Correlación de Mutaciones Génicas y Síntomas Ortopédicos de Múltiples Exostosis Hereditarias: Proyecto Multicéntrico

Reclutamiento de sujetos:

Los nuevos pacientes que presenten HME se identificarán a través de las oficinas y clínicas del Departamento de Ortopedia del Hospital Infantil de Columbia Británica. Se informará a todos los participantes potenciales acerca de la justificación, el propósito y los procedimientos del estudio, y se obtendrá el consentimiento informado.

Demografía:

Se entrevistará a todos los probandos (paciente afectado), sus familiares de primer grado y los miembros de la familia ampliada que deseen participar en el estudio. Se aclarará información que incluye edad, género, origen étnico, antecedentes familiares, síntomas, complicaciones y cirugía previa.

fenotipo:

Los pacientes afectados tendrán sus osteocondroma(s) mapeados para ubicación, tamaño, morfología y síntomas. Se recopilará un total de setenta y cinco parámetros fenotípicos divididos en cuatro categorías principales de datos. Las dos primeras categorías se acumulan a partir de exámenes físicos e incluyen la estatura y la longitud de los segmentos de las extremidades (15 (x2 para la izquierda y la derecha). Las otras dos categorías, calidad de la lesión (19 parámetros) y alineación y deformidad de las extremidades (26 parámetros) se extraerán de los exámenes radiográficos que forman parte de la atención actual del paciente. Se revisarán todas las radiografías disponibles y se caracterizarán radiográficamente las exostosis. Esto establecerá el genotipo del paciente.

Genotipo:

Cada participante cuyo genotipo se desconozca tendrá una botella de 10 cc. muestra de sangre recolectada en el BC Children's Hospital. Esta muestra se procesará para el análisis de mutaciones (extracción de ADN de muestras de sangre, análisis de mutaciones) en el Laboratorio de Diagnóstico Clínico Molecular del Hospital Infantil de BC. Las técnicas utilizadas en el estudio piloto se implementarán con la excepción de que no se utilizarán marcadores de microsatélite para ahorrar costos.

Usando los cebadores EXT 1 y EXT 2 (Apéndice 1), ambas cadenas de un segmento de ADN se secuencian usando la versión 2 de la química ABI Big Dye. Los productos de la reacción de secuenciación resultantes se ejecutan luego en un analizador genético ABI 3100 Avant. Una vez que se obtiene una secuencia, se analiza con el software SeqScape versión 2, que permite la comparación con la secuencia de referencia.

Análisis de los datos:

Toda la información que resulte de este estudio de investigación se mantendrá estrictamente confidencial. Todos los documentos se identificarán con un número de identificación y se guardarán en archivadores cerrados. Los participantes no serán identificados por su nombre en ningún informe del estudio completo. Las bases de datos se almacenarán en una computadora portátil dedicada al proyecto que está guardada bajo llave en la oficina de investigación.

Los datos fenotípicos recopilados se utilizarán para describir los grados familiares (diseñados con software cirílico), los fenotipos de los individuos afectados y las mutaciones en los genes de exostosis de interés (sitio y tipo de mutación). Las alturas de los sujetos y las longitudes de los segmentos se convertirán en cifras porcentuales para estandarizar la edad y el género para permitir la comparación entre grupos.

Los datos genotípicos del análisis de mutaciones de las muestras de sangre incluirán la ubicación de la mutación (al principio del gen versus al final del gen), el tipo de mutación (alteración del gen como sin sentido, cambio de marco, sin sentido o sitio de empalme) y el cambio de aminoácido que fue causado por la mutación. Los datos serán analizados de la siguiente manera:

Analisis preliminar

1. EXT 1 frente a EXT 2
2. Hombres contra mujeres

3. Hombres EXT 1 versus mujeres EXT 1 versus hombres EXT 2 versus mujeres EXT 2

   Análisis secundario

4. Tipos de mutaciones (Missense versus Nonsense versus Splice site versus Frameshift)
5. Mutación temprana o tardía (menos de 1700 pares de bases versus más de 1700 pares de bases)

Con análisis de 2 vías, se calculará una prueba t no pareada y con análisis de más de 2 vías, se calculará un ANOVA. La potencia se calculará para cada comparación debido a la gran variación en el tamaño de la muestra. La significación estadística se establecerá antes en 0,05 y una potencia de 0,8.