L'impatto dell'infezione da Helicobacter Pylori sulla regolazione immunitaria e sul decorso clinico nei pazienti affetti da HIV in Ghana (HHECO)

Disegno dello studio:

Studio osservazionale caso controllo con follow up longitudinale

Reclutamento:

1000 pazienti affetti da HIV che frequentano regolarmente la clinica KATH HIV saranno sottoposti a screening per l'infezione da H. pylori e altre infezioni gastrointestinali parassitarie (come possibili confondenti). I dati demografici, clinici e immunologici di tali pazienti saranno documentati dai medici dello studio.

Vengono quindi selezionati due gruppi con ciascuno 100 pazienti con infezione da H. pylori e 100 pazienti senza infezione da H. pylori, abbinati in base a sesso, età, carica virale dell'HIV al basale, conta delle cellule CD4 e altri fattori confondenti.

100 donatori di sangue sani senza infezione da HIV sono ugualmente sottoposti a screening per H. pylori e altre infezioni gastrointestinali e fungono da gruppo di controllo.

Procedure di studio:

Linea di base:

I pazienti idonei saranno reclutati dopo che la procedura dello studio e i potenziali rischi associati alla partecipazione allo studio sono stati spiegati e il consenso informato scritto è stato ottenuto. L'inclusione nello studio non pregiudica in alcun modo la decisione di iniziare la HAART o la scelta dei farmaci antiretrovirali. I pazienti possono revocare il consenso a partecipare in tutto o in parte in qualsiasi momento durante lo studio senza fornire motivazioni. La revoca del consenso non pregiudicherà in alcun modo l'ulteriore gestione. Il reclutamento inizierà dopo aver ottenuto l'approvazione etica dalle autorità competenti.

I dati demografici, clinici e socioeconomici di base, così come la storia medica, saranno documentati dai medici curanti coinvolti nei servizi per l'HIV, che sono all'oscuro dei parametri immunologici (tranne la conta delle cellule CD4) e dei risultati dei test delle feci. I parametri di laboratorio di routine verranno estratti dalle cartelle del paziente, inclusi conta delle cellule CD4, emocromo completo e test di funzionalità epatica e renale.

Campione di feci:

Ai pazienti viene chiesto di fornire un campione di feci fresche da testare per uova di verme, protozoi e H. pylori. Dopo la concentrazione e la preparazione con sodio acetato-acido acetico-formalina (SAF), i campioni vengono colorati con iodio e soluzione di kinyoun per microscopia. Le feci fresche non trattate vengono congelate a -80°C per il test H. pylori utilizzando un test dell'antigene fecale H. pylori disponibile in commercio (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) secondo le specifiche del produttore.

Campione di sangue:

Un campione di sangue venoso (provetta CPT 2x 8 ml, Becton Dickinson) viene prelevato insieme alla raccolta del sangue per le indagini di laboratorio di routine. Il plasma viene separato per l'analisi delle citochine mediante Elisa o array di sferette citometriche (CBA) e il plasma rimanente viene conservato a -80°C. Le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) vengono isolate secondo le specifiche del produttore e preparate per ulteriori test mediante citometria a flusso. Una parte di PBMC verrà conservata in azoto liquido per successive analisi. I campioni di plasma saranno utilizzati principalmente per valutare il profilo delle citochine (citochine infiammatorie e TH1/TH2) mediante ELISA e multi-bead array. Le PBMC saranno analizzate mediante citometria a flusso per determinare la frequenza e il fenotipo delle Treg, definite come cellule CD4+, CD25+, FoxP3+, e lo stato di attivazione e il profilo delle cellule T (es. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), nonché marcatori di apoptosi. Il dosaggio delle citochine intracellulari ex vivo per IL-2, IL-4, IL-10 e IL-17 sarà effettuato su PBMC non stimolate e stimolate. Le analisi FACS saranno condotte nel laboratorio di immunologia KATH, utilizzando il citometro a flusso FACSCalibur (Becton Dickinson) e il software CellQuest Pro.

