Mutations géniques et corrélation des symptômes orthopédiques des exostoses héréditaires multiples : projet multicentrique

Recrutement de sujets :

Les nouveaux patients présentant une HME seront identifiés par les bureaux et les cliniques du département d'orthopédie du British Columbia Children's Hospital. Tous les participants potentiels seront informés de la justification, de l'objectif et des procédures de l'étude et un consentement éclairé sera obtenu.

Démographie :

Tous les proposants (patients affectés), les membres de leur famille au premier degré et les membres de leur famille élargie désireux de participer à l'étude seront interrogés. Des informations telles que l'âge, le sexe, l'origine ethnique, les antécédents familiaux, les symptômes, les complications et la chirurgie antérieure seront élucidées.

Phénotype :

Les patients affectés verront leur(s) ostéochondrome(s) cartographié(s) pour l'emplacement, la taille, la morphologie et les symptômes. Au total, soixante-quinze paramètres phénotypiques répartis en quatre grandes catégories de données seront collectés. Les deux premières catégories sont cumulées à partir d'examens physiques et comprennent la taille et la longueur des segments des membres (15 (x2 pour gauche et droite). Les deux autres catégories, qualité des lésions (19 paramètres) et alignement et déformation des membres (26 paramètres) seront tirées des examens radiographiques faisant partie de la prise en charge courante du patient. Toutes les radiographies disponibles seront passées en revue et les exostoses caractérisées radiographiquement. Cela établira le génotype du patient.

Génotype:

Chaque participant dont le génotype est inconnu aura un 10 cc. échantillon de sang prélevé au BC Children's Hospital. Cet échantillon sera traité pour une analyse de mutation (extraction d'ADN à partir d'échantillons de sang, analyse de mutation) au laboratoire de diagnostic moléculaire clinique du BC Children's Hospital. Les techniques utilisées dans l'étude pilote seront mises en œuvre à l'exception que les marqueurs microsatellites ne seront pas utilisés afin de réduire les coûts.

À l'aide des amorces EXT 1 et EXT 2 (annexe 1), les deux brins d'un segment d'ADN sont séquencés à l'aide de la version 2 de la chimie ABI Big Dye. Les produits de réaction de séquençage résultants sont ensuite exécutés sur un analyseur génétique ABI 3100 Avant. Une fois qu'une séquence est obtenue, elle est analysée avec le logiciel SeqScape version 2 qui permet la comparaison avec la séquence de référence.

L'analyse des données:

Toutes les informations résultant de cette étude de recherche resteront strictement confidentielles. Tous les documents seront identifiés par un numéro d'identification et conservés dans des classeurs verrouillés. Les participants ne seront pas identifiés par leur nom dans les rapports de l'étude terminée. Les bases de données seront stockées sur un ordinateur portable dédié au projet qui est verrouillé dans le bureau de recherche.

Les données phénotypiques recueillies seront utilisées pour décrire les degrés familiaux (conçus à l'aide d'un logiciel cyrillique), les phénotypes des individus atteints et les mutations dans les gènes d'exostose d'intérêt (site et type de mutation). La taille des sujets et la longueur des segments seront converties en pourcentages pour normaliser l'âge et le sexe afin de permettre la comparaison entre les groupes.

Les données génotypiques de l'analyse de la mutation des échantillons de sang comprendront l'emplacement de la mutation (au début du gène par rapport à la fin du gène), le type de mutation (altération du gène comme faux-sens, décalage de cadre, non-sens ou site d'épissage) et le changement d'acide aminé qui a été causé par la mutation. Les données seront analysées comme suit :

Analyse préliminaire

1. EXT 1 contre EXT 2
2. Hommes contre femmes

3. Hommes EXT 1 contre femmes EXT 1 contre hommes EXT 2 contre femmes EXT 2

   Analyse secondaire

4. Types de mutations (Missense versus Nonsense versus Splice site versus Frameshift)
5. Mutation précoce ou tardive (moins de 1700 paires de bases contre plus de 1700 paires de bases)

Avec des analyses à 2 voies, un test t non apparié sera calculé et avec des analyses supérieures à 2 voies, une ANOVA sera calculée. La puissance sera calculée pour chaque comparaison en raison de l'énorme variation de la taille de l'échantillon. La signification statistique sera définie sur a priori à 0,05 et puissance de 0,8.