Mutações genéticas e correlação de sintomas ortopédicos de exostoses hereditárias múltiplas: projeto multicêntrico

Recrutamento de Assunto:

Novos pacientes com HME serão identificados nos consultórios e clínicas do Departamento Ortopédico do British Columbia Children's Hospital. Todos os participantes em potencial serão instruídos sobre a lógica, propósito e procedimentos do estudo e o consentimento informado será obtido.

Dados demográficos:

Todos os probandos (pacientes afetados), seus familiares de primeiro grau e familiares estendidos dispostos a participar do estudo serão entrevistados. Informações incluindo idade, sexo, origem étnica, histórico familiar, sintomas, complicações e cirurgias anteriores serão elucidadas.

Fenótipo:

Os pacientes afetados terão seu(s) osteocondroma(s) mapeado(s) quanto à localização, tamanho, morfologia e sintomas. Um total de setenta e cinco parâmetros fenotípicos divididos em quatro categorias principais de dados serão coletados. As duas primeiras categorias são acumuladas a partir de exames físicos e incluem estatura e comprimentos dos segmentos dos membros (15 (x2 para esquerdo e direito). As outras duas categorias, qualidade da lesão (19 parâmetros) e alinhamento e deformidade do membro (26 parâmetros) serão extraídas de exames radiográficos que fazem parte do cuidado atual do paciente. Todas as radiografias disponíveis serão revisadas e as exostoses caracterizadas radiograficamente. Isso estabelecerá o genótipo do paciente.

Genótipo:

Cada participante cujo genótipo é desconhecido terá 10 cc. amostra de sangue coletada no BC Children's Hospital. Esta amostra será processada para análise de mutação (extração de DNA de amostras de sangue, análise de mutação) no Laboratório de Diagnóstico Molecular Clínico do BC Children's Hospital. As técnicas usadas no estudo piloto serão implementadas, exceto que marcadores microssatélites não serão usados ​​para economizar custos.

Usando os primers EXT 1 e EXT 2 (Apêndice 1), ambas as fitas de um segmento de DNA são sequenciadas usando a química ABI Big Dye Versão 2. Os produtos de reação de sequenciamento resultantes são então executados em um analisador genético ABI 3100 Avant. Uma vez obtida uma sequência, ela é analisada com o software SeqScape versão 2, que permite a comparação com a sequência de referência.

Análise de dados:

Todas as informações resultantes deste estudo de pesquisa serão mantidas estritamente confidenciais. Todos os documentos serão identificados por um número de identificação e mantidos em arquivos trancados. Os participantes não serão identificados pelo nome em nenhum relatório do estudo concluído. Os bancos de dados serão armazenados no computador laptop dedicado ao projeto, que fica trancado no escritório de pesquisa.

Os dados fenotípicos coletados serão usados ​​para descrever os graus familiares (desenhados em software cirílico), fenótipos dos indivíduos afetados e mutações nos genes das exostoses de interesse (sítio e tipo de mutação). As alturas dos indivíduos e os comprimentos dos segmentos serão convertidos em valores percentuais para padronizar a idade e o sexo para permitir a comparação entre os grupos.

Os dados genotípicos da análise de mutação de amostras de sangue incluirão a localização da mutação (inicial no gene versus tardia no gene), tipo de mutação (alteração do gene como missense, frameshift, nonsense ou local de splicing) e a alteração de aminoácidos que foi causado pela mutação. Os dados serão analisados ​​da seguinte forma:

Análise preliminar

1. EXT 1 versus EXT 2
2. Machos versus Fêmeas

3. EXT 1 machos versus EXT 1 fêmeas versus EXT 2 machos versus EXT 2 fêmeas

   Análise Secundária

4. Tipos de mutações (Missense versus Nonsense versus Splice site versus Frameshift)
5. Mutação precoce ou tardia (menos de 1.700 pares de bases versus mais de 1.700 pares de bases)

Com análises de 2 vias, um teste t não pareado será calculado e com análises de mais de 2 vias, uma ANOVA será calculada. O poder será calculado para cada comparação devido à grande variação no tamanho da amostra. A significância estatística será definida como anterior em 0,05 e poder de 0,8.