L'impact de l'infection à Helicobacter Pylori sur la régulation immunitaire et l'évolution clinique des patients atteints du VIH au Ghana (HHECO)

Étudier le design:

Étude cas-témoin observationnelle avec suivi longitudinal

Recrutement:

1 000 patients séropositifs fréquentant régulièrement la clinique VIH KATH subiront un dépistage de l'infection à H. pylori et d'autres infections gastro-intestinales parasitaires (comme facteurs de confusion possibles). Les données démographiques, cliniques et immunologiques de ces patients seront documentées par les médecins de l'étude.

Deux groupes avec chacun 100 patients infectés par H. pylori et 100 patients sans infection par H. pylori sont ensuite sélectionnés, appariés en fonction du sexe, de l'âge, de la charge virale initiale du VIH, du nombre de cellules CD4 et d'autres facteurs de confusion.

100 donneurs de sang sains non infectés par le VIH sont également dépistés pour H. pylori et d'autres infections gastro-intestinales et servent de groupe témoin.

Modalités d'étude :

Ligne de base :

Les patients éligibles seront recrutés après que la procédure de l'étude et les risques potentiels associés à la participation à l'étude auront été expliqués et qu'un consentement éclairé écrit aura été obtenu. L'inclusion dans l'étude n'affectera en rien la décision d'initier un HAART ou le choix des médicaments antirétroviraux. Les patients peuvent retirer leur consentement à participer en partie ou en totalité à tout moment au cours de l'étude sans donner de raisons. Le retrait du consentement n'aura en aucun cas une incidence négative sur la gestion ultérieure. Le recrutement commencera après l'obtention de l'approbation éthique des autorités compétentes.

Les données démographiques, cliniques et socio-économiques de base, ainsi que les antécédents médicaux seront documentés par les médecins traitants impliqués dans les services VIH, qui ne connaissent pas les paramètres immunologiques (sauf le nombre de cellules CD4) et les résultats des tests de selles. Les paramètres de laboratoire de routine seront extraits des dossiers des patients, y compris la numération des cellules CD4, la formule sanguine complète ainsi que les tests de la fonction hépatique et rénale.

Échantillon de selles:

Les patients sont invités à fournir un échantillon de selles fraîches à tester pour les œufs de vers, les protozoaires et H. pylori. Après concentration et préparation avec de l'acétate de sodium-acide acétique-formol (SAF), les échantillons sont colorés avec de l'iode et une solution de kinyoun pour la microscopie. Les selles fraîches non traitées sont congelées à -80°C pour le test H. pylori en utilisant un test d'antigène des selles H. pylori disponible dans le commerce (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) selon les spécifications du fabricant.

Échantillon de sang:

Un échantillon de sang veineux (tube CPT 2x 8 ml, Becton Dickinson) est prélevé avec le prélèvement sanguin pour les examens de laboratoire de routine. Le plasma est séparé pour l'analyse des cytokines par Elisa ou cytometric bead arrays (CBA) et le plasma restant est stocké à -80°C. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) sont isolées selon les spécifications du fabricant et préparées pour d'autres tests par cytométrie en flux. Une partie des PBMC sera stockée dans de l'azote liquide pour une analyse ultérieure. Les échantillons de plasma seront principalement utilisés pour évaluer le profil des cytokines (cytokines inflammatoires et TH1/TH2) par ELISA et multi-bead flow arrays. Les PBMC seront analysés par cytométrie en flux pour déterminer la fréquence et le phénotype des Treg, définis comme les cellules CD4+, CD25+, FoxP3+, ainsi que le statut d'activation et le profil des lymphocytes T (par ex. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), ainsi que des marqueurs d'apoptose. Un test de cytokine intracellulaire ex vivo pour IL-2, IL-4, IL-10 et IL-17 sera effectué sur des PBMC non stimulées et stimulées. Les analyses FACS seront réalisées dans le laboratoire d'immunologie KATH, à l'aide du cytomètre en flux FACSCalibur (Becton Dickinson) et du logiciel CellQuest Pro.

