대만의 Common Enterobacteriaceae 중 Extend-Spectrum β-Lactamase (ESBL) 생산 분리주의 유병률

재료 및 방법

1. 세균 분리물의 수집

   National Health Research Institute의 직원들은 1998년부터 대만-대만 항생제 내성 감시(TSAR)의 모든 지역에 분포된 22~44개 병원의 항생제 내성에 대한 장기 감시를 확립했습니다. 1998년, 2000년, 2002년, 2004년, 2006년 총 5회 실시되었으며 TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV, TSAR-V로 명명되었다. 이 연구에서는 TSAR-IV의 장내세균 분리주를 모집합니다. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens 및 Morganella morganii의 각 50개의 분리주가 다음 미생물 연구를 위해 등록됩니다(TSAR IV 수집된 분리주의 약 10%).

   분리주는 선별 검사를 통해 ESBL 생산 그룹과 비생산 그룹으로 나뉩니다. 사용 가능한 모든 분리주를 기존의 방법을 통해 종 또는 속 수준으로 식별했습니다. 동일한 개별 환자로부터 회수된 동일한 종의 분리주는 하나의 분리주로 간주됩니다. 분리균은 모두 시험 전 15% 글리세롤이 첨가된 trypticase soy broth(Difco Laboratories, Detroit, MI)에 -70℃에서 보관하였다.

2. 데이터 수집

   각 격리에 대해 수집된 정보에는 다음이 포함됩니다. 수집 날짜, 검사 날짜, 식별, 감염 부위, 환자의 병원 단위, 격리가 지역사회에서 획득되었는지 여부(즉, 입원 후 48시간 미만에서 얻은 검체), 환자의 기간 입원. 표적 항균제에 대한 모든 단리물의 감수성은 각각의 항균제에 대한 CLSI 중단점을 따르는 최소 억제 농도(MIC 값)에 의해 결정될 것이다.

3. 항균제 감수성 검사

   • 접종물 준비 멸균 식염수(0.85% NaCl), 유기체에 따라 접종물 준비에 적합한 완충액 또는 국물. 호기성 미생물 및 기타 미생물에 대한 CLSI 접종 절차를 사용해야 합니다. 0.5 McFarland 탁도는 호기성 미생물의 표준으로 사용됩니다.
   • 접종 멸균 루프/면봉을 사용하여 최적의 접종 현탁액 양을 얻습니다. 전체 한천 표면을 세 번 닦으십시오. 접종물이 고르게 분포되도록 매번 플레이트를 약 90도 회전시킵니다. E 테스트 스트립을 적용하기 전에 표면이 완전히 건조되도록 약 10-15분 동안 과도한 수분을 흡수하도록 합니다.
   • E 테스트 스트립 적용 E 테스트 스트립을 적용하기 전에 접종된 한천 표면이 완전히 건조되었는지 확인하십시오. Etest 애플리케이터를 사용하거나 집게를 사용하여 스트립의 핸들(E로 표시됨)을 잡고 접종된 한천 표면에 놓고 MIC 눈금이 위쪽을 향하고 최대 농도가 가장자리에 가장 가깝도록 합니다. 그릇. 전체 스트립이 한천 표면과 완전히 접촉하는지 확인하십시오. 한천에 항생제가 즉시 방출되기 때문에 스트립을 한 번 바르면 이동할 수 없습니다. 4-6개의 다른 E 테스트 스트립을 150m 한천 플레이트에 적용하는 것이 좋습니다. 본 연구에서는 ertapenem 외에 cefepime, cefepime + clavulanic acid(ESBL 생성 분리주 확인용), ciprofloxacin, cefmetazole, amikacin, tigecycline 등 6종의 항균제 E test strip을 적용할 예정이다.
   • 배양 사용되는 배양 온도와 분위기는 특정 박테리아 종의 성장과 테스트 중인 항생제에 최적이어야 합니다. CLSI는 까다로운 호기성 미생물 및 조건성 혐기성 미생물에 대해 35℃/16-18시간/주위를 권장합니다.
   • MIC 판독 배양 기간이 완료된 후 박테리아 성장이 뚜렷하게 보일 때 억제 타원 가장자리와 E 테스트 스트립 사이의 교차점에서 MIC 값을 판독합니다. E 테스트 읽기 가이드 및 기타 기술 가이드를 사용하여 다른 패턴을 올바르게 읽으십시오. cefepime(MIC 테스트 범위, 0.25-16mg/L) 및 cefepime(MIC 테스트 범위, 0.064-4mg/L) + 4mg/L clavulanic acid를 포함하는 E테스트 스트립(AB Biodisk, 스웨덴 Solna)을 사용하여 검출합니다. 제조업체의 지침에 따른 ESBL의 발현. clavulanic acid의 존재 하에 3배 이상의 2배 희석에 의한 MIC의 감소는 ESBL 생산의 지표입니다. 타원의 변형 또는 "팬텀" 영역의 존재는 MIC 비율이 <8이거나 읽을 수 없는 경우에도 ESBL 생성의 지표입니다.
   • 품질 관리 올바른 취급, 재료 및 방법의 품질 및 일관성과 관련하여 시스템을 확인하기 위해 관련 항생제로 품질 관리 균주를 테스트합니다. S. 뉴모니아 및 H. 인플루엔자는 주변 배양 하에서 국물 미세 희석에 의해 결정될 수 있습니다. 다음 유기체가 대조군 균주로서 포함된다: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700603 및 P. aeruginosa ATCC 27853. 500 Etest를 수행할 때마다 위의 5가지 대조 균주를 포함하는 대조 시험이 수행됩니다.
   • 분자 연구 ESBL 발현이 있는 분리주는 PFGE(Pulsed field gel electrophoresis) 방법을 사용하여 추가로 유형을 지정합니다. PFGE의 세부 절차 및 PFGE 밴딩 패턴의 해석은 이전 보고서(13)의 설명과 같습니다.

데이터 분석

분리주는 CLSI에서 제공하는 지침에 따라 감수성, 중간, 저항성으로 분류됩니다. 항균제에 대한 중간 또는 내성을 분리하는 것도 약제에 대해 감수성이 없는 것으로 분류됩니다. 주요 세균성 병원균의 비감수성 비율은 다양한 감염 부위와 분리물의 기원에 따라 분석될 것입니다. 항균제 감수성에 대해 이러한 분리주를 얻은 지리적 영역, 병원 유형 간의 연관성을 분석할 것입니다.