Forekomsten af ​​Extend-Spectrum β-Lactamase (ESBL) producerende isolater blandt almindelige enterobakterier i Taiwan

Materialer og metoder

1. Indsamling af bakterieisolater

   Personalet i National Health Research Institute har etableret en langsigtet overvågning af antimikrobiel resistens fra 22 til 44 hospitaler fordelt i alle dele af Taiwan-Taiwan Surveillance of Antimicrobial Resistance (TSAR) siden 1998. Det er blevet udført fem gange i år 1998, 2000, 2002, 2004 og 2006 og blev navngivet som TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV og TSAR-V. I denne undersøgelse vil isolater af Enterobacteriaceas fra TSAR-IV blive rekrutteret. Hver 50 isolater af Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens og Morganella morganii vil blive tilmeldt (ca. 10 % af de TSAR IV indsamlede isolater) til følgende mikrobiologiske undersøgelser.

   Isolater vil blive opdelt i ESBL-producerende eller ikke-producerende grupper ved screeningstest. Alle de tilgængelige isolater blev identificeret til arts- eller slægtsniveau ved hjælp af konventionelle metoder. Isolater med samme art udvundet fra samme individuelle patient betragtes som ét isolat. Isolaterne blev alle opbevaret ved -70 ℃ i trypticase sojabouillon (Difco Laboratories, Detroit, MI) suppleret med 15 % glycerol, før de blev testet.

2. Dataindsamling

   Oplysninger indsamlet for hvert isolat omfattede: indsamlingsdato, testdato, identifikation, infektionssted, patientens hospitalsenhed, og om isolatet blev erhvervet i samfundet (dvs. prøve taget <48 timer efter indlæggelsen), længden af ​​patientens hospitalsophold. Modtageligheden af ​​alle de isolerede over for målrettede antimikrobielle midler vil blive bestemt af deres Minimum Inhibitory Concentration (MIC-værdier) efter CLSI-brudpunkterne for det respektive antimikrobielle middel.

3. Antimikrobiel modtagelighedstest

   • Fremstilling af podestoffer Steril saltvand (0,85 % NaCl), egnet buffer eller bouillon til fremstilling af podestoffer, afhængigt af organismen. CLSI-podemetoden for aerobe og andre mikroorganismer bør anvendes. 0,5 McFarland turbiditet vil blive brugt som standard for aerobe.
   • Podning Brug sterile løkker/podninger for at opnå den optimale mængde inokulumsuspension. Vat hele agaroverfladen tre gange; rotation af pladen ca. 90 grader hver gang for at sikre en jævn fordeling af inokulum. Lad overskydende fugt blive absorberet i ca. 10-15 minutter, så overfladen er helt tør, før E-teststrimler påføres.
   • Påføring af E-teststrimler Sørg for, at den inokulerede agaroverflade er helt tør, før E-teststrimler påføres. Brug en Etest-applikator eller brug en pincet til at tage fat i strimlens håndtag (er mærket E) og placer dem på den podede agaroverflade, og sørg for, at MIC-skalaen vender opad, og at maksimumkoncentrationen er nærmest kanten af plade. Sørg for, at hele strimlen er i fuldstændig kontakt med agaroverfladen. Når strimlen er påført, kan den ikke flyttes på grund af den øjeblikkelige frigivelse af antibiotika i agaren. Det anbefales at påføre 4-6 forskellige E-teststrimler på en 150 m agarplade. I denne undersøgelse vil E-teststrimlerne af seks antimikrobielle midler, herunder cefepim, cefepim plus clavulansyre (til identifikation af ESBL-producerende isolater), ciprofloxacin, cefmetazol, amikacin, tigecyclin blive påført ud over ertapenem.
   • Inkubation Den anvendte inkubationstemperatur og -atmosfære skal være optimal for vækst af bestemte bakteriearter og det antibiotikum, der testes. CLSI anbefaler 35 ℃/16-18 timer/omgivende atmosfære til ikke-kræsne aerober og fakultative anaerober.
   • Aflæsning af MIC Når inkubationsperioden er afsluttet, og når bakterievækst bliver tydeligt synlig, aflæses MIC-værdien ved skæringspunktet mellem inhiberingsellipsens kant og E-teststrimlen. Brug E-testlæsningsvejledningen og andre tekniske vejledninger til at læse forskellige mønstre korrekt. Etest-strimmel (AB Biodisk, Solna, Sverige) indeholdende cefepim (MIC-testområde, 0,25-16 mg/L) og cefepim (MIC-testområde, 0,064-4 mg/L) plus 4 mg/L clavulansyre vil blive brugt til at påvise ekspressionen af ​​ESBL i henhold til producentens anvisning. reduktion af MIC med ≥3 to gange fortyndinger i nærvær af clavulansyre er en indikator for ESBL-produktion. Deformation af ellipserne eller tilstedeværelsen af ​​"fantom"-zone er også indikator for ESBL-produktion, selvom MIC-forholdet er <8 eller ikke kan aflæses.
   • Kvalitetskontrol For at kontrollere systemet med hensyn til korrekt håndtering, kvalitet og konsistens af materialer og metoder testes kvalitetskontrolstammer med de pågældende antibiotika. S. pneumoniae og H. influenzae kan bestemmes ved bouillon-mikrofortynding under omgivende inkubation. Følgende organismer er inkluderet som kontrolstammer: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae, Pneumoniae 0603 og P060ug. 27853. For hver 500 udførte Etests vil der blive udført en kontroltest inklusive de ovennævnte 5 kontrolstammer.
   • Molekylære undersøgelser Isolater med ekspression af ESBL'er vil blive yderligere typebestemt ved hjælp af Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) metode. De detaljerede procedurer for PFGE og fortolkningerne af PFGE-båndmønstre er som beskrivelsen i vores tidligere rapport (13).

Dataanalyse

Isolater er kategoriseret i følsomme, mellemliggende og resistente i henhold til retningslinjerne fra CLSI. Isolater mellem eller resistente over for antimikrobielle midler er også kategoriseret som ikke-modtagelige over for midlerne. Satserne for ikke-modtagelighed blandt store bakterielle patogener vil blive analyseret i henhold til de forskellige infektionssteder og isolaternes oprindelse. Forbindelserne mellem geografisk område, hospitalstyper, hvorfra disse isolater blev opnået mod den antimikrobielle modtagelighed, vil blive analyseret.