Prevalensen av extend-spektrum β-laktamas (ESBL) som producerar isolat bland vanliga Enterobacteriaceae i Taiwan

Material och metoder

1. Samling av bakterieisolat

   Personalen i National Health Research Institute har etablerat en långtidsövervakning av antimikrobiell resistens från 22 till 44 sjukhus distribuerade i alla delar av Taiwan-Taiwan Surveillance of Antimicrobial Resistance (TSAR) sedan 1998. Det har genomförts fem gånger under åren 1998, 2000, 2002, 2004 och 2006 och namngavs som TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV och TSAR-V. I denna studie kommer isolat av Enterobacteriaceas från TSAR-IV att rekryteras. Varje 50 isolat av Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens och Morganella morganii kommer att registreras (cirka 10 % av de TSAR IV insamlade isolaten) för följande mikrobiologiska studier.

   Isolat kommer att delas in i ESBL-producerande eller icke-producerande grupper genom screeningtest. Alla tillgängliga isolat identifierades till art- eller genusnivå med hjälp av konventionella metoder. Isolat med samma art som återvunnits från samma en enskild patient, anses vara ett isolat. Isolaten lagrades alla vid -70 ℃ i tryptikas sojabuljong (Difco Laboratories, Detroit, MI) kompletterat med 15 % glycerol innan de testades.

2. Datainsamling

   Information som samlades in för varje isolat inkluderade: insamlingsdatum, testdatum, identifiering, infektionsställe, patientens sjukhusenhet och om isolatet förvärvades i samhället (dvs. prov som tagits <48 timmar efter intagning), längden på patientens vårdtid. sjukhusvistelse. Mottagligheten för alla isolerade mot riktade antimikrobiella medel kommer att bestämmas av deras minsta hämmande koncentration (MIC-värden) enligt CLSI-brytpunkterna för respektive antimikrobiellt medel.

3. Antimikrobiell känslighetstestning

   • Inokulumberedning Steril saltlösning (0,85 % NaCl), lämplig buffert eller buljong för inokulumberedning, beroende på organism. CLSI-ympningsproceduren för aerober och andra mikroorganismer bör användas. 0,5 McFarland-turbiditet kommer att användas som standard för aerober.
   • Inokulering Använd sterila öglor/pinnar för att erhålla optimal mängd ympsuspension. Torka av hela agarytan tre gånger; rotera plattan cirka 90 grader varje gång för att säkerställa en jämn fördelning av inokulum. Låt överflödig fukt absorberas i ca 10-15 minuter så att ytan är helt torr innan E-teststickor appliceras.
   • Applicering av E-testremsor Se till att den inokulerade agarytan är helt torr innan E-testremsorna appliceras. Använd en Etest-applikator eller använd en pincett för att ta tag i handtaget på remsan (är märkta E) och placera dem på den inokulerade agarytan, se till att MIC-skalan är vänd uppåt och att den maximala koncentrationen är närmast kanten av tallrik. Se till att hela remsan är i fullständig kontakt med agarytan. När den väl applicerats kan remsan inte flyttas på grund av den omedelbara frisättningen av antibiotika i agarn. Det rekommenderas att applicera 4-6 olika E-testremsor på en 150 m agarplatta. I denna studie kommer E-testremsorna med sex antimikrobiella medel, inklusive cefepim, cefepim plus klavulansyra (för identifiering av ESBL-producerande isolat), ciprofloxacin, cefmetazol, amikacin, tigecyklin att appliceras förutom ertapenem.
   • Inkubation Inkubationstemperaturen och atmosfären som används måste vara optimala för tillväxt av särskilda bakteriearter och det antibiotikum som testas. CLSI rekommenderar 35 ℃/16-18 timmar/omgivande atmosfär för icke-kräsna aerober och fakultativa anaerober.
   • Avläsning av MIC Efter avslutad inkubationsperiod och när bakterietillväxt blir tydligt synlig, läs av MIC-värdet vid skärningspunkten mellan hämningsellipsens kant och E-testremsan. Använd E-testläsguiden och andra tekniska guider för att korrekt läsa olika mönster. Etestremsa (AB Biodisk, Solna, Sverige) som innehåller cefepim (MIC-testområde, 0,25-16 mg/L) och cefepim (MIC-testområde, 0,064-4 mg/L) plus 4 mg/L klavulansyra kommer att användas för att detektera uttrycket av ESBL enligt tillverkarens instruktioner. minskning av MIC med ≥3 tvåfaldiga spädningar i närvaro av klavulansyra är en indikator på ESBL-produktion. Deformation av ellipserna eller närvaron av "fantom"-zon är också en indikator på ESBL-produktion även om MIC-förhållandet är <8 eller inte kan avläsas.
   • Kvalitetskontroll För att kontrollera systemet med avseende på korrekt hantering, kvalitet och konsistens av material och metoder, testa kvalitetskontrollstammar med berörda antibiotika. S. pneumoniae och H. influenzae kan bestämmas genom mikroutspädning av buljong under omgivande inkubation. Följande organismer är inkluderade som kontrollstammar: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae, Pneumoniae 060Augin . 27853. För varje 500 utförda Etester kommer ett kontrolltest som inkluderar de 5 kontrollstammarna ovan att göras.
   • Molekylära studier Isolat med expression av ESBL kommer att typas ytterligare med hjälp av Pulserad fältgelelektrofores (PFGE) metod. De detaljerade procedurerna för PFGE och tolkningarna av PFGE-bandmönster är som beskrivningen i vår tidigare rapport (13).

Dataanalys

Isolat kategoriseras i känsliga, mellanliggande och resistenta enligt riktlinjerna från CLSI. Isolat som är mellanliggande eller resistenta mot antimikrobiella medel kategoriseras också som okänsliga för medlen. Graden av okänslighet bland viktiga bakteriella patogener kommer att analyseras i enlighet med de olika infektionsställena och isolatens ursprung. Sambanden mellan geografiskt område, sjukhustyper från vilka dessa isolat erhölls mot den antimikrobiella känsligheten kommer att analyseras.