Prevalence izolátů produkujících β-laktamázu s rozšířeným spektrem (ESBL) mezi běžnými Enterobacteriaceae na Tchaj-wanu

Materiály a metody

1. Sběr bakteriálních izolátů

   Zaměstnanci National Health Research Institute zavedli od roku 1998 dlouhodobý dohled nad antimikrobiální rezistencí ve 22 až 44 nemocnicích rozmístěných ve všech částech Tchaj-wanu a Tchaj-wanu (TSAR). Bylo provedeno pětkrát v letech 1998, 2000, 2002, 2004 a 2006 a byly pojmenovány jako TSAR-I, TSAR-II, TSAR-III, TSAR-IV a TSAR-V. V této studii budou získány izoláty Enterobacteriaceas z TSAR-IV. Každých 50 izolátů Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens a Morganella morganii bude zařazeno (asi 10 % izolátů shromážděných TSAR IV) pro následující mikrobiologické studie.

   Izoláty budou rozděleny do skupin produkujících ESBL nebo neprodukujících skupin pomocí screeningových testů. Všechny dostupné izoláty byly identifikovány na úrovni druhu nebo rodu pomocí konvenčních metod. Izoláty stejného druhu získané od stejného jednotlivého pacienta jsou považovány za jeden izolát. Všechny izoláty byly před testováním skladovány při -70 °C v tryptikázovém sojovém bujónu (Difco Laboratories, Detroit, MI) doplněném 15% glycerolem.

2. Sběr dat

   Informace shromážděné pro každý izolát zahrnovaly: datum odběru, datum testu, identifikaci, místo infekce, nemocniční jednotku pacienta a to, zda byl izolát získán v komunitě (tj. vzorek získaný <48 hodin po přijetí), délku pacientovy pobyt v nemocnici. Citlivost všech izolovaných proti cíleným antimikrobiálním činidlům bude určena jejich minimální inhibiční koncentrací (hodnoty MIC) podle CLSI breakpointů pro příslušné antimikrobiální činidlo.

3. Testování antimikrobiální citlivosti

   • Příprava inokul Sterilní fyziologický roztok (0,85 % NaCl), vhodný pufr nebo bujón pro přípravu inokul v závislosti na organismu. Měl by být použit postup CLSI inokulum pro aerobní a jiné mikroorganismy. 0,5 McFarlandova zákalu bude použito jako standard pro aeroby.
   • Inokulace K získání optimálního množství suspenze inokula použijte sterilní smyčky/tapony. Třikrát otřete celý povrch agaru; otočením destičky pokaždé přibližně o 90 stupňů, aby bylo zajištěno rovnoměrné rozložení inokula. Před aplikací testovacích proužků E nechte asi 10-15 minut absorbovat přebytečnou vlhkost, aby byl povrch zcela suchý.
   • Aplikace testovacích proužků E Před aplikací testovacích proužků E se ujistěte, že je povrch inokulovaného agaru zcela suchý. Použijte aplikátor Etest nebo pomocí pinzety uchopte rukojeť proužku (jsou označeny E) a umístěte je na povrch naočkovaného agaru, přičemž se ujistěte, že stupnice MIC směřuje nahoru a že maximum koncentrace je nejblíže k okraji proužku. talíř. Ujistěte se, že je celý proužek v úplném kontaktu s povrchem agaru. Po nanesení nelze s proužkem pohybovat, protože antibiotikum se okamžitě uvolňuje do agaru. Doporučuje se aplikovat 4-6 různých E testovacích proužků na 150 m agarovou misku. V této studii budou kromě ertapenemu aplikovány E testovací proužky šesti antimikrobiálních látek, včetně cefepimu, cefepimu plus kyseliny klavulanové (pro identifikaci izolátů produkujících ESBL), ciprofloxacinu, cefmetazolu, amikacinu a tigecyklinu.
   • Inkubace Použitá inkubační teplota a atmosféra musí být optimální pro růst konkrétního bakteriálního druhu a testovaného antibiotika. CLSI doporučuje 35℃/16-18 hodin/okolní atmosféru pro nenáročné aeroby a fakultativní anaeroby.
   • Odečet MIC Po skončení inkubační doby a když se bakteriální růst stane zřetelně viditelným, odečtěte hodnotu MIC v bodě průsečíku mezi okrajem inhibiční elipsy a E testovacím proužkem. Ke správnému čtení různých vzorů použijte Průvodce čtením testu E a další technické příručky. K detekci bude použit Etest proužek (AB Biodisk, Solna, Švédsko) obsahující cefepim (rozsah testu MIC, 0,25–16 mg/l) a cefepim (rozsah testu MIC, 0,064–4 mg/l) plus 4 mg/l kyseliny klavulanové. exprese ESBL podle pokynů výrobce. snížení MIC o ≥3 dvojnásobné ředění v přítomnosti kyseliny klavulanové je indikátorem produkce ESBL. Deformace elips nebo přítomnost "fantomové" zóny je také indikátorem produkce ESBL, i když je poměr MIC <8 nebo jej nelze přečíst.
   • Kontrola kvality Za účelem kontroly systému z hlediska správné manipulace, kvality a konzistence materiálů a metod otestujte kmeny kontroly kvality s příslušnými antibiotiky. S. pneumoniae a H. influenzae mohou být stanoveny mikroředěním živné půdy za inkubace při okolní teplotě. Následující organismy jsou zahrnuty jako kontrolní kmeny: S. aureus ATCC 29213, E. faecalis ATCC 29212, S. pneumoniae ATCC 49619, E. coli ATCC 25922, E. coli ATCC 35218, K. pneumoniae ATCC a3er 7006 27853. Na každých 500 provedených Etestů bude proveden kontrolní test zahrnující výše uvedených 5 kontrolních kmenů.
   • Molekulární studie Izoláty s expresí ESBL budou dále typizovány metodou pulzní gelové elektroforézy (PFGE). Podrobné postupy PFGE a interpretace vzorů pruhování PFGE jsou popsány v naší předchozí zprávě (13).

Analýza dat

Podle pokynů CLSI jsou izoláty rozděleny na citlivé, středně odolné a rezistentní. Izoláty střední nebo odolné vůči antimikrobiálním činidlům jsou také kategorizovány jako necitlivé vůči činidlům. Míra necitlivosti mezi hlavními bakteriálními patogeny bude analyzována podle různých míst infekce a původu izolátů. Budou analyzovány souvislosti mezi geografickou oblastí, typy nemocnic, ze kterých byly tyto izoláty získány, vůči antimikrobiální citlivosti.