Längsschnittstudie durchführen. Es werden zwei Gruppen von Teilnehmern rekrutiert: Erwachsene, die auf LTBI untersucht werden (LTBI-Screenees), und Patienten, die kurz vor der Einleitung einer Behandlung wegen aktiver Tuberkulose stehen (aktive Fälle). Unter LTBI-Screeningteilnehmern versteht man diejenigen, die im Rahmen der Standardversorgung auf LTBI untersucht werden: Dazu gehören aktuelle Kontaktpersonen eines infektiösen Index-TB-Falls, Neueinsteiger aus Ländern mit hoher Tuberkulose-Belastung, Gesundheitspersonal, das sich einem arbeitsmedizinischen Screening unterzieht, und Patienten, die kurz vor einer immunsuppressiven Therapie stehen . Patienten mit aktiver Tuberkulose sind diejenigen, bei denen eine aktive Tuberkulose diagnostiziert wurde und die kurz vor der Einnahme einer Anti-TB-Therapie stehen.

Zu Studienbeginn (Besuch 1) werden Teilnehmer, die die Einschlusskriterien erfüllen und eine schriftliche Einverständniserklärung zur Teilnahme an der Studie geben, gebeten, soziodemografische Informationen anzugeben, einschließlich Angaben zu Alter, Geschlecht und ethnischer Herkunft sowie Einzelheiten zur Tuberkulose-Expositionsgeschichte (einschließlich spezifischer Exposition). an Teilnehmer mit aktiver Tuberkulose, die in die Studie aufgenommen wurden) und andere klinisch relevante Daten, die alle auf einem Fallberichtsformular (CRF) aufgezeichnet werden. Sofern dies nicht bereits im Rahmen der Routineversorgung erfolgt, wird ein serologischer HIV-Test durchgeführt. Eine Blutprobe von 120 ml (117 ml, wenn der HIV-Test bereits im Rahmen der Routineversorgung durchgeführt wird) wird für IGRA (QFT-Plus), eine Blutkultur für Mtb, eine Risikosignaturanalyse des peripheren Bluttranskriptoms und den CD34+-PCR-Assay für Mtb-DNA entnommen zu Beginn. IGRA-positiven Teilnehmern, bei denen eine aktive Tuberkulose mittels klinischer Untersuchung und Röntgenaufnahme des Brustkorbs (Teil der Standardversorgung) ausgeschlossen wurde, wird eine dreimonatige Kur mit Rifampicin- und Isoniazid-Chemoprophylaxe angeboten, wenn sie die Kriterien für diese Therapie erfüllen (ebenfalls Teil der Standardversorgung). Pflege).12

Die Mitteilung positiver HIV-Testergebnisse erfolgt gemäß den Empfehlungen der britischen National Guidelines for HIV Testing 2008. Positive HIV-Testergebnisse werden in einem persönlichen Gespräch mit einem Studienarzt in Anwesenheit einer Krankenschwester der Barts Health NHS Trust Genito-Urinary Medicine (GUM)-Klinik (dem örtlichen HIV-Dienst) mitgeteilt. Teilnehmer, die HIV-positiv getestet wurden, werden zur Bestätigung ihrer Ergebnisse und gegebenenfalls zur weiteren Behandlung an die nächstgelegene GUM-Klinik überwiesen.

Nach 3 Monaten (Besuch 2) werden Einzelheiten zur Verschreibung und Einhaltung der Chemoprophylaxe aufgezeichnet und eine zweite Blutprobe (117 ml) wird für wiederholte IGRA (QFT-Plus), Blutkultur und CD34+-PCR-Assay entnommen. Bei Teilnehmern, die eine Chemoprophylaxe erhalten haben, wird bei Besuch 2 auch ein Tempus-Röhrchen entnommen.

