Laajennetun spektrin β-laktamaasia (ESBL) tuottavien isolaattien esiintyvyys yleisten enterobakteerien joukossa Taiwanissa

Materiaalit ja menetelmät

1. Bakteeri-isolaattien kokoelma

   National Health Research Instituten henkilökunta on perustanut mikrobilääkeresistenssin pitkän aikavälin seurannan 22–44 sairaalassa, jotka on jaettu Taiwanin ja Taiwanin antimikrobisen resistenssin valvonnan (TSAR) kaikkiin osiin vuodesta 1998 lähtien. Se on toteutettu viisi kertaa vuosina 1998, 2000, 2002, 2004 ja 2006, ja ne on nimetty TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV ja TSAR-V. Tässä tutkimuksessa rekrytoidaan Enterobacteriaceas-isolaatteja TSAR-IV:stä. Jokainen 50 Escherichia coli-, Klebsiella pneumoniae-, Proteus mirabilis-, Enterobacter cloacae-, Serratia marcescens- ja Morganella morganii -isolaattia rekisteröidään (noin 10 % TSAR IV:stä kerätyistä isolaateista) seuraaviin mikrobiologisiin tutkimuksiin.

   Isolaatit jaetaan ESBL:tä tuottaviin tai ei-tuottaviin ryhmiin seulontatesteillä. Kaikki saatavilla olevat isolaatit tunnistettiin laji- tai sukutasolle tavanomaisin menetelmin. Samasta yksittäisestä potilaasta talteen saadut saman lajin isolaatit katsotaan yhdeksi isolaatiksi. Kaikki isolaatit säilytettiin -70 ℃:ssa tryptikaasisoijaliemessä (Difco Laboratories, Detroit, MI), johon oli lisätty 15 % glyserolia ennen testaamista.

2. Tiedonkeruu

   Kustakin isolaatista kerätyt tiedot sisälsivät: keräyspäivämäärä, testipäivämäärä, tunniste, infektiopaikka, potilaan sairaalayksikkö ja onko isolaatti hankittu yhteisöstä (eli näyte otettu alle 48 tuntia vastaanoton jälkeen), potilaan pituus sairaalassa oleskelua. Kaikkien eristettyjen herkkyys kohdennetuille mikrobilääkkeille määräytyy niiden vähimmäisinhibitorisen pitoisuuden (MIC-arvojen) perusteella, jotka noudattavat kunkin antimikrobisen aineen CLSI-raja-arvoja.

3. Antimikrobinen herkkyystestaus

   • Inokulaattien valmistus Steriili suolaliuos (0,85 % NaCl), sopiva puskuri tai liemi ymppien valmistukseen organismista riippuen. Aerobeille ja muille mikro-organismeille tulee käyttää CLSI-siirrostemenettelyä. Aerobien standardina käytetään 0,5 McFarland-sameutta.
   • Inokulaatio Käytä steriilejä silmukoita/puikkoja saadaksesi optimaalisen määrän ymppisuspensiota. Pyyhkäise koko agarin pinta kolme kertaa; kääntämällä levyä noin 90 astetta joka kerta, jotta varmistetaan ymppäysten tasainen jakautuminen. Anna ylimääräisen kosteuden imeytyä noin 10-15 minuuttia, jotta pinta on täysin kuiva ennen E-testiliuskojen levittämistä.
   • E-testiliuskojen levitys Varmista, että inokuloitu agarin pinta on täysin kuiva ennen E-testiliuskojen levittämistä. Käytä Etest-applikaattoria tai pihdit tarttumaan liuskan kahvaan (merkitty E) ja aseta ne inokuloidulle agarpinnalle varmistaen, että MIC-asteikko on ylöspäin ja että pitoisuuden maksimi on lähimpänä liuskan reunaa. lautanen. Varmista, että koko liuska on täydellisessä kosketuksessa agar-pinnan kanssa. Kun liuska on levitetty, sitä ei voi siirtää, koska antibiootti vapautuu välittömästi agariin. 150 m agarmaljalle suositellaan 4-6 erilaista E-testiliuskaa. Tässä tutkimuksessa käytetään ertapeneemin lisäksi kuuden antimikrobisen aineen E-testiliuskoja, mukaan lukien kefepiimi, kefepiimi ja klavulaanihappo (ESBL:ää tuottavien isolaattien tunnistamiseen), siprofloksasiini, kefmetatsoli, amikasiini, tigesykliini.
   • Inkubointi Inkubointilämpötilan ja -ilman tulee olla optimaalisia tiettyjen bakteerilajien ja testattavan antibiootin kasvulle. CLSI suosittelee 35 ℃/16-18 tuntia/ympäristön ilmakehä ei-fastidio-aerobeille ja fakultatiivisille anaerobeille.
   • MIC:n lukeminen Inkuboinnin jälkeen ja kun bakteerikasvu tulee selvästi näkyviin, lue MIC-arvo esto-ellipsireunan ja E-testiliuskan leikkauspisteestä. Käytä E-testin lukuopasta ja muita teknisiä oppaita eri kuvioiden lukemiseen oikein. Toteamiseen käytetään E-testiliuskaa (AB Biodisk, Solna, Ruotsi), joka sisältää kefepiimiä (MIC-testialue, 0,25-16 mg/l) ja kefepiimiä (MIC-testialue, 0,064-4 mg/L) sekä 4 mg/l klavulaanihappoa. ESBL:n ilmentyminen valmistajan ohjeiden mukaisesti.MIC:n pieneneminen ≥3 kaksinkertaisella laimennuksella klavulaanihapon läsnä ollessa on ESBL-tuotannon indikaattori. Ellipsien muodonmuutos tai "fantomi"-vyöhykkeen esiintyminen on myös indikaattori ESBL-tuotannosta, vaikka MIC-suhde on <8 tai sitä ei voida lukea.
   • Laadunvalvonta Testaa laadunvalvontakannat kyseisillä antibiooteilla, jotta voidaan tarkistaa järjestelmän oikea käsittely, materiaalien ja menetelmien laatu ja yhtenäisyys. S. pneumoniae ja H. influenzae voidaan määrittää liemen mikrolaimennuksella ympäristön inkuboinnissa. Seuraavat organismit sisältyvät kontrollikannoiksi: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC 700AT603 ja P. 27853. Jokaista 500 suoritettua E-testiä kohden tehdään kontrollitesti, joka sisältää edellä mainitut 5 kontrollikantaa.
   • Molekyylitutkimukset Isolaatit, joissa on ESBL:ien ilmentymistä, tyypitetään edelleen käyttämällä pulssikenttägeelielektroforeesi (PFGE) -menetelmää. PFGE:n yksityiskohtaiset menettelyt ja PFGE:n nauhakuvioiden tulkinnat ovat edellisessä raportissamme kuvattuja (13).

Tietojen analysointi

Isolaatit luokitellaan herkkiin, keskitasoihin ja kestäviin CLSI:n ohjeiden mukaisesti. Isolaatit, jotka ovat keskitasoa tai resistenttejä antimikrobisille aineille, luokitellaan myös ei-herkiksi aineille. Suurten bakteeripatogeenien herkkyysasteet analysoidaan eri infektiopaikkojen ja isolaattien alkuperän mukaan. Maantieteellisten alueiden ja sairaalatyyppien välisiä assosiaatioita, joista nämä isolaatit on saatu, analysoidaan mikrobien herkkyyttä vastaan.