Pitkittäiset biomarkkerit, joilla on valittu tulosmitta CMT: ssä (CMT-BIO-Extend)

Tähän asti on käytetty vain fyysisiä ja elektrofysiologisia tutkimuksia sairauden vakavuuden määrittämiseen CMT -potilailla. CMT-neuropatian pistemäärä (CMTNS) on kelvollinen ja luotettava yhdeksän pisteen komposiittiasteikko, jossa otetaan huomioon aisti- ja motoriset oireet (Shy et al. 2005). Sen toiminta vakavuus- tai etenemismarkkerina on kuitenkin kiistanalainen johtuen vuosien ajan hitaasta heikkenemisestä (Wang ym. 2017). Sairauksien vakavuuden ja etenemisen korvaavat biomarkkerit toimisivat tehokkaina työkaluina terapeuttisten vaikutusten seuraamiseen kliinisissä tutkimuksissa. Tällä hetkellä CMT1A: n käytännöllisiä biomarkkereita ei ole saatavana. Ei-invasiivinen MRI-tutkimus osoitti lihasten ja lihaksensisäisen rasvan kertymisen muutokset alaraajoissa, jotka korreloivat kliinisen heikentymisen kanssa (Gaeta ym. 2012). Tämä menetelmä osoittaa lupaavia tuloksia korvikkeen lopputuloksena kliinisille tutkimuksille, mutta se on teknisesti vaativa ja on toistaiseksi testattu vain pienessä ryhmässä CMT -potilaita ja potilaita, joilla on useita muita neuromuskulaarisia häiriöitä.

Kehon nesteiden tai kudosnäytteiden molekyylianalyysi on lupaava strategia kliinisesti käytännöllisten korvaavien biomarkkereiden kehittämiseksi CMT1A: n sairauden vakavuuden suhteen. Tutkimusryhmämme alustavassa työssä CMT -rottien geeniekspressioanalyysit korreloivat ihon biopsioiden kanssa CMT1A -potilailla. Tämä analyysi tunnisti useita yksittäisiä geenejä (STT2, CTSA, PPARG, CDA, ENPP1 ja NRG1), jotka korreloivat sairauden vakavuuden kanssa (Fledrich ym. 2017). Lisäkokeet, joissa käytetään ihon geeniekspressioanalyysejä ja iskiashermoa (N. ischiadicus) mahdollisti eron lievästi ja vakavasti vaikuttavien CMT -rotien välillä (Fledrich ym. 2012).

Sairauden ilmentymisen suuren vaihtelun vuoksi postuulimme, että suuri osa sairauden ilmenemismuodoista tapahtuu epigeneettisellä tasolla. Tämän pohjalta alkuperäinen lähestymistapamme paljasti merkittävän päällekkäisyyden dielisellä metyloituneilla DNA -alueilla ja transkriptionaalisten muutosten välillä CMT -rotilla. Tämä havainto ehdotti, että DNA -metylaation muutokset voisivat vaikuttaa muuttuneeseen geeniekspressioon ja siten CMT1A: n patogeneesiin. Erityisesti kaksi klusteria sisälsi erittäin ylhäältä säädettyjä transkripteja, jotka on rikastettu geeneillä, jotka liittyvät solusyklin säätelyyn. Solusyklin säätely on kytketty PMP22/GAS315, geeniin, joka aiheuttaa CMT1A: ta. Transkriptiotekijöiden analyysi osoitti E2F -perheen tärkeän solusyklin säätelijän merkittävän osallistumisen yhdessä sen tunnetun alavirran efektorin EZH2: n kanssa, joka on schwann -solujen transkriptionaalisten tukahduttamisten välttämätön metylaasi histoni H3: n metyloinnin kautta.

Tämän perusteella yhteensä 150 potilaan rekrytointi tapahtui vuodesta 2016 vuoteen 2019, joita arvioitiin kolmella käynnillä fenotyyppisen vaihtelun, sairauden vakavuuden ja kliinisten pisteiden suhteen (NCT03386266). Tässä translaatiotutkimuksessa käytettiin PMP22 -geeniä ja potilasmateriaalia, jotka yliekspressoivat. Vasta valittiin 150 eläimestä, 4 tai 5 lievä ja vaikea sairausilmentäminen. Potilaat rekrytoitiin CMT-verkkoverkon kautta, jossa CMTNSV2: ta käytettiin sairauspisteinä. RNASEQ -analyysit tunnistivat useita ehdokasgeenejä, jotka olivat päällekkäisiä sekä CMT1A -potilailla että RAT -malleissa, mikä osoittaa sairauden vakavuuden potentiaaliset markkerit.

