Biomarcadores longitudinais com medidas de resultado selecionadas no CMT (CMT-BIO-Extend)

Até agora, apenas exames físicos e eletrofisiológicos foram usados ​​para determinar a gravidade da doença em pacientes com TCC. O escore de neuropatia do CMT (CMTNS) é uma escala composta de nove pontos válida e confiável que considera sintomas sensoriais e motores (Shy et al. 2005). No entanto, sua função como marcador de gravidade ou progressão é controversa devido à lenta deterioração ao longo dos anos (Wang et al. 2017). Os biomarcadores substitutos da gravidade e progressão da doença serviriam como ferramentas poderosas para monitorar os efeitos terapêuticos em estudos clínicos. Atualmente, não há biomarcadores práticos para CMT1a. Um estudo de ressonância magnética não invasiva mostrou alterações no acúmulo muscular e intramuscular de gordura nos membros inferiores que se correlacionaram com o comprometimento clínico (Gaeta et al. 2012). Esse método mostra resultados promissores como uma medida de resultado substituto para ensaios clínicos, mas é tecnicamente exigente e até agora só foi testado em um pequeno grupo de pacientes com CMT e aqueles com vários outros distúrbios neuromusculares.

A análise molecular de fluidos corporais ou amostras de tecido é uma estratégia promissora para o desenvolvimento de biomarcadores substitutos clinicamente práticos para a gravidade da doença no CMT1a. No trabalho preliminar de nosso grupo de pesquisa, as análises de expressão gênica de ratos CMT foram correlacionadas com biópsias de pele em pacientes com CMT1a. Essa análise identificou vários genes individuais (STT2, CTSA, PPARG, CDA, ENPP1 e NRG1) que se correlacionaram com a gravidade da doença (Fledrich et al. 2017). Experiências adicionais usando análises de expressão gênica da pele e nervo ciático (N. Ischiadicus) permitiram uma distinção entre ratos CMT leve e gravemente afetados (Fledrich et al. 2012).

Devido à alta variabilidade na expressão da doença, postulamos que uma grande parte da manifestação da doença ocorre no nível epigenético. Com base nisso, nossa abordagem inicial revelou sobreposição significativa entre regiões de DNA diferencialmente metiladas e alterações transcricionais nos ratos CMT. Esse achado sugeriu que as mudanças na metilação do DNA poderiam contribuir para a expressão gênica alterada e, portanto, para a patogênese do CMT1a. Notavelmente, dois clusters continham transcritos altamente regulados enriquecidos com genes associados à regulação do ciclo celular. A regulação do ciclo celular está ligada ao PMP22/GAS315, o gene que causa CMT1a. A análise dos fatores de transcrição indicou um envolvimento significativo do importante regulador do ciclo celular da família E2F, juntamente com seu conhecido efetor a jusante EZH2, uma metilase essencial para a repressão transcricional nas células de Schwann através da metilação da histona H3.

Com base nisso, um recrutamento de um total de 150 pacientes ocorreu de 2016 a 2019, que foram avaliados mais de três visitas para variabilidade fenotípica, gravidade da doença e escores clínicos (NCT03386266). Neste estudo translacional, foram utilizados ratos que superexpressam o gene pMP22 e o material do paciente. De 150 animais, 4 ou 5 com expressões de doenças leves e graves, respectivamente, foram selecionadas. Os pacientes foram recrutados através da rede CMT-NET, onde o CMTNSV2 foi usado como escore de doença. As análises do RNASEQ identificaram vários genes candidatos que se sobrepuseram em pacientes com CMT1a e nos modelos de ratos, indicando possíveis marcadores para a gravidade da doença.

Esses dados preliminares fornecem evidências de que dados epigenéticos e outros omics de modelos animais CMT1A e pacientes humanos podem ser usados ​​para tradução informativa e bidirecional nas direções para a frente e para trás. Com base nesses dados bidirecionais, o sequenciamento de RNA foi realizado a partir do sangue de pacientes na rede de CMT, onde foram identificados biomarcadores potenciais iniciais, modificadores de doenças e marcadores substitutos (Linhoff et al., Publicação em preparação). Os dados de RT-PCR fornecem informações sobre declarações preditivas sobre o desenvolvimento clínico dos pacientes ao longo do tempo.

Com base nessas descobertas, planejamos investigar melhor os biomarcadores identificados em uma 4ª visita, seguindo nossa última aplicação de ética à CMT-Net e confirmam sua presença nas biópsias da pele. O foco está particularmente nos marcadores associados a sintomas recém -observados, como disfunção autonômica e tremores. Essa abordagem expandida visa melhorar o diagnóstico e o monitoramento da doença, permitindo abordagens terapêuticas mais precisas e individualizadas.

O objetivo deste projeto é entender melhor a progressão natural da doença de CMT1A e identificar possíveis fatores de risco que podem influenciar o curso da doença. O CMT1a, um subtipo de CMT, é a neuropatia periférica hereditária mais comum. Seu curso lento e progressivo de doenças mostra uma alta variabilidade dos fenótipos individuais, apesar da homogeneidade genética. O objetivo principal do projeto é analisar potenciais determinantes da expressão fenotípica, incluindo níveis de gravidade, e documentar a variabilidade dos sintomas durante um período total de cinco anos como um indicador da dinâmica da doença.