Zu Studienbeginn (Besuch 1) werden Teilnehmer, die die Einschlusskriterien erfüllen und eine schriftliche Einverständniserklärung zur Teilnahme an der Studie geben, gebeten, grundlegende soziodemografische Informationen anzugeben, einschließlich Angaben zu Alter, Geschlecht und ethnischer Herkunft sowie der Dauer ihrer Symptome und dem Kontakt mit anderen eingeschriebener LTBI-Screenee und andere klinisch relevante Daten, die alle in einem CRF aufgezeichnet werden. HIV-Serologie, großes Blutbild sowie Sputumabstrich-Mikroskopie und Untersuchung auf M.tuberculosis gehören zur Routineversorgung dieser Patientengruppe. Zu Studienbeginn wird eine 114-ml-Blutprobe für IGRA (QFT-Plus), eine Blutkultur für Mtb und den CD34+-PCR-Assay für Mtb-DNA entnommen. TB-Patienten werden gemäß den britischen Richtlinien wegen aktiver Erkrankung behandelt. 12

Nach Abschluss der Chemotherapie (Besuch 2, normalerweise nach 6 Monaten) werden Einzelheiten zur Verschreibung und Einhaltung der Anti-TB-Behandlung aufgezeichnet und eine zweite Blutprobe (114 ml) für die IGRA (QFT-Plus)-Blutkultur entnommen für Mtb und den CD34+ PCR-Assay.

Studienabläufe

Einladungs- und Einwilligungsverfahren

Einladung

In London wird das Screening auf LTBI mithilfe eines IGRA üblicherweise in vier Gruppen durchgeführt: jüngste Kontakte aktiver Tuberkulosepatienten; Neueinsteiger aus Ländern mit hoher TB-Belastung; Patienten, die kurz vor dem Beginn einer immunsuppressiven Therapie stehen; und Gesundheitspersonal, das sich einem arbeitsmedizinischen Screening unterzieht. Gruppen mit einem LTBI-Risiko können zunächst in verschiedenen Umgebungen identifiziert werden (TB-Klinik, Grundversorgung, Rheumatologie-Kliniken, arbeitsmedizinische Dienste), aber sie werden alle entweder an eine Tuberkulose-Klinik überwiesen (Kontakte, Neueinsteiger, Patienten, die kurz vor dem Beginn einer immunsuppressiven Therapie stehen). ) oder an die Arbeitsmedizinische Klinik (Gesundheitspersonal, das sich einem arbeitsmedizinischen Screening unterzieht) zur Durchführung eines LTBI-Screenings. Potenziell geeignete LTBI-Screeningteilnehmer werden daher identifiziert und für die Studie in Tuberkulosekliniken oder der Arbeitsmedizinischen Klinik rekrutiert. Patienten mit aktiver Tuberkulose werden in den TB-Kliniken des Barts Health NHS Trust identifiziert und rekrutiert.

Potenziell berechtigte Personen werden von Krankenschwestern oder Ärzten, die in Tuberkulosekliniken oder arbeitsmedizinischen Kliniken arbeiten und im Rahmen der üblichen klinischen Versorgung Tuberkulose-Screenings durchführen, über die Studie informiert. Wer Interesse an der Studie bekundet, erhält von einem Mitglied des klinischen Betreuungsteams ein Teilnehmerinformationsblatt. Darin werden die Ziele, Methoden, erwarteten Vorteile und potenziellen Gefahren der Studie erläutert und in nichttechnischer Sprache entweder auf Englisch oder bei Bedarf in anderen Sprachen präsentiert. Diejenigen, die ein Teilnehmerinformationsblatt ausfüllen, werden gebeten, einen „Kontaktzettel“ auszufüllen, in dem sie ihre Kontaktdaten angeben und das Forschungsteam ermächtigen, mit ihnen Kontakt aufzunehmen, sobald sie Gelegenheit hatten, die Informationen zu lesen; Dieser „Kontaktzettel“ wird vom üblichen Betreuungsteam des Teilnehmers an das Forschungsteam weitergeleitet.

Verfahren zur Einwilligung nach Aufklärung

Die Einverständniserklärung wird gemäß den JRMO-Standardarbeitsanweisungen durchgeführt. Die Einverständniserklärung wird in einem privaten Raum von Personal eingeholt, das eine spezielle Schulung in guter klinischer Praxis und der Einholung einer Einverständniserklärung erhalten hat, bei denen es sich um Ärzte, Krankenschwestern oder Forschungsassistenten handeln kann. Während des Einwilligungsverfahrens werden die Teilnehmer darauf hingewiesen, dass die Teilnahme freiwillig ist und dass sie die Teilnahme an der Studie jederzeit aus beliebigen Gründen verweigern oder aus der Studie austreten können.

Die Teilnehmer werden gebeten, ihr Einverständnis zur Teilnahme durch Unterschrift und Ausdruck ihres Namens zu erklären. Für diejenigen, die während des Einwilligungsverfahrens einen Dolmetscher benötigen, ist ein unparteiischer Zeuge erforderlich, um die Einwilligung gegenzuzeichnen. Die mit jedem Besuch verbundenen Reisekosten werden den Teilnehmern finanziell erstattet.