Suivi:

Après l'évaluation initiale, les patients sont suivis pendant un an. 12 mois après l'évaluation de base, un échantillon de sang veineux (2x8ml CPT) est prélevé et les paramètres immunologiques sont répétés comme spécifié pour l'évaluation de base. Les patients qui reçoivent un traitement contre des pathogènes intestinaux ou qui sont mis sous traitement antirétroviral, selon l'indication clinique, seront invités à fournir un échantillon sanguin supplémentaire pour évaluation immunologique trois mois après le début du traitement. En cas de traitement pour un pathogène intestinal, un échantillon de selles sera également prélevé au bout de trois mois pour confirmer l'éradication.

Points finaux :

Principaux critères d'évaluation :

1. Fréquence et état d'activation des sous-ensembles de lymphocytes T chez les patients séropositifs avec ou sans infection à H. pylori
2. Modification des cellules CD4 et de la charge virale du VIH chez les patients séropositifs avec ou sans infection à H. pylori au cours du suivi
3. Incidence des événements cliniques chez les patients séropositifs avec ou sans infection à H. pylori au cours du suivi

Critères secondaires :

1. Prévalence de l'infection à H. pylori chez les patients séropositifs à Kumasi, au Ghana, par rapport aux donneurs de sang
2. Prévalence de l'infection par les helminthes et autres parasites gastro-intestinaux chez les patients séropositifs à Kumasi, au Ghana, par rapport aux donneurs de sang
3. Prévalence et facteurs de risque des infections gastro-intestinales chez les patients séropositifs à Kumasi, Ghana
4. Association d'infections gastro-intestinales avec des symptômes gastro-intestinaux
5. Association des infections gastro-intestinales avec l'état nutritionnel, l'émaciation et l'anémie chez les patients séropositifs à Kumasi, Ghana

Régimes de traitement :

La prise en charge de l'infection par le VIH sera effectuée conformément aux directives nationales et institutionnelles et ne sera pas influencée par la participation à l'étude. Les patients infectés par des parasites pathogènes (par ex. Ascaris lumbricoides) se verra proposer un traitement. Les patients infectés par H. pylori et présentant des symptômes pertinents se verront proposer un traitement d'éradication conformément aux directives nationales. Si les frais de traitement ne sont pas couverts par le régime national d'assurance maladie (NHIS), les frais seront couverts par le budget de l'étude.

Interventions:

Aucune intervention n'est réalisée dans le cadre de cette étude.

Calcul de la taille de l'échantillon :

Des calculs sur la taille d'échantillon prévue ont été effectués, mais non cités car ils ne sont pas bien étayés. Puisqu'il n'existe aucune donnée sur les altérations des populations de lymphocytes T au cours de l'infection à H. pylori, une analyse étayée de la taille de l'échantillon n'est pas possible. Nous supposons une différence de fréquence des cellules T régulatrices (Treg), comme point final clé, de l'ordre de 1 à 2 %, comme minimum pour être cliniquement significatif. Pour démontrer une différence significative de 1 % entre les groupes avec une puissance statistique de 0,9 et α=0,05, en utilisant le test t bilatéral non apparié, une taille d'échantillon de 380 patients serait nécessaire. Aucune donnée fiable n'existe sur la prévalence de l'infection à H. pylori chez les patients séropositifs au Ghana. Selon les données d'autres pays africains, nous supposons une prévalence de 60 à 80 %. Pour être sûr d'obtenir suffisamment de patients H. pylori négatifs et de pouvoir sélectionner un groupe apparié de patients H. pylori non infectés, nous suggérons tout de même de dépister 1000 patients infectés par le VIH. Tous les patients recrutés et dépistés pour H. pylori seront analysés pour la progression clinique de la maladie du VIH. De même, il n'existe pas de données permettant d'estimer les conséquences sur l'évolution clinique. Cependant, ces différences sont difficiles à identifier en raison de la grande variabilité de l'évolution clinique de la maladie à VIH et de la multiplicité des facteurs de confusion.

Analyses statistiques:

Les variables continues doivent être comparées par des tests t de Student appariés ou un test de rang signé de Wilcoxon en fonction des distributions statistiques. L'analyse de régression linéaire et le test de transformation de Fisher seront utilisés pour les variables continues. Les proportions seront comparées par des tests du chi carré. Une analyse de régression multiple et une analyse de régression logistique seront effectuées selon les besoins afin de corriger les facteurs de confusion. Une valeur p <0,05 sera considérée comme statistiquement significative.