A CMT é uma doença rara e incurável, embora novas farmacoterapias estejam sendo desenvolvidas atualmente. Demonstrar eficácia em ensaios clínicos é um desafio devido à lenta progressão e falta de medidas sensíveis de resultados. O principal objetivo deste subprojeto é validar biomarcadores identificados (DNA/epigenética e RNA/RT-PCR) e medidas de resultado sensível selecionadas no sangue e na pele de pacientes com CMT durante um período de observação de pelo menos 5 anos para melhorar a avaliação da eficácia Em futuros ensaios de terapia clínica, incluindo monitoramento diagnóstico da progressão da doença em pacientes com CMT. Aproximadamente 25 voluntários saudáveis ​​também serão incluídos como controles. Para os voluntários, uma breve história médica será registrada e as amostras de sangue e pele serão coletadas para validar os biomarcadores.

O objetivo deste subprojeto é coletar amostras de tecido (pele, sangue e fibroblastos cultivados) de pacientes com CMT com vários subtipos para fins de pesquisa científica e médica irrestritos, por exemplo, para projetos de pesquisa na rede alemã CMT-NET. Os parceiros científicos receberão acesso gratuito às amostras e dados. O uso comercial fora dos fins de pesquisa não se destina. Com a ajuda da coleta de tecidos CMT, os parceiros da rede CMT podem conduzir análises biológicas morfológicas e moleculares do material do paciente, além de utilizar culturas de fibroblastos. Estudos de genótipo-fenótipo também podem ser conduzidos. Até o momento, já existe uma coleção de mais de 100 biópsias de pele padronizadas de pacientes com CMT1A clinicamente bem caracterizados. Esta coleção é o único repositório de tecidos para amostras de tecido de pacientes com neuropatias hereditárias na Alemanha.

O objetivo deste projeto é entender melhor a progressão natural da doença de CMT1A e identificar possíveis fatores de risco que podem influenciar o curso da doença. O CMT1a, um subtipo de CMT, é a neuropatia periférica hereditária mais comum. Seu curso lento e progressivo de doenças mostra uma alta variabilidade dos fenótipos individuais, apesar da homogeneidade genética. O objetivo principal do projeto é analisar potenciais determinantes da expressão fenotípica, incluindo níveis de gravidade, e documentar a variabilidade dos sintomas durante um período total de cinco anos como um indicador da dinâmica da doença.

A CMT é uma doença rara e incurável, embora novas farmacoterapias estejam sendo desenvolvidas atualmente. Demonstrar eficácia em ensaios clínicos é um desafio devido à lenta progressão e falta de medidas sensíveis de resultados. O principal objetivo deste subprojeto é validar biomarcadores identificados (DNA/epigenética e RNA/RT-PCR) e medidas de resultado sensível selecionadas no sangue e na pele de pacientes com CMT durante um período de observação de pelo menos 5 anos para melhorar a avaliação da eficácia Em futuros ensaios de terapia clínica, incluindo monitoramento diagnóstico da progressão da doença em pacientes com CMT. Aproximadamente 25 voluntários saudáveis ​​também serão incluídos como controles. Para os voluntários, uma breve história médica será registrada e as amostras de sangue e pele serão coletadas para validar os biomarcadores.

O objetivo deste subprojeto é coletar amostras de tecido (pele, sangue e fibroblastos cultivados) de pacientes com CMT com vários subtipos para fins de pesquisa científica e médica irrestritos, por exemplo, para projetos de pesquisa na rede alemã CMT-NET. Os parceiros científicos receberão acesso gratuito às amostras e dados. O uso comercial fora dos fins de pesquisa não se destina. Com a ajuda da coleta de tecidos CMT, os parceiros da rede CMT podem conduzir análises biológicas morfológicas e moleculares do material do paciente, além de utilizar culturas de fibroblastos. Estudos de genótipo-fenótipo também podem ser conduzidos. Até o momento, já existe uma coleção de mais de 100 biópsias de pele padronizadas de pacientes com CMT1A clinicamente bem caracterizados. Esta coleção é o único repositório de tecidos para amostras de tecido de pacientes com neuropatias hereditárias na Alemanha.

O objetivo deste projeto é entender melhor a progressão natural da doença de CMT1A e identificar possíveis fatores de risco que podem influenciar o curso da doença. O CMT1a, um subtipo de CMT, é a neuropatia periférica hereditária mais comum. Seu curso lento e progressivo de doenças mostra uma alta variabilidade dos fenótipos individuais, apesar da homogeneidade genética. O objetivo principal do projeto é analisar potenciais determinantes da expressão fenotípica, incluindo níveis de gravidade, e documentar a variabilidade dos sintomas durante um período total de cinco anos como um indicador da dinâmica da doença.

A CMT é uma doença rara e incurável, embora novas farmacoterapias estejam sendo desenvolvidas atualmente. Demonstrar eficácia em ensaios clínicos é um desafio devido à lenta progressão e falta de medidas sensíveis de resultados. O principal objetivo deste subprojeto é validar biomarcadores identificados (DNA/epigenética e RNA/RT-PCR) e medidas de resultado sensível selecionadas no sangue e na pele de pacientes com CMT durante um período de observação de pelo menos 5 anos para melhorar a avaliação da eficácia Em futuros ensaios de terapia clínica, incluindo monitoramento diagnóstico da progressão da doença em pacientes com CMT. Aproximadamente 25 voluntários saudáveis ​​também serão incluídos como controles. Para os voluntários, uma breve história médica será registrada e as amostras de sangue e pele serão coletadas para validar os biomarcadores.