Anmelde- und Nachbereitungsverfahren

Rekrutierung zu Studienbeginn

Potenzielle Teilnehmer werden anhand der oben genannten Einschluss- und Ausschlusskriterien auf ihre Eignung geprüft. Nach dem Einwilligungsprozess und nachdem ein Teilnehmer eine schriftliche Einverständniserklärung zur Teilnahme abgegeben hat, wird eine eindeutige ID-Nummer zugewiesen. Die Beurteilung der Teilnahmeberechtigung wird von entsprechend geschultem Personal durchgeführt, bei dem es sich um Ärzte, Krankenschwestern oder wissenschaftliche Mitarbeiter handeln kann.

Datenerfassungsverfahren

Unter Verwendung eines CRF werden bei Besuch 1 (V1) alle Teilnehmer gebeten, soziodemografische Informationen und eine Krankengeschichte einschließlich der Medikamentengeschichte anzugeben. LTBI-Untersuchungsteilnehmer werden gebeten, Einzelheiten über den jüngsten und früheren Kontakt mit Tuberkulosepatienten, die Tuberkulosegeschichte und andere potenzielle Determinanten von LTBI anzugeben, wie z. B. die physische Nähe zu aktiven Tuberkulosepatienten, die durchschnittliche tägliche Expositionsdauer sowie die Gesamtdauer der Exposition gegenüber Indexfällen . CRFs enthalten außerdem die folgenden Daten: Checkliste der Zulassungskriterien, Ergebnisse klinischer Basisuntersuchungen und Labortests sowie während der Nachuntersuchung gesammelte Informationen, einschließlich Einzelheiten zum Entzug, falls zutreffend. Die Mitglieder des Projektteams, die für die Fertigstellung von CRFs verantwortlich sind, bei denen es sich um Forschungsstipendiaten oder Feldarbeiter handeln kann, werden in einem Delegationsprotokoll aufgeführt.

Basisprobenentnahme und Laboruntersuchungen

Die Proben werden wie in Abbildung 1 und den Tabellen 1 und 2 beschrieben entnommen und Laboranalysen werden wie in den Tabellen 3 und 4 beschrieben durchgeführt. Wenn Tests im Rahmen der Routinepflege durchgeführt werden (z. B. (vollständiges Blutbild für Patienten mit aktiver Tuberkulose, HIV-Serologie für Patienten mit aktiver Tuberkulose und IGRA-positive LTBI-Untersuchte), die Ergebnisse werden über CRS abgerufen und im CRF dokumentiert. IGRA-negativen LTBI-Screenees und nicht exponierten Teilnehmern wird bei Besuch 1 ein HIV-Test angeboten.

Um zu untersuchen, ob Mtb-Stämme, die aus CD34+-PBMC von TB-Kontakten isoliert wurden, mit denen übereinstimmen, die aus dem Sputum von Indexfällen isoliert wurden, denen sie ausgesetzt waren, werden Sputumproben von 10 Index-aktiven TB-Patienten mit CD34+-PCR-Assay-positiven Kontakten, die in die Studie aufgenommen wurden, entnommen. An Isolaten, die aus diesen Proben kultiviert wurden, wird eine Sequenzierungsanalyse des gesamten Genoms durchgeführt. Basierend auf dieser Analyse werden Primer zur Erstellung von Mtb-Amplikonbibliotheken unter Verwendung bioinformatischer Ansätze entworfen, um die Stammvielfalt zu erfassen. Diese Primer werden dann verwendet, um Mtb-Amplikonbibliotheken aus CD34+-Zellen zu generieren, die aus TB-Kontakten isolierte genomische Mtb-DNA enthalten. Diese Bibliotheken werden dann sequenziert und mit dem Mtb-Genom des Indexfalls verglichen, um festzustellen, ob aus Indexfällen und Kontakten isolierte Stämme übereinstimmen.

Teilnehmer mit positiven HIV-Tests/IGRAs werden zur weiteren Beurteilung an HIV/TB-Kliniken überwiesen. Wo HIV-Tests und IGRAs zu Forschungszwecken durchgeführt wurden (d. h. sofern sie nicht Teil der Routineversorgung sind), werden die Forschungsmitarbeiter diese Ergebnisse den Teilnehmern mitteilen, sobald sie verfügbar sind.