Nämä alustavat tiedot tarjoavat todisteita siitä, että sekä CMT1A -eläinmallien että ihmisen potilaiden epigeneettisiä ja muita OMICS -tietoja voidaan käyttää kaksisuuntaiseen, informatiiviseen käännökseen sekä eteenpäin että taaksepäin. Näiden kaksisuuntaisten tietojen perusteella RNA-sekvensointi suoritettiin potilaiden verestä CMT-verkkoon, jossa tunnistettiin alkuperäiset potentiaaliset biomarkkerit, taudinmuokkaimet ja korvikemarkkerit (Linhoff et al., Julkaisu valmistelussa). RT-PCR-tiedot tarjoavat käsityksen ennustavista lausunnoista potilaiden kliinisestä kehityksestä ajan myötä.

Näiden havaintojen perusteella aiomme tutkia edelleen tunnistettuja biomarkkereita neljännellä vierailulla viimeisimmän eettisen sovelluksen jälkeen CMT-verkkoon ja vahvistaa niiden läsnäolo ihon biopsioissa. Painopiste on erityisesti vastahavaittuihin oireisiin liittyviin markkereihin, kuten autonomiseen toimintahäiriöön ja vapinaan. Tämän laajennetun lähestymistavan tavoitteena on parantaa taudin diagnosointia ja seurantaa, mikä mahdollistaa tarkempia ja yksilöllisiä terapeuttisia lähestymistapoja.

Tämän hankkeen tavoitteena on ymmärtää paremmin CMT1A -taudin luonnollista etenemistä ja tunnistaa mahdolliset riskitekijät, jotka voivat vaikuttaa taudin kulkuun. CMT1A, CMT: n alatyyppi, on yleisin perinnöllinen perifeerinen neuropatia. Sen hidas, progressiivinen sairauskurssi osoittaa yksittäisten fenotyyppien suuren vaihtelun geneettisestä homogeenisuudesta huolimatta. Hankkeen ensisijaisena tavoitteena on analysoida fenotyyppisen ekspression potentiaalisia determinantteja, mukaan lukien vakavuusaste, ja dokumentoida oireiden vaihtelu viiden vuoden ajanjakson ajan taudin dynamiikan indikaattorina.

CMT on harvinainen, parantumaton sairaus, vaikkakin uusia farmakoterapioita kehitetään parhaillaan. Tehokkuuden osoittaminen kliinisissä tutkimuksissa on haastavaa hitaan etenemisen ja herkkien tulostoimenpiteiden puutteen vuoksi. Tämän alaprojektin päätavoitteena on validoida tunnistettuja biomarkkereita (DNA/epigenetiikka ja RNA/RT-PCR) ja valita herkät tulosmittaukset CMT-potilaiden veressä ja iholla vähintään viiden vuoden havaintojakson parantamiseksi tehokkuuden arvioinnin parantamiseksi. Tulevissa kliinisissä terapiatutkimuksissa, mukaan lukien taudin etenemisen diagnostinen seuranta CMT -potilailla. Kontrolliksi sisällytetään myös noin 25 tervettä vapaaehtoista. Vapaaehtoisille kirjataan lyhyt sairaushistoria, ja biomarkkereiden validoimiseksi kerätään veri- ja ihonäytteet.

Tämän alaprojektin tavoitteena on kerätä kudosnäytteitä (iho, veri ja viljeltyjä fibroblasteja) CMT-potilailta, joilla on erilaisia ​​alatyyppejä rajoittamattomaan tieteelliseen ja lääketieteelliseen tutkimustarkoituksiin, esimerkiksi Saksan CMT-verkkoverkon tutkimusprojekteihin. Tieteelliset kumppanit saavat ilmaisen pääsyn näytteisiin ja tietoihin. Kaupallista käyttöä tutkimustarkoituksiin ei ole tarkoitettu. CMT-kudoksen keräyksen avulla CMT-Net-kumppanit voivat suorittaa potilasmateriaalin morfologisia ja molekyylibiologisia analyysejä sekä käyttää fibroblastviljelmiä. Genotyyppi-fenotyyppitutkimukset voidaan myös suorittaa. Tähän päivään mennessä on jo olemassa yli 100 standardisoitua ihobiopsiaa kliinisesti hyvin karakterisoiduista CMT1A-potilaista. Tämä kokoelma on ainoa kudosvarasto kudosnäytteille potilailta, joilla on perinnölliset neuropaatiot Saksassa.