Seguito:

Dopo la valutazione di base, i pazienti vengono seguiti per un anno. 12 mesi dopo la valutazione di base, viene prelevato un campione di sangue venoso (2x8 ml CPT) e i parametri immunologici vengono ripetuti come specificato per la valutazione di base. Ai pazienti che ricevono il trattamento dei patogeni intestinali o che iniziano la terapia antiretrovirale, secondo l'indicazione clinica, verrà chiesto di fornire un ulteriore campione di sangue per la valutazione immunologica tre mesi dopo l'inizio del trattamento. In caso di trattamento per un patogeno intestinale, dopo tre mesi verrà prelevato anche un campione di feci per confermare l'eradicazione.

Punti finali:

Punti finali primari:

1. Frequenza e stato di attivazione dei sottogruppi di cellule T nei pazienti HIV positivi con infezione da H. pylori rispetto a quelli senza
2. Modifica delle cellule CD4 e della carica virale dell'HIV in pazienti HIV positivi con o senza infezione da H. pylori durante il follow-up
3. Incidenza di eventi clinici in pazienti HIV positivi con o senza infezione da H. pylori durante il follow-up

Punti finali secondari:

1. Prevalenza dell'infezione da H. pylori nei pazienti affetti da HIV a Kumasi, in Ghana, rispetto ai donatori di sangue
2. Prevalenza dell'infezione da elminti e altri parassiti gastrointestinali nei pazienti affetti da HIV a Kumasi, Ghana, rispetto ai donatori di sangue
3. Prevalenza e fattori di rischio per le infezioni gastrointestinali nei pazienti affetti da HIV a Kumasi, Ghana
4. Associazione di infezioni gastrointestinali con sintomi gastrointestinali
5. Associazione di infezioni gastrointestinali con stato nutrizionale, deperimento e anemia nei pazienti affetti da HIV a Kumasi, Ghana

Regimi di trattamento:

La gestione dell'infezione da HIV sarà effettuata secondo le linee guida nazionali e istituzionali e non sarà influenzata dalla partecipazione allo studio. Pazienti risultati infetti da parassiti patogeni (ad es. Ascaris lumbricoides) verrà offerto un trattamento. Ai pazienti con infezione da H. pylori e sintomi pertinenti verrà offerta la terapia di eradicazione secondo le linee guida nazionali. Se i costi di trattamento non sono coperti dal National Health Insurance Scheme (NHIS), i costi saranno coperti dal budget dello studio.

Interventi:

Nell'ambito di questo studio non vengono effettuati interventi.

Calcolo della dimensione del campione:

I calcoli sulla dimensione del campione pianificata sono stati eseguiti ma non citati poiché non ben comprovati. Poiché non esistono dati sulle alterazioni delle popolazioni di cellule T durante l'infezione da H. pylori, non è possibile un'analisi comprovata della dimensione del campione. Assumiamo una differenza della frequenza delle cellule T regolatorie (Treg), come punto finale chiave, nell'intervallo dell'1-2%, come minimo per essere clinicamente significativo. Per dimostrare una differenza significativa dell'1% tra i gruppi con una potenza statistica di 0,9 e α=0,05, utilizzando il test t a 2 code per dati non appaiati, sarebbe necessaria una dimensione del campione di 380 pazienti. Non esistono dati affidabili sulla prevalenza dell'infezione da H. pylori tra i pazienti affetti da HIV in Ghana. Secondo i dati di altri paesi africani, assumiamo una prevalenza del 60-80%. Per essere sicuri di ottenere un numero sufficiente di pazienti negativi per H. pylori e per poter selezionare un gruppo abbinato di pazienti non infetti da H. pylori, suggeriamo comunque di sottoporre a screening 1000 pazienti con infezione da HIV. Tutti i pazienti reclutati e sottoposti a screening per H. pylori saranno analizzati per la progressione clinica della malattia da HIV. Allo stesso modo, non esistono dati per stimare le conseguenze per il decorso clinico. Tuttavia, tali differenze sono difficili da identificare a causa dell'elevata variabilità del decorso clinico della malattia da HIV e della molteplicità dei fattori confondenti.

Analisi statistica:

Le variabili continue devono essere confrontate mediante test t di Student appaiati o test dei ranghi con segno di Wilcoxon a seconda delle distribuzioni statistiche. L'analisi di regressione lineare e il test di trasformazione di Fisher saranno utilizzati per variabili continue. Le proporzioni saranno confrontate mediante test chi-quadro. L'analisi di regressione multipla e l'analisi di regressione logistica saranno eseguite in modo appropriato per correggere i fattori confondenti. Un p-value <0,05 sarà considerato statisticamente significativo.