Folgemaßnahmen

• LTBI-Screenees: Besuche und Nachuntersuchungen sind in Abbildung 1, Tabelle 1 und Tabelle 3 detailliert aufgeführt. Die Teilnehmer nehmen nach 3 Monaten an Besuch 2 teil (Besuch 2, V2). Teilnehmer, die die Chemoprophylaxe abgeschlossen haben, werden nach Abschluss ihrer Behandlung einer routinemäßigen klinischen Untersuchung unterzogen. Diejenigen, die keine Chemoprophylaxe einnehmen, werden ebenfalls 3 Monate nach V1 nachuntersucht. Zusätzlich zum Ausfüllen eines CRF, in dem die Symptome einer aktiven Tuberkulose (alle Teilnehmer) und die Einhaltung der Chemoprophylaxe (diejenigen, die eine Chemoprophylaxe erhalten) detailliert beschrieben werden, wird eine 117-ml-Blutprobe für die immunologische und molekulare Analyse entnommen, wie in Abschnitt 13.3 unten beschrieben. Mit Abschluss des zweiten Besuchs endet die Teilnahme an der Studie.
• Patienten mit aktiver Tuberkulose: Besuche und Nachsorge sind in Abbildung 1, Tabelle 2 und Tabelle 4 detailliert aufgeführt. Teilnehmer, die eine Anti-TB-Behandlung erhalten, werden nach Abschluss ihrer Behandlung einer routinemäßigen klinischen Untersuchung unterzogen und währenddessen wird eine zweite Blutprobe von 114 ml entnommen Dieser Besuch erfolgt für immunologische und molekulare Analysen, wie in Abschnitt 13.3 unten beschrieben. Mit Abschluss des zweiten Besuchs endet die Teilnahme an der Studie.

Die Ergebnisse des CD34+-PCR-Tests werden nicht als Leitfaden für das klinische Management verwendet, da es sich bei diesem Test um ein Forschungsinstrument in den frühen Phasen der Entwicklung handelt und seine Ergebnisse nicht mit irgendeinem klinischen Ergebnis korreliert wurden.

Rückzug des Teilnehmers

Teilnehmer werden zurückgezogen, wenn sie ihre Einwilligung zur Teilnahme widerrufen oder wenn festgestellt wird, dass der Rücktritt im besten Interesse des Teilnehmers liegt. Als Rücktritt gilt auch, wenn ein Teilnehmer trotz schriftlicher und telefonischer Mahnung seinen zweiten geplanten Studienbesuch nicht wahrnimmt. Wenn ein Teilnehmer die Studie abbricht, wird der Grund für den Abbruch im CRF erfasst.

Die bis zum Zeitpunkt des Widerrufs gesammelten Daten werden in die Studienanalysen einbezogen, sofern ein Teilnehmer nichts anderes wünscht. Alle klinischen Proben, die vor dem Ausscheiden eines Teilnehmers entnommen wurden, werden für Studienanalysen verwendet.

Definition des Studienendes

Die Studie endet, wenn alle klinischen und Laboruntersuchungen für alle an der Nachuntersuchung teilnehmenden Teilnehmer abgeschlossen sind.

9. Statistische Überlegungen

9.1 Stichprobengröße

Das Hauptziel dieser Studie besteht darin, Erkenntnisse aus einem anderen Umfeld zu validieren und zu erweitern, in dem genomische DNA von Mtb in CD34+-Zellen nachgewiesen wurde, die aus dem peripheren Blut von sieben IGRA-positiven asymptomatischen Erwachsenen isoliert wurden.10 Um dieses Ziel zu erreichen, werden insgesamt 100 LTBI-Screenees für die Querschnittsstudie rekrutiert (20 Teilnehmer pro unabhängiger Variable, die in der Regressionsanalyse getestet werden soll). Es wird erwartet, dass etwa fünfzig dieser Teilnehmer IGRA-positiv sein werden, von denen etwa vierzig eine Chemoprophylaxe verschrieben bekommen wird: Die Nachuntersuchung von 25 dieser Teilnehmer wird eine Aussagekraft von >80 % auf dem 5 %-Signifikanzniveau ergeben, um eine Verringerung der zu zeigen Anteil der CD34+ PCR-positiven Personen von 80 % zu Studienbeginn auf 30 % bei der Nachuntersuchung.

