La prévalence des isolats producteurs de β-lactamase à spectre étendu (BLSE) parmi les entérobactéries courantes à Taïwan

Matériels et méthodes

1. Collection d'isolats bactériens

   Le personnel de l'Institut national de recherche en santé a établi une surveillance à long terme de la résistance aux antimicrobiens de 22 à 44 hôpitaux répartis dans toutes les parties de Taiwan-Taiwan Surveillance of Antimicrobial Resistance (TSAR) depuis 1998. Il a été mené cinq fois en 1998, 2000, 2002, 2004 et 2006 et a été nommé TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV et TSAR-V. Dans cette étude, des isolats d'entérobactéries de TSAR-IV seront recrutés. Chacun des 50 isolats d'Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens et Morganella morganii sera inscrit (environ 10 % des isolats collectés par TSAR IV) pour les études microbiologiques suivantes.

   Les isolats seront divisés en groupes producteurs ou non producteurs de BLSE par des tests de dépistage. Tous les isolats disponibles ont été identifiés au niveau de l'espèce ou du genre au moyen de méthodes conventionnelles. Les isolats de la même espèce récupérés chez le même patient individuel sont considérés comme un seul isolat. Les isolats ont tous été stockés à -70℃ dans un bouillon trypticase soja (Difco Laboratories, Detroit, MI) additionné de 15% de glycérol avant d'être testés.

2. Collecte de données

   Les informations recueillies pour chaque isolat comprenaient : la date de prélèvement, la date du test, l'identification, le site de l'infection, l'unité hospitalière du patient et si l'isolat a été acquis dans la communauté (c'est-à-dire, échantillon obtenu <48 heures après l'admission), la durée de séjour à l'hopital. La sensibilité de tous les agents antimicrobiens isolés aux agents antimicrobiens ciblés sera déterminée par leur concentration minimale inhibitrice (valeurs MIC) suivant les seuils CLSI pour l'agent antimicrobien respectif.

3. Tests de sensibilité aux antimicrobiens

   • Préparation des inoculums Solution saline stérile (0,85 % NaCl), tampon ou bouillon approprié pour la préparation des inoculums, selon l'organisme. La procédure d'inoculum CLSI pour les aérobies et autres micro-organismes doit être utilisée. La turbidité McFarland de 0,5 sera utilisée comme norme pour les aérobies.
   • Inoculation Utiliser des anses/écouvillons stériles pour obtenir une quantité optimale de suspension d'inoculums. Tamponnez toute la surface de la gélose trois fois ; faire tourner la plaque d'environ 90 degrés à chaque fois pour assurer une distribution uniforme des inoculums. Laissez l'excès d'humidité être absorbé pendant environ 10 à 15 minutes afin que la surface soit complètement sèche avant d'appliquer les bandelettes de test E.
   • Application des bandelettes de test E Assurez-vous que la surface de gélose inoculée est complètement sèche avant d'appliquer les bandelettes de test E. Utilisez un applicateur Etest ou utilisez une pince pour saisir la poignée de la bandelette (portant la mention E) et placez-les sur la surface de gélose inoculée, en vous assurant que l'échelle MIC est orientée vers le haut et que la concentration maximale est la plus proche du bord de la plaque. Assurez-vous que toute la bande est en contact complet avec la surface de la gélose. Une fois appliquée, la bande ne peut pas être déplacée en raison de la libération instantanée d'antibiotique dans la gélose. Il est recommandé d'appliquer 4 à 6 bandelettes de test E différentes sur une plaque de gélose de 150 m. Dans cette étude, les bandelettes de test E de six agents antimicrobiens, dont le céfépime, le céfépime plus l'acide clavulanique (pour l'identification des isolats producteurs de BLSE), la ciprofloxacine, le cefmétazole, l'amikacine, la tigécycline seront appliquées en plus de l'ertapénème.
   • Incubation La température et l'atmosphère d'incubation utilisées doivent être optimales pour la croissance d'espèces bactériennes particulières et de l'antibiotique testé. CLSI recommande 35℃/16-18 heures/atmosphère ambiante pour les aérobies non exigeants et les anaérobies facultatifs.
   • Lecture de la CMI Après avoir terminé la période d'incubation et lorsque la croissance bactérienne devient distinctement visible, lire la valeur de la CMI au point d'intersection entre le bord de l'ellipse d'inhibition et la bandelette de test E. Utilisez le guide de lecture du test E et d'autres guides techniques pour lire correctement les différents modèles. Une bandelette Etest (AB Biodisk, Solna, Suède) contenant du céfépime (plage de test CMI, 0,25-16 mg/L) et du céfépime (plage de test CMI, 0,064-4 mg/L) plus 4 mg/L d'acide clavulanique sera utilisée pour détecter l'expression des BLSE selon les instructions du fabricant. la réduction de la CMI par ≥3 dilutions au 1/2 en présence d'acide clavulanique est un indicateur de production de BLSE. La déformation des ellipses ou la présence de zone "fantôme" est également un indicateur de production de BLSE même si le rapport CMI est <8 ou non lisible.
   • Contrôle de qualité Afin de vérifier le système en ce qui concerne la manipulation correcte, la qualité et la cohérence des matériaux et des méthodes, testez les souches de contrôle de qualité avec les antibiotiques concernés. S. pneumoniae et H. influenzae peuvent être déterminés par microdilution en bouillon sous incubation ambiante. Les organismes suivants sont inclus comme souches témoins : S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700603 et P. aeruginosa ATCC 27853. Pour chaque 500 Etests effectués, un test de contrôle comprenant les 5 souches de contrôle ci-dessus sera effectué.
   • Études moléculaires Les isolats avec expression de BLSE seront davantage typés en utilisant la méthode d'électrophorèse en champ pulsé (PFGE). Les procédures détaillées de PFGE et les interprétations des modèles de bandes PFGE sont comme la description dans notre rapport précédent (13).

L'analyse des données

Les isolats sont classés en sensibles, intermédiaires et résistants selon les directives fournies par le CLSI. Les isolats intermédiaires ou résistants aux agents antimicrobiens sont également classés comme non sensibles aux agents. Les taux d'insensibilité des principaux pathogènes bactériens seront analysés selon les différents sites d'infection et l'origine des isolats. Les associations entre la zone géographique, les types d'hôpitaux auprès desquels ces isolats ont été obtenus par rapport à la sensibilité aux antimicrobiens seront analysées.