A kiterjesztett spektrumú β-laktamáz (ESBL) izolátumokat termelő prevalenciája a gyakori Enterobacteriaceae között Tajvanon

Anyagok és metódusok

1. Bakteriális izolátumok gyűjteménye

   Az Országos Egészségügyi Kutatóintézet munkatársai 1998 óta 22-44 kórházban hozták létre az antimikrobiális rezisztencia hosszú távú felügyeletét a tajvani és tajvani antimikrobiális rezisztencia (TSAR) minden részén. Öt alkalommal hajtották végre 1998-ban, 2000-ben, 2002-ben, 2004-ben és 2006-ban, és TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV és TSAR-V ​​néven nevezték el. Ebben a vizsgálatban a TSAR-IV-ből származó Enterobacteriaceas izolátumokat toborozzák. Minden 50 Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens és Morganella morganii izolátumot (a TSAR IV gyűjtött izolátumok körülbelül 10%-a) bevonnak a következő mikrobiológiai vizsgálatokba.

   Az izolátumokat szűrővizsgálatokkal ESBL-termelő vagy nem termelő csoportokra osztják. Az összes rendelkezésre álló izolátumot faj vagy nemzetség szintjén azonosítottuk hagyományos módszerekkel. Az azonos fajból származó izolátumok, amelyeket ugyanattól az egyéni betegtől kinyertek, egy izolátumnak tekintendők. Az izolátumokat -70 °C-on triptikáz szójalevesben (Difco Laboratories, Detroit, MI) tároltuk, 15% glicerinnel kiegészítve a tesztelés előtt.

2. Adatgyűjtés

   Az egyes izolátumokhoz gyűjtött információk a következőket tartalmazták: a gyűjtés dátuma, a vizsgálat dátuma, az azonosítás, a fertőzés helye, a beteg kórházi egysége, valamint az, hogy az izolátumot a közösségben szerezték-e be (azaz a mintát a felvétel után kevesebb mint 48 órával vették), a beteg időtartama kórházi tartózkodás. Az összes izolált megcélzott antimikrobiális szerrel szembeni érzékenységét a minimális gátlókoncentráció (MIC) határozza meg, követve a megfelelő antimikrobiális szerek CLSI töréspontjait.

3. Antimikrobiális érzékenységi vizsgálat

   • Oltóanyag készítése Steril sóoldat (0,85% NaCl), megfelelő puffer vagy táptalaj az oltóanyag elkészítéséhez, a szervezettől függően. Az aerobokra és más mikroorganizmusokra vonatkozó CLSI inokulum eljárást kell alkalmazni. A 0,5 McFarland zavarosság az aerobok szabványa lesz.
   • Beoltás Az optimális mennyiségű oltóanyag-szuszpenzió eléréséhez használjon steril hurkokat/tamponokat. Háromszor törölje le az agar teljes felületét; a lemezt minden alkalommal körülbelül 90 fokkal elforgatva az inokulumok egyenletes eloszlásának biztosítása érdekében. Hagyja, hogy a felesleges nedvesség felszívódjon körülbelül 10-15 percig, hogy a felület teljesen megszáradjon, mielőtt az E tesztcsíkokat felhelyezné.
   • E tesztcsíkok felhordása Győződjön meg arról, hogy az oltott agar felülete teljesen megszáradt, mielőtt az E tesztcsíkokat felhelyezné. Etest applikátorral vagy csipesszel fogja meg a csík fogantyúját (E jelzéssel vannak ellátva), és helyezze a beoltott agar felületére, ügyelve arra, hogy a MIC skála felfelé nézzen, és hogy a maximális koncentráció a legközelebb legyen a csík széléhez. lemez. Győződjön meg arról, hogy az egész csík teljesen érintkezik az agar felületével. A felhelyezés után a csík nem mozgatható, mert az antibiotikum azonnal felszabadul az agarba. 150 m-es agarlemezre 4-6 különböző E tesztcsíkot javasolunk felvinni. Ebben a vizsgálatban hat antimikrobiális szer E tesztcsíkjait alkalmazzák az ertapenem mellett, beleértve a cefepimet, cefepimet és klavulánsavat (az ESBL-t termelő izolátumok azonosítására), ciprofloxacint, cefmetazolt, amikacint, tigeciklint.
   • Inkubálás Az alkalmazott inkubációs hőmérsékletnek és légkörnek optimálisnak kell lennie bizonyos baktériumfajok és a vizsgált antibiotikum növekedéséhez. A CLSI 35 ℃/16-18 óra/környezeti légkört ajánl a nem igényes aerobok és a fakultatív anaerobok számára.
   • A MIC leolvasása Az inkubációs időszak letelte után, és amikor a baktériumok szaporodása jól láthatóvá válik, olvassa le a MIC értéket a gátlási ellipszis éle és az E tesztcsík metszéspontjában. Használja az E teszt olvasási útmutatót és más műszaki útmutatókat a különböző minták helyes olvasásához. E-tesztcsíkot (AB Biodisk, Solna, Svédország), amely cefepimet (MIC vizsgálati tartomány, 0,25-16 mg/l) és cefepimet (MIC vizsgálati tartomány, 0,064-4 mg/L) és 4 mg/l klavulánsavat tartalmaz a kimutatáshoz. az ESBL kifejeződése a gyártó utasítása szerint.a MIC ≥3-szoros hígítással történő csökkentése klavulánsav jelenlétében az ESBL termelés indikátora. Az ellipszisek deformációja vagy a "fantom" zóna jelenléte is jelzi az ESBL-termelést, még akkor is, ha a MIC arány <8 vagy nem olvasható.
   • Minőségellenőrzés A rendszer ellenőrzése érdekében a megfelelő kezelés, az anyagok és módszerek minősége és konzisztenciája tekintetében tesztelje a minőségellenőrző törzseket az érintett antibiotikumokkal. A S. pneumoniae és a H. influenzae baktériumleves mikrohígítással határozható meg környezeti inkubáció mellett. Kontrolltörzsként a következő szervezetek szerepelnek: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC, 700AT603 és P. 27853. Minden 500 elvégzett E-teszt után a fenti 5 kontroll törzset tartalmazó kontrolltesztet kell végezni.
   • Molekuláris vizsgálatok Az ESBL-eket expresszáló izolátumokat tovább tipizáljuk Pulsed field gélelektroforézis (PFGE) módszerrel. A PFGE részletes eljárásait és a PFGE sávozási mintáinak értelmezéseit korábbi jelentésünkben leírtuk (13).

Adatelemzés

Az izolátumokat a CLSI irányelvei szerint érzékeny, közepes és rezisztens kategóriába sorolják. Az antimikrobiális szerekkel szemben közepes vagy rezisztens izolátumok szintén a szerekre nem érzékenyek kategóriába tartoznak. A főbb bakteriális kórokozók közötti nem fogékonyság arányát a különböző fertőzési helyek és az izolátumok eredete szerint elemezzük. Elemezni fogjuk a földrajzi terület, azon kórháztípusok közötti összefüggéseket, ahonnan ezek az izolátumok származtak az antimikrobiális érzékenység ellen.