10. Ethische Überlegungen

Vor Beginn der Studie wird die Genehmigung des NHS REC für das Studienprotokoll, die Einverständniserklärungen und andere relevante Dokumente eingeholt. Die Studie wird erst beginnen, wenn die erforderlichen Genehmigungen von der Ethikkommission vorliegen und der Sponsor „grünes Licht“ für die Aktivierung der Standorte gibt. Das CI wird sicherstellen, dass diese Studie im Einklang mit der Deklaration von Helsinki (2013) und den ethischen Grundsätzen des Research Governance Framework for Health and Social Care, Second Edition, 2005 und seinen nachfolgenden Änderungen durchgeführt wird. Die Entscheidung darüber, ob es sich bei einer Änderung um eine geringfügige oder wesentliche Änderung handelt, liegt beim Sponsor. Wesentliche Änderungen, die einer Prüfung durch die REC bedürfen, werden erst umgesetzt, wenn sie von der zuständigen Stelle genehmigt wurden. Die gesamte Korrespondenz mit dem Sponsor und dem REC wird in der Studienstammdatei aufbewahrt. Das CI wird die REC und den Sponsor am Ende der Studie benachrichtigen.

Vor der Teilnahme an dieser Studie wird von den Teilnehmern eine schriftliche Einverständniserklärung einer entsprechend geschulten Person (bei der es sich um einen Arzt, eine Krankenschwester oder einen Forschungsassistenten handeln kann) eingeholt. Informationsblätter werden in Englisch und bei Bedarf in anderen Sprachen zur Verfügung gestellt. Potenziellen Teilnehmern wird das Informationsblatt zur Verfügung gestellt und die Ziele, Methoden, erwarteten Vorteile und potenziellen Gefahren der Studie werden erläutert. Während des Einwilligungsverfahrens wird den Teilnehmern erklärt, dass die Teilnahme freiwillig ist und sie die Teilnahme an der Studie jederzeit aus beliebigen Gründen verweigern oder während der Nachuntersuchung austreten können.

Interessenkonflikt

Es wurden keine finanziellen oder sonstigen konkurrierenden Interessen des CI oder eines Co-Ermittlers festgestellt.

11. Sicherheitsüberlegungen

Da es sich bei der Studie um eine Beobachtungsstudie handelt, ist das Risiko studienbedingter unerwünschter Ereignisse vernachlässigbar. Allerdings werden alle unerwünschten Ereignisse, die im Zusammenhang mit der Studie stehen, dem Sponsor innerhalb von 24 Stunden gemeldet. Das zu entnehmende Blutvolumen (bis zu 120 ml) mag von manchen Teilnehmern als groß empfunden werden, Erwachsene, die Blut spenden, spenden jedoch üblicherweise 500 ml auf einmal, ohne an Anämie zu leiden. Die Forscher erwarten daher keine unerwünschten Ereignisse im Zusammenhang mit der Entnahme dieser Blutmenge. Informationen zur Menge der Blutentnahme und ob diese zu unerwünschten gesundheitlichen Folgen führt, werden den Teilnehmern im Informationsblatt erläutert. Alle TB-Patienten werden im Rahmen ihrer üblichen klinischen Versorgung auf Anämie untersucht und Patienten mit einem Hämoglobinspiegel unter 10 g/dl bei der Aufnahme werden ausgeschlossen. Darüber hinaus werden die folgenden Maßnahmen ergriffen, um potenzielle Unannehmlichkeiten, Unannehmlichkeiten und Risiken zu minimieren, denen die Teilnehmer im Verlauf dieser Studie ausgesetzt sein können:

- Einsatz von entsprechend geschultem Personal zur Durchführung einer Aderlassoperation