Tämän hankkeen tavoitteena on ymmärtää paremmin CMT1A -taudin luonnollista etenemistä ja tunnistaa mahdolliset riskitekijät, jotka voivat vaikuttaa taudin kulkuun. CMT1A, CMT: n alatyyppi, on yleisin perinnöllinen perifeerinen neuropatia. Sen hidas, progressiivinen sairauskurssi osoittaa yksittäisten fenotyyppien suuren vaihtelun geneettisestä homogeenisuudesta huolimatta. Hankkeen ensisijaisena tavoitteena on analysoida fenotyyppisen ekspression potentiaalisia determinantteja, mukaan lukien vakavuusaste, ja dokumentoida oireiden vaihtelu viiden vuoden ajanjakson ajan taudin dynamiikan indikaattorina.

CMT on harvinainen, parantumaton sairaus, vaikkakin uusia farmakoterapioita kehitetään parhaillaan. Tehokkuuden osoittaminen kliinisissä tutkimuksissa on haastavaa hitaan etenemisen ja herkkien tulostoimenpiteiden puutteen vuoksi. Tämän alaprojektin päätavoitteena on validoida tunnistettuja biomarkkereita (DNA/epigenetiikka ja RNA/RT-PCR) ja valita herkät tulosmittaukset CMT-potilaiden veressä ja iholla vähintään viiden vuoden havaintojakson parantamiseksi tehokkuuden arvioinnin parantamiseksi. Tulevissa kliinisissä terapiatutkimuksissa, mukaan lukien taudin etenemisen diagnostinen seuranta CMT -potilailla. Kontrolliksi sisällytetään myös noin 25 tervettä vapaaehtoista. Vapaaehtoisille kirjataan lyhyt sairaushistoria, ja biomarkkereiden validoimiseksi kerätään veri- ja ihonäytteet.

Tämän alaprojektin tavoitteena on kerätä kudosnäytteitä (iho, veri ja viljeltyjä fibroblasteja) CMT-potilailta, joilla on erilaisia ​​alatyyppejä rajoittamattomaan tieteelliseen ja lääketieteelliseen tutkimustarkoituksiin, esimerkiksi Saksan CMT-verkkoverkon tutkimusprojekteihin. Tieteelliset kumppanit saavat ilmaisen pääsyn näytteisiin ja tietoihin. Kaupallista käyttöä tutkimustarkoituksiin ei ole tarkoitettu. CMT-kudoksen keräyksen avulla CMT-Net-kumppanit voivat suorittaa potilasmateriaalin morfologisia ja molekyylibiologisia analyysejä sekä käyttää fibroblastviljelmiä. Genotyyppi-fenotyyppitutkimukset voidaan myös suorittaa. Tähän päivään mennessä on jo olemassa yli 100 standardisoitua ihobiopsiaa kliinisesti hyvin karakterisoiduista CMT1A-potilaista. Tämä kokoelma on ainoa kudosvarasto kudosnäytteille potilailta, joilla on perinnölliset neuropaatiot Saksassa.

Tämän hankkeen tavoitteena on ymmärtää paremmin CMT1A -taudin luonnollista etenemistä ja tunnistaa mahdolliset riskitekijät, jotka voivat vaikuttaa taudin kulkuun. CMT1A, CMT: n alatyyppi, on yleisin perinnöllinen perifeerinen neuropatia. Sen hidas, progressiivinen sairauskurssi osoittaa yksittäisten fenotyyppien suuren vaihtelun geneettisestä homogeenisuudesta huolimatta. Hankkeen ensisijaisena tavoitteena on analysoida fenotyyppisen ekspression potentiaalisia determinantteja, mukaan lukien vakavuusaste, ja dokumentoida oireiden vaihtelu viiden vuoden ajanjakson ajan taudin dynamiikan indikaattorina.

CMT on harvinainen, parantumaton sairaus, vaikkakin uusia farmakoterapioita kehitetään parhaillaan. Tehokkuuden osoittaminen kliinisissä tutkimuksissa on haastavaa hitaan etenemisen ja herkkien tulostoimenpiteiden puutteen vuoksi. Tämän alaprojektin päätavoitteena on validoida tunnistettuja biomarkkereita (DNA/epigenetiikka ja RNA/RT-PCR) ja valita herkät tulosmittaukset CMT-potilaiden veressä ja iholla vähintään viiden vuoden havaintojakson parantamiseksi tehokkuuden arvioinnin parantamiseksi. Tulevissa kliinisissä terapiatutkimuksissa, mukaan lukien taudin etenemisen diagnostinen seuranta CMT -potilailla. Kontrolliksi sisällytetään myös noin 25 tervettä vapaaehtoista. Vapaaehtoisille kirjataan lyhyt sairaushistoria, ja biomarkkereiden validoimiseksi kerätään veri- ja ihonäytteet.