Podélné biomarkery s vybranými měřeními výsledků v CMT (CMT-BIO-Extend)

Až dosud byly k stanovení závažnosti onemocnění u pacientů s CMT použity pouze fyzikální a elektrofyziologické vyšetření. Skóre CMT neuropatie (CMTNS) je platné a spolehlivé devítibodové kompozitní stupnice, která zvažuje smyslové a motorické příznaky (Shy et al. 2005). Jeho funkce jako marker závažnosti nebo progrese je však kontroverzní kvůli pomalému zhoršení v průběhu let (Wang et al. 2017). Náhradní biomarkery pro závažnost a progresi onemocnění by sloužily jako silné nástroje pro monitorování terapeutických účinků v klinických studiích. V současné době nejsou k dispozici žádné praktické biomarkery pro CMT1A. Neinvazivní studie MRI prokázala změny akumulace svalu a intramuskulárního tuku v dolních končetinách, které korelovaly s klinickým poškozením (Gaeta et al. 2012). Tato metoda ukazuje slibné výsledky jako náhradní výsledky pro klinické studie, ale je to technicky náročné a dosud byla testována pouze u malé skupiny pacientů s CMT a pacientů s různými dalšími neuromuskulárními poruchami.

Molekulární analýza tělních tekutin nebo vzorků tkání je slibnou strategií pro vývoj klinicky praktických náhradních biomarkerů pro závažnost onemocnění v CMT1A. V předběžné práci naší výzkumné skupiny byly analýzy genové exprese potkanů ​​CMT korelovány s biopsiemi kůže u pacientů s CMT1A. Tato analýza identifikovala několik jednotlivých genů (STT2, CTSA, PPARG, CDA, ENPP1 a NRG1), které korelovaly se závažností onemocnění (Fledrich et al. 2017). Další experimenty využívající analýzy genové exprese kůže a sedacího nervu (N. Ischiadicus) umožnil rozlišení mezi mírně a vážně postiženými krysy CMT (Fledrich et al. 2012).

V důsledku vysoké variability v expresi onemocnění jsme předpokládali, že na epigenetické úrovni dochází k velké části projevu onemocnění. Na základě toho náš počáteční přístup odhalil významné překrývání mezi odlišně methylovanými oblastmi DNA a transkripčními změnami u potkanů ​​CMT. Toto zjištění naznačilo, že změny v methylaci DNA by mohly přispět ke změně genové exprese, a tedy k patogenezi CMT1A. Zejména dva klastry obsahovaly vysoce upregulované transkripty obohacené o geny spojené s regulací buněčného cyklu. Regulace buněčného cyklu je spojena s PMP22/GAS315, genem, který způsobuje CMT1A. Analýza transkripčních faktorů ukázala významné zapojení důležitého regulátoru buněčného cyklu z rodiny E2F spolu se známým downstream efektorem EZH2, methylázou nezbytnou pro transkripční represi v Schwannových buňkách methylací histonu H3.

Na základě toho došlo k náboru celkem 150 pacientů od roku 2016 do roku 2019, kteří byli hodnoceni během tří návštěv fenotypové variability, závažnosti onemocnění a klinického skóre (NCT03386266). V této translační studii byly použity krysy nadměrně exprimující gen PMP22 a pacientský materiál. Ze 150 zvířat byly vybrány 4 nebo 5 s mírnými a těžkými výrazy onemocnění. Pacienti byli přijati prostřednictvím sítě CMT-Net, kde byl CMTNSV2 použit jako skóre nemoci. Analýzy RNASEQ identifikovaly několik kandidátních genů, které se překrývaly jak u pacientů s CMT1A, tak u modelů potkanů, což ukazuje na potenciální markery závažnosti onemocnění.

Tato předběžná data poskytují důkaz, že epigenetické a jiné údaje o OMICS jak z zvířecích modelů CMT1A, tak z lidských pacientů, mohou být použity pro obousměrné, informativní překlad jak vpřed, tak zaostalé směry. Na základě těchto obousměrných údajů bylo sekvenování RNA prováděno z krve pacientů v CMT-Net, kde byly identifikovány počáteční potenciální biomarkery, modifikátory nemoci a náhradní markery (Linhoff et al., Publikace v přípravě). Data RT-PCR poskytují vhled do prediktivních tvrzení o klinickém vývoji pacientů v průběhu času.

Na základě těchto zjištění plánujeme dále prozkoumat identifikované biomarkery při 4. návštěvě po naší nejnovější etické aplikaci na CMT-Net a potvrdit jejich přítomnost v kožních biopsiích. Důraz je kladen zejména na markery spojené s nově pozorovanými příznaky, jako je autonomní dysfunkce a třes. Cílem tohoto rozšířeného přístupu je zlepšit diagnózu a monitorování onemocnění, což umožňuje přesnější a individualizovanější terapeutické přístupy.

Cílem tohoto projektu je lépe porozumět přirozenému vývoji onemocnění CMT1A a identifikovat potenciální rizikové faktory, které mohou ovlivnit průběh nemoci. CMT1A, podtyp CMT, je nejčastější dědičnou periferní neuropatií. Jeho pomalý, progresivní průběh onemocnění ukazuje vysokou variabilitu jednotlivých fenotypů navzdory genetické homogenity. Primárním cílem projektu je analyzovat potenciální determinanty fenotypové exprese, včetně úrovní závažnosti, a dokumentovat variabilitu symptomů v celkovém období pěti let jako indikátor dynamiky onemocnění.