12. Datenverarbeitung und Aufzeichnungen

12.1. Vertraulichkeit

Für alle für die Studie untersuchten Teilnehmer werden geschützte Gesundheitsinformationen (PHI) erfasst, die für die Durchführung und Analyse der Studie erforderlich sind. Zu diesen Informationen gehören der Name, das Geburtsdatum, das Geschlecht, die Adresse, die Telefonnummer, ggf. die Krankenaktennummer jedes Teilnehmers, ggf. die E-Mail-Adresse und die ethnische Herkunft jedes Teilnehmers. Studienpersonal, das zur Durchführung oder Analyse der Studie Zugang zu PHI benötigt, wird in einem Delegationsprotokoll aufgeführt. PHI bleiben vertraulich und werden gemäß dem Datenschutzgesetz von 1998 behandelt, verarbeitet, gespeichert und vernichtet. Die Teilnehmer behalten sich das Recht vor, ihre Genehmigung zur Nutzung ihrer PHI jederzeit während der Studie zu widerrufen. Alle Teilnehmer werden in Veröffentlichungen, die aus dieser Studie hervorgehen, anonymisiert. Die Daten werden wie folgt pseudoanonymisiert. PHI werden in einer sicheren Datenbank gespeichert, die mit einem eindeutigen Identifikationscode verknüpft ist. Klinische Informationen werden in einer separaten sicheren Datenbank gespeichert, die mit demselben eindeutigen Identifikationscode verknüpft ist. Das CI und die Co-Ermittler haben Zugriff auf den pseudoanonymisierten endgültigen Studiendatensatz.

Während der Recherche liegen alle Aufzeichnungen in der Verantwortung des CI und werden unter sicheren Bedingungen aufbewahrt. Nach Abschluss der Studie ist es die Pflicht des Sponsors, die Aufzeichnungen und Daten für weitere 20 Jahre aufzubewahren. Das CI fungiert als „Verwalter“ der Forschungsdaten. Der Zugang zu PHI ist auf die Mindestanzahl von Personen beschränkt, die für die Durchführung der Studie, Qualitätskontrolle, Prüfung und Analyse erforderlich sind. Folgendes umfasst Quelldokumente: Screening-Protokolle, Einverständniserklärung und Papier-CRF. Alle Quelldokumente werden sicher in verschlossenen Aktenschränken aufbewahrt. Die Datenübermittlung und -übertragung erfolgt in Übereinstimmung mit dem britischen Datenschutzgesetz von 1998. Personenbezogene Daten werden nicht gespeichert, transportiert oder an oder von einem tragbaren Gerät gesendet, es sei denn, dieses Gerät ist verschlüsselt.

12.2. Datenerfassung, -aufzeichnung und -verarbeitung

Unterzeichnete Einverständniserklärungen und Papierdokumente mit Quelldaten werden sicher gespeichert. Studiendaten werden in eine Datenbank der EpiData Entry-Software eingegeben. Das Personal wird entsprechend geschult, um die Datenbank zur Dateneingabe nutzen zu können. Labordaten werden in die Datenbank eingegeben.

Das CI und die Co-Ermittler haben während der Studie Zugriff auf die Studiendaten. Studienpersonal, das für die Durchführung der Studie einen solchen Zugang benötigt, erhält ebenfalls den erforderlichen Zugang. Zugriff auf Studiendaten während der Studie wird bei Bedarf auch autorisierten Vertretern des Sponsors, der Gastinstitution und der Aufsichtsbehörden gewährt.

12.3. Qualitätskontrolle und Qualitätssicherung

Die Studiendokumentation wird den Vertretern des Sponsors und der REC auf Anfrage zur Qualitätskontrolle und Qualitätssicherung zur Verfügung gestellt.

13. Labore

13.1. Probenentnahme, Etikettierung und Verarbeitung

Blutproben werden vom Studienpersonal entnommen, mit der Teilnehmer-ID gekennzeichnet und datiert. Tempus-Röhrchen werden unmittelbar nach der Entnahme gemäß den Empfehlungen des Herstellers kräftig geschüttelt. Proben für Blutkulturen und HIV-Serologie werden zur Verarbeitung zu Zentrallaboren transportiert. Die verbleibenden Blutproben werden zum Blizard-Institut transportiert, wo Datum und Uhrzeit des Probeneingangs sowie der Zustand der Probe (z. B. nicht geronnen) werden in einem Laborprotokoll erfasst. Proben für den QFT-Plus-Test werden kurz nach Erhalt der Proben 18 Stunden lang bei 37 °C inkubiert, bevor die Überstände zentrifugiert und abgesaugt werden. Diese werden bis zur Analyse der IFN-Gamma-Konzentration bei -80 °C gelagert. Blutproben in Tempus-Röhrchen werden bei -80 °C in einem beschrifteten Gestell gelagert, bis sie zur RNA-Extraktion und Genexpressionsprofilierung zur Abteilung für Infektion und Immunität des University College London transportiert werden. PBMC werden von der verbleibenden Probe (100 ml) abgetrennt, gefolgt von der Isolierung von CD34+-Zellen mittels magnetischer Bead-Sortierung. Die Reinheit der isolierten CD34+-Zellen wird durch Durchflusszytometrie überprüft.