台湾の一般的な腸内細菌科における分離株を産生するスペクトル拡張β-ラクタマーゼ（ESBL）の有病率

材料および方法

1. 細菌分離株のコレクション

   国立衛生研究所のスタッフは、1998 年以来、台湾 - 台湾抗菌薬耐性監視 (TSAR) のすべての地域に分布する 22 から 44 の病院からの抗菌薬耐性の長期監視を確立しました。 1998 年、2000 年、2002 年、2004 年、2006 年に 5 回実施され、TSAR-I、TSAR-II、TSAR-III、TSAR-IV、TSAR-V と名付けられました。 この研究では、TSAR-IV からの腸内細菌の分離株が募集されます。 Escherichia coli、Klebsiella pneumoniae、Proteus mirabilis、Enterobacter cloacae、Serratia marcescens、および Morganella morganii の各 50 分離株が登録されます (TSAR IV で収集された分離株の約 10%)。

   分離株は、スクリーニング試験によってESBL産生群または非産生群に分けられます。 利用可能なすべての分離株は、従来の方法によって種または属レベルで同定されました。 同じ患者から回収された同種の分離株は、1 つの分離株と見なされます。 分離株はすべて、試験前に 15% グリセロールを添加したトリプチケース ソイ ブイヨン (Difco Laboratories、デトロイト、ミシガン州) で -70℃ で保存されました。

2. データ収集

   各分離株について収集された情報には、収集日、検査日、識別情報、感染部位、患者の病棟、分離株が地域で取得されたかどうか (つまり、入院後 48 時間以内に採取された検体)、患者の感染期間の長さなどがあります。入院。 標的抗菌剤に対するすべての分離の感受性は、それぞれの抗菌剤の CLSI ブレークポイントに従って、それらの最小阻害濃度 (MIC 値) によって決定されます。

3. 抗菌薬感受性試験

   • 接種材料の準備 生物に応じて、滅菌生理食塩水 (0.85% NaCl)、接種材料の準備に適したバッファーまたは培養液。 好気性菌およびその他の微生物の CLSI 接種手順を使用する必要があります。 0.5 McFarland 濁度が好気性生物の基準として使用されます。
   • 接種 滅菌ループ/スワブを使用して、接種懸濁液の最適量を取得します。 寒天表面全体を 3 回拭きます。プレートを毎回約 90 度回転させて、接種材料が均一に分布するようにします。 Eテストストリップを適用する前に、表面が完全に乾燥するように、余分な水分を約10〜15分間吸収させます。
   • E テスト ストリップの適用 E テスト ストリップを適用する前に、接種した寒天表面が完全に乾燥していることを確認します。 Etest アプリケーターを使用するか、ピンセットを使用してストリップのハンドル (E とラベル付けされています) をつかみ、接種した寒天表面に置き、MIC スケールが上を向き、最大濃度がストリップの縁に最も近いことを確認します。皿。 ストリップ全体が寒天表面と完全に接触していることを確認してください。 一度適用すると、抗生物質が寒天に瞬時に放出されるため、ストリップを動かすことはできません。 150 m 寒天プレートに 4 ～ 6 種類の E テスト ストリップを適用することをお勧めします。 この研究では、エルタペネムに加えて、セフェピム、セフェピムとクラブラン酸 (ESBL 産生分離株の同定用)、シプロフロキサシン、セフメタゾール、アミカシン、チゲサイクリンを含む 6 つの抗菌剤の E テストストリップが適用されます。
   • インキュベーション 使用するインキュベーション温度と雰囲気は、特定の細菌種と試験対象の抗生物質の増殖に最適でなければなりません。 CLSI は、非好気性好気性菌および通性嫌気性菌に対して 35℃/16-18 時間/周囲雰囲気を推奨しています。
   • MIC の読み取り インキュベーション期間が完了し、細菌の増殖がはっきりと見えるようになった後、阻害楕円の端と E テストストリップの交点で MIC 値を読み取ります。 E テスト読解ガイドやその他のテクニカル ガイドを使用して、さまざまなパターンを正しく読み取ります。 セフェピム (MIC テスト範囲、0.25 ～ 16 mg/L) およびセフェピム (MIC テスト範囲、0.064 ～ 4 mg/L) と 4 mg/L クラブラン酸を含む E テスト ストリップ (AB Biodisk、Solna、Sweden) を使用して検出します。メーカーの指示に従って ESBL を発現させます。クラブラン酸の存在下で 3 回以上の 2 倍希釈による MIC の減少は、ESBL 産生の指標です。 楕円の変形または「ファントム」ゾーンの存在は、MIC 比が 8 未満または読み取れない場合でも、ESBL 生成の指標です。
   • 品質管理 正しい取り扱い、品質、および材料と方法の一貫性に関してシステムをチェックするために、関連する抗生物質を使用して品質管理菌株をテストします。 肺炎連鎖球菌およびインフルエンザ菌は、周囲培養下で微量液体希釈することにより測定できます。 以下の微生物がコントロール株として含まれています: S. aureus ATCC 29213、E. faecalis ATCC 29212、S. pneumoniae ATCC 49619、E. coli ATCC 25922、E. coli ATCC 35218、K. pneumoniae ATCC 700603、および P. aeruginosa ATCC 27853。 500回のEテストごとに、上記の5つのコントロール株を含むコントロールテストが行​​われます。
   • 分子研究 ESBLの発現を伴う分離株は、パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）法を使用してさらにタイプ分けされます。 PFGE の詳細な手順と PFGE バンディング パターンの解釈は、以前のレポート (13) で説明したとおりです。

データ分析

分離株は、CLSI が提供するガイドラインに従って、感受性、中間、および耐性に分類されます。 抗菌剤に対して中間または耐性の分離株も、薬剤に対して非感受性として分類されます。 主要な細菌性病原体の非感受性率は、さまざまな感染部位と分離株の起源に従って分析されます。 抗菌薬感受性に対するこれらの分離株が得られた地理的領域、病院の種類の間の関連性が分析されます。