CMT je vzácné, nevyléčitelné onemocnění, ačkoli se v současné době vyvíjejí nové farmakoterapie. Prokázání účinnosti v klinických studiích je náročné kvůli pomalému progresi a nedostatku citlivých výsledků. Hlavním cílem tohoto podprojektu je validace identifikovaných biomarkerů (DNA/epigenetika a RNA/RT-PCR) a vybrané citlivé výsledkové opatření v krvi a kůži pacientů s CMT po dobu pozorování nejméně 5 let, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti V budoucích studiích klinické terapie, včetně diagnostického monitorování progrese onemocnění u pacientů s CMT. Jako kontroly bude zahrnuto také přibližně 25 zdravých dobrovolníků. U dobrovolníků bude zaznamenána krátká anamnéza a vzorky krve a kůže budou odebrány pro ověření biomarkerů.

Cílem tohoto subprojektu je shromažďovat vzorky tkání (kůže, krev a kultivované fibroblasty) od pacientů s CMT s různými podtypy pro neomezené vědecké a lékařské výzkumné účely, například pro výzkumné projekty v německé síti CMT-NET. Vědecké partneři získají volný přístup k vzorkům a datům. Komerční využití mimo účely výzkumu není zamýšleno. S pomocí sběru tkání CMT mohou partneři CMT-Net provádět morfologické a molekulární biologické analýzy materiálu pacienta a také využívat fibroblastové kultury. Lze také provádět studie genotypu-fenotypu. K dnešnímu dni již existuje sbírka více než 100 standardizovaných kožních biopsií z klinicky dobře charakterizovaných pacientů s CMT1A. Tato sbírka je jediným úložištěm tkání pro vzorky tkání od pacientů s dědičnými neuropatiemi v Německu.

Cílem tohoto projektu je lépe porozumět přirozenému vývoji onemocnění CMT1A a identifikovat potenciální rizikové faktory, které mohou ovlivnit průběh nemoci. CMT1A, podtyp CMT, je nejčastější dědičnou periferní neuropatií. Jeho pomalý, progresivní průběh onemocnění ukazuje vysokou variabilitu jednotlivých fenotypů navzdory genetické homogenity. Primárním cílem projektu je analyzovat potenciální determinanty fenotypové exprese, včetně úrovní závažnosti, a dokumentovat variabilitu symptomů v celkovém období pěti let jako indikátor dynamiky onemocnění.

CMT je vzácné, nevyléčitelné onemocnění, ačkoli se v současné době vyvíjejí nové farmakoterapie. Prokázání účinnosti v klinických studiích je náročné kvůli pomalému progresi a nedostatku citlivých výsledků. Hlavním cílem tohoto podprojektu je validace identifikovaných biomarkerů (DNA/epigenetika a RNA/RT-PCR) a vybrané citlivé výsledkové opatření v krvi a kůži pacientů s CMT po dobu pozorování nejméně 5 let, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti V budoucích studiích klinické terapie, včetně diagnostického monitorování progrese onemocnění u pacientů s CMT. Jako kontroly bude zahrnuto také přibližně 25 zdravých dobrovolníků. U dobrovolníků bude zaznamenána krátká anamnéza a vzorky krve a kůže budou odebrány pro ověření biomarkerů.

Cílem tohoto subprojektu je shromažďovat vzorky tkání (kůže, krev a kultivované fibroblasty) od pacientů s CMT s různými podtypy pro neomezené vědecké a lékařské výzkumné účely, například pro výzkumné projekty v německé síti CMT-NET. Vědecké partneři získají volný přístup k vzorkům a datům. Komerční využití mimo účely výzkumu není zamýšleno. S pomocí sběru tkání CMT mohou partneři CMT-Net provádět morfologické a molekulární biologické analýzy materiálu pacienta a také využívat fibroblastové kultury. Lze také provádět studie genotypu-fenotypu. K dnešnímu dni již existuje sbírka více než 100 standardizovaných kožních biopsií z klinicky dobře charakterizovaných pacientů s CMT1A. Tato sbírka je jediným úložištěm tkání pro vzorky tkání od pacientů s dědičnými neuropatiemi v Německu.

Cílem tohoto projektu je lépe porozumět přirozenému vývoji onemocnění CMT1A a identifikovat potenciální rizikové faktory, které mohou ovlivnit průběh nemoci. CMT1A, podtyp CMT, je nejčastější dědičnou periferní neuropatií. Jeho pomalý, progresivní průběh onemocnění ukazuje vysokou variabilitu jednotlivých fenotypů navzdory genetické homogenity. Primárním cílem projektu je analyzovat potenciální determinanty fenotypové exprese, včetně úrovní závažnosti, a dokumentovat variabilitu symptomů v celkovém období pěti let jako indikátor dynamiky onemocnění.

CMT je vzácné, nevyléčitelné onemocnění, ačkoli se v současné době vyvíjejí nové farmakoterapie. Prokázání účinnosti v klinických studiích je náročné kvůli pomalému progresi a nedostatku citlivých výsledků. Hlavním cílem tohoto podprojektu je validace identifikovaných biomarkerů (DNA/epigenetika a RNA/RT-PCR) a vybrané citlivé výsledkové opatření v krvi a kůži pacientů s CMT po dobu pozorování nejméně 5 let, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti, aby se zlepšilo hodnocení účinnosti V budoucích studiích klinické terapie, včetně diagnostického monitorování progrese onemocnění u pacientů s CMT. Jako kontroly bude zahrnuto také přibližně 25 zdravých dobrovolníků. U dobrovolníků bude zaznamenána krátká anamnéza a vzorky krve a kůže budou odebrány pro ověření biomarkerů.