De prevalentie van Extend-Spectrum β-Lactamase (ESBL) die isolaten produceert onder veel voorkomende Enterobacteriaceae in Taiwan

Materialen en methodes

1. Verzameling van bacteriële isolaten

   Het personeel van het National Health Research Institute heeft sinds 1998 een langetermijnsurveillance van antimicrobiële resistentie opgezet in 22 tot 44 ziekenhuizen verspreid over alle delen van Taiwan-Taiwan Surveillance of Antimicrobial Resistance (TSAR). Het is vijf keer uitgevoerd in het jaar 1998, 2000, 2002, 2004 en 2006 en werd genoemd als TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV en TSAR-V. In deze studie zullen isolaten van Enterobacteriaceas uit TSAR-IV worden gerekruteerd. Elke 50 isolaten van Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens en Morganella morganii zullen worden ingeschreven (ongeveer 10% van de TSAR IV verzamelde isolaten) voor de volgende microbiologische onderzoeken.

   Isolaten zullen door middel van screeningstests worden verdeeld in ESBL-producerende of niet-producerende groepen. Alle beschikbare isolaten werden geïdentificeerd tot op soort- of geslachtsniveau door middel van conventionele methoden. Isolaten met dezelfde soort die bij dezelfde individuele patiënt zijn gevonden, worden als één isolaat beschouwd. De isolaten werden allemaal bewaard bij -70°C in trypticase-sojabouillon (Difco Laboratories, Detroit, MI) aangevuld met 15% glycerol voordat ze werden getest.

2. Gegevensverzameling

   Informatie die voor elk isolaat werd verzameld, omvatte: verzameldatum, testdatum, identificatie, plaats van infectie, ziekenhuisafdeling van de patiënt en of het isolaat in de gemeenschap was verkregen (d.w.z. monster verkregen <48 uur na opname), de duur van de patiënt ziekenhuisopname. De gevoeligheid van alle geïsoleerde middelen voor gerichte antimicrobiële middelen zal worden bepaald door hun minimale remmende concentratie (MIC-waarden) volgens de CLSI-breekpunten voor het respectieve antimicrobiële middel.

3. Testen op antimicrobiële gevoeligheid

   • Bereiding van inoculums Steriele zoutoplossing (0,85% NaCl), geschikte buffer of bouillon voor inoculumbereiding, afhankelijk van het organisme. De CLSI-inoculumprocedure voor aeroben en andere micro-organismen moet worden gebruikt. 0,5 McFarland troebelheid zal worden gebruikt als de standaard voor aeroben.
   • Inoculatie Gebruik steriele lussen/wattenstaafjes om een ​​optimale hoeveelheid inoculumsuspensie te verkrijgen. Veeg drie keer over het hele agar-oppervlak; draai de plaat elke keer ongeveer 90 graden om een ​​gelijkmatige verdeling van inoculums te verzekeren. Laat overtollig vocht ongeveer 10-15 minuten intrekken zodat het oppervlak volledig droog is voordat u E-teststrips aanbrengt.
   • Aanbrengen van E-teststrips Zorg ervoor dat het geïnoculeerde agar-oppervlak volledig droog is voordat u E-teststrips aanbrengt. Gebruik een Etest-applicator of gebruik een pincet om het handvat van de strip vast te pakken (gelabeld met E) en plaats ze op het geïnoculeerde agar-oppervlak, waarbij u ervoor zorgt dat de MIC-schaal naar boven wijst en dat het concentratiemaximum zich het dichtst bij de rand van de strip bevindt. bord. Zorg ervoor dat de hele strip volledig contact maakt met het agar-oppervlak. Eenmaal aangebracht, kan de strip niet worden verplaatst vanwege de onmiddellijke afgifte van antibioticum in de agar. Het wordt aanbevolen om 4-6 verschillende E-teststrips op een agarplaat van 150 m aan te brengen. In deze studie zullen naast ertapenem de E-teststrips van zes antimicrobiële middelen, waaronder cefepime, cefepime plus clavulaanzuur (voor de identificatie van ESBL-producerende isolaten), ciprofloxacine, cefmetazol, amikacine, tigecycline, worden toegepast.
   • Incubatie De gebruikte incubatietemperatuur en -atmosfeer moeten optimaal zijn voor de groei van bepaalde bacteriesoorten en het antibioticum dat wordt getest. CLSI beveelt 35 ℃ / 16-18 uur / omgevingsatmosfeer aan voor niet-kieskeurige aeroben en facultatieve anaëroben.
   • Aflezen van de MIC Na afloop van de incubatieperiode en wanneer bacteriegroei duidelijk zichtbaar wordt, leest u de MIC-waarde af op het snijpunt tussen de inhibitie-ellipsrand en de E-teststrip. Gebruik de E-testleesgids en andere technische handleidingen om verschillende patronen correct te lezen. Een teststrip (AB Biodisk, Solna, Zweden) met cefepime (MIC-testbereik, 0,25-16 mg/L) en cefepime (MIC-testbereik, 0,064-4 mg/L) plus 4 mg/L clavulaanzuur zal worden gebruikt om de expressie van ESBL volgens de instructies van de fabrikant. verlaging van MIC met ≥3 tweevoudige verdunningen in aanwezigheid van clavulaanzuur is een indicator van ESBL-productie. Vervorming van de ellipsen of de aanwezigheid van een "fantoom"-zone is ook een indicator van ESBL-productie, zelfs als de MIC-ratio <8 is of niet kan worden gelezen.
   • Kwaliteitscontrole Om het systeem te controleren op juiste hantering, kwaliteit en consistentie van materialen en werkwijzen worden kwaliteitscontrolestammen getest met de betreffende antibiotica. S. pneumoniae en H. influenzae kunnen worden bepaald door bouillonmicrodilutie onder omgevingsincubatie. De volgende organismen zijn opgenomen als controlestammen: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700603 en P. aeruginosa ATCC 27853. Voor elke 500 uitgevoerde Etests wordt een controletest met de bovenstaande 5 controlestammen uitgevoerd.
   • Moleculaire studies Isolaten met expressie van ESBL's zullen verder worden getypeerd met behulp van Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) methode. De gedetailleerde procedures van PFGE en de interpretaties van PFGE-bandpatronen zijn zoals beschreven in ons vorige rapport (13).

Gegevensanalyse

Isolaten worden volgens de richtlijnen van de CLSI ingedeeld in gevoelig, intermediair en resistent. Isolaten die intermediair zijn of resistent zijn tegen antimicrobiële middelen, worden ook gecategoriseerd als niet-gevoelig voor de middelen. De mate van niet-gevoeligheid onder de belangrijkste bacteriële pathogenen zal worden geanalyseerd volgens de verschillende infectieplaatsen en de oorsprong van de isolaten. De associaties tussen geografisch gebied, ziekenhuistypes van wie deze isolaten werden verkregen tegen de antimicrobiële gevoeligheid zullen worden geanalyseerd.