Преобладание изолятов, продуцирующих бета-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС), среди распространенных энтеробактерий на Тайване

Материалы и методы

1. Сбор бактериальных изолятов

   С 1998 года сотрудники Национального научно-исследовательского института здравоохранения установили долгосрочное наблюдение за устойчивостью к противомикробным препаратам в 22–44 больницах, расположенных во всех частях Тайваньско-Тайваньского надзора за устойчивостью к противомикробным препаратам (TSAR). Он проводился пять раз в 1998, 2000, 2002, 2004 и 2006 годах и назывался ЦАРЬ-I, ЦАРЬ-II, ЦАРЬ-III, ЦАРЬ-IV и ЦАРЬ-V. В этом исследовании будут набраны изоляты Enterobacteriaceas из TSAR-IV. Каждые 50 изолятов Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens и Morganella morganii будут зачислены (около 10% изолятов, собранных ЦАР IV) для следующих микробиологических исследований.

   Изоляты будут разделены на группы, продуцирующие или не продуцирующие БЛРС, с помощью скрининговых тестов. Все имеющиеся изоляты были идентифицированы до вида или рода с помощью общепринятых методов. Изоляты одного и того же вида, полученные от одного и того же пациента, считаются одним изолятом. Все изоляты перед тестированием хранили при температуре -70°С в триптиказо-соевом бульоне (Difco Laboratories, Детройт, Мичиган) с добавлением 15% глицерина.

2. Сбор данных

   Информация, собранная для каждого изолята, включала: дату сбора, дату анализа, идентификацию, место заражения, больничное отделение пациента, а также то, был ли изолят получен в сообществе (т. е. образец был получен менее чем через 48 часов после госпитализации), пребывания в больнице. Чувствительность всех выделенных препаратов к целевым противомикробным агентам будет определяться их минимальной ингибирующей концентрацией (значения МИК) в соответствии с пограничными значениями CLSI для соответствующего противомикробного агента.

3. Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам

   • Приготовление инокулята Стерильный физиологический раствор (0,85% NaCl), подходящий буфер или бульон для приготовления инокулята, в зависимости от микроорганизма. Следует использовать процедуру инокуляции CLSI для аэробов и других микроорганизмов. 0,5 мутности по МакФарланду будет использоваться в качестве стандарта для аэробов.
   • Инокуляция Используйте стерильные петли/тампоны для получения оптимального количества суспензии инокулята. Протрите всю поверхность агара три раза; каждый раз поворачивая планшет примерно на 90 градусов, чтобы обеспечить равномерное распределение инокулята. Дайте избыточной влаге впитаться в течение примерно 10–15 минут, чтобы поверхность полностью высохла, прежде чем наносить Е-тест-полоски.
   • Нанесение тест-полосок Е Перед нанесением тест-полосок Е убедитесь, что поверхность инокулированного агара полностью сухая. С помощью аппликатора Etest или щипцов возьмитесь за ручку полоски (обозначены буквой E) и поместите их на поверхность инокулированного агара, убедившись, что шкала МИК направлена ​​вверх, а максимум концентрации находится ближе всего к краю полоски. тарелка. Убедитесь, что вся полоска полностью соприкасается с поверхностью агара. После нанесения полоску нельзя сдвинуть из-за мгновенного высвобождения антибиотика в агар. На чашку с агаром размером 150 мкм рекомендуется наносить 4–6 различных Е-тест-полосок. В этом исследовании в дополнение к эртапенему будут применяться тест-полоски E с шестью противомикробными агентами, включая цефепим, цефепим плюс клавулановая кислота (для идентификации изолятов, продуцирующих БЛРС), ципрофлоксацин, цефметазол, амикацин, тигециклин.
   • Инкубация Температура и атмосфера инкубации должны быть оптимальными для роста конкретных видов бактерий и тестируемого антибиотика. CLSI рекомендует 35℃/16-18 часов/окружающую атмосферу для нетребовательных аэробов и факультативных анаэробов.
   • Чтение МИК После завершения периода инкубации и когда рост бактерий становится отчетливо видимым, измерьте значение МИК в точке пересечения края эллипса ингибирования и тест-полоски Е. Используйте Руководство по чтению тестов E и другие технические руководства, чтобы правильно читать различные шаблоны. Для обнаружения будут использоваться тест-полоски Etest (AB Biodisk, Solna, Швеция), содержащие цефепим (диапазон МИК 0,25–16 мг/л) и цефепим (диапазон МИК 0,064–4 мг/л) плюс 4 мг/л клавулановой кислоты. экспрессия БЛРС в соответствии с инструкцией производителя. Снижение МИК на ≥3 двукратных разведений в присутствии клавулановой кислоты является индикатором образования БЛРС. Деформация эллипсов или наличие «фантомной» зоны также является индикатором продукции БЛРС, даже если отношение МИК <8 или его невозможно определить.
   • Контроль качества Для проверки правильности обращения с системой, качества и согласованности материалов и методов проверьте контрольные штаммы с соответствующими антибиотиками. S. pneumoniae и H. influenzae можно определить микроразведением бульона при инкубации в условиях окружающей среды. В качестве контрольных штаммов включены следующие микроорганизмы: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700603 и P. aeruginosa ATCC. 27853. На каждые 500 выполненных тестов Etest будет проводиться контрольный тест, включающий 5 вышеуказанных контрольных штаммов.
   • Молекулярные исследования. Изоляты с экспрессией ESBL будут дополнительно типизированы с использованием метода гель-электрофореза в пульсирующем поле (PFGE). Подробные процедуры PFGE и интерпретация моделей полос PFGE аналогичны описанию в нашем предыдущем отчете (13).

Анализ данных

Изоляты подразделяются на чувствительные, промежуточные и устойчивые в соответствии с рекомендациями CLSI. Изоляты с промежуточной или резистентной устойчивостью к противомикробным агентам также классифицируются как нечувствительные к агентам. Показатели невосприимчивости среди основных бактериальных патогенов будут проанализированы в зависимости от различных мест заражения и происхождения изолятов. Будут проанализированы связи между географическим регионом, типами больниц, из которых были получены эти изоляты, и чувствительностью к противомикробным препаратам.