Virkningen av Helicobacter Pylori-infeksjon på immunregulering og klinisk forløp hos HIV-pasienter i Ghana (HHECO)

Studere design:

Observasjonscasekontrollstudie med longitudinell oppfølging

Rekruttering:

1000 HIV-pasienter som regelmessig går til KATH HIV-klinikken vil bli screenet for H. pylori-infeksjon og andre parasittiske gastrointestinale infeksjoner (som mulige konfoundere). Demografiske, kliniske og immunologiske data om disse pasientene vil bli dokumentert av studieleger.

To grupper med hver 100 pasienter med H. pylori-infeksjon og 100 pasienter uten H. pylori-infeksjon velges deretter, matchet i henhold til kjønn, alder, baseline HIV-virusmengde, CD4-celletall og andre konfoundere.

100 friske blodgivere uten HIV-infeksjon er like screenet for H. pylori og andre gastrointestinale infeksjoner og fungerer som kontrollgruppe.

Studieprosedyrer:

Grunnlinje:

Kvalifiserte pasienter vil bli rekruttert etter at studieprosedyren og potensielle risikoer forbundet med å delta i studien er forklart og skriftlig informert samtykke er innhentet. Inkluderingen i studien skal på ingen måte påvirke beslutningen om å starte HAART eller valg av antiretrovirale legemidler. Pasienter kan trekke tilbake samtykke til å delta helt eller delvis når som helst i løpet av studien uten å oppgi grunn. Tilbaketrekking av samtykke vil på ingen måte påvirke den videre ledelsen negativt. Rekrutteringen vil starte etter at etisk godkjenning er innhentet fra relevante myndigheter.

Baseline demografiske, kliniske og sosioøkonomiske data, så vel som sykehistorien vil bli dokumentert av de behandlende legene som er involvert i HIV-tjenester, som er blindet for immunologiske parametere (unntatt CD4-celletall) og avføringstestresultater. Rutinemessige laboratorieparametre vil bli ekstrahert fra pasientens mapper, inkludert CD4-celletall, full blodtelling samt lever- og nyrefunksjonstester.

Avføringsprøve:

Pasientene blir bedt om å gi en fersk avføringsprøve som skal testes for ormegg, protozoer og H. pylori. Etter konsentrering og klargjøring med natriumacetat-eddiksyre-formalin (SAF), farges prøvene med jod og kinyoun-løsning for mikroskopi. Ubehandlet fersk avføring fryses ved -80°C for H. pylori-testing ved bruk av en kommersielt tilgjengelig H. pylori avføringsantigentest (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) i henhold til spesifikasjonene til produsenten.

Blodprøve:

En venøs blodprøve (2x 8ml CPT-rør, Becton Dickinson) tas sammen med blodprøven for de rutinemessige laboratorieundersøkelsene. Plasma separeres for analyse av cytokiner ved hjelp av Elisa eller cytometriske perlearrayer (CBA), og det gjenværende plasmaet lagres ved -80°C. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) isoleres i henhold til produsentens spesifikasjoner og klargjøres for videre testing ved hjelp av flowcytometri. En andel PBMC vil bli lagret i flytende nitrogen for senere analyse. Plasmaprøver vil hovedsakelig bli brukt til å vurdere cytokinprofilen (inflammatoriske og TH1/TH2 cytokiner) ved hjelp av ELISA og multi-bead flow arrays. PBMC vil bli analysert ved hjelp av flowcytometri for å bestemme frekvensen og fenotypen til Treg, definert som CD4+, CD25+, FoxP3+ celler, og aktiveringsstatus og T-celleprofil (f.eks. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), samt apoptosemarkører. Ex vivo intracellulær cytokinanalyse for IL-2, IL-4, IL-10 og IL-17 vil bli utført på ustimulert og stimulert PBMC. FACS-analyser vil bli utført i KATH-immunologilaboratoriet, ved bruk av FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson) og CellQuest Pro-programvaren.

Følge opp:

Etter baseline-evaluering følges pasientene opp i ett år. 12 måneder etter baseline-evalueringen tas en venøs blodprøve (2x8ml CPT) og de immunologiske parametrene gjentas som spesifisert for baseline-evalueringen. Pasienter som mottar behandling av tarmpatogener, eller som starter på antiretroviral behandling, i henhold til klinisk indikasjon, vil bli bedt om å gi en ekstra blodprøve for immunologisk vurdering tre måneder etter behandlingsstart. Ved behandling for et tarmpatogen vil det også tas en avføringsprøve etter tre måneder for å bekrefte utryddelse.

Sluttpunkter:

Primære endepunkter:

1. Frekvens og aktiveringsstatus for T-celle undergrupper hos HIV-positive pasienter med versus uten H. pylori-infeksjon
2. Endring av CD4-celler og HIV-virusbelastning hos HIV-positive pasienter med versus uten H. pylori-infeksjon under oppfølging
3. Forekomst av kliniske hendelser hos HIV-positive pasienter med versus uten H. pylori-infeksjon under oppfølging

Sekundære endepunkter:

1. Prevalens av H. pylori-infeksjon hos HIV-pasienter i Kumasi, Ghana, sammenlignet med blodgivere
2. Forekomst av infeksjon med helminth og andre gastrointestinale parasitter hos HIV-pasienter i Kumasi, Ghana, sammenlignet med blodgivere
3. Prevalens og risikofaktorer for gastrointestinale infeksjoner hos HIV-pasienter i Kumasi, Ghana
4. Forening av gastrointestinale infeksjoner med gastrointestinale symptomer
5. Forening av gastrointestinale infeksjoner med ernæringsstatus, sløsing og anemi hos HIV-pasienter i Kumasi, Ghana

Behandlingsregimer:

Håndteringen av HIV-infeksjonen vil bli utført i henhold til nasjonale og institusjonelle retningslinjer og vil ikke være påvirket av studiedeltakelsen. Pasienter funnet å være infisert med patogenparasitter (f. Ascaris lumbricoides) vil bli tilbudt behandling. Pasienter med H. pylori-infeksjon og relevante symptomer vil bli tilbudt eradikasjonsbehandling i henhold til nasjonale retningslinjer. Dersom behandlingsutgifter ikke dekkes av Statens helsetrygd (NHIS), dekkes kostnader over studiebudsjettet.

Intervensjoner:

Det er ikke utført intervensjoner i denne studien.

Eksempelstørrelsesberegning:

Beregninger på den planlagte prøvestørrelsen ble gjort, men ikke sitert siden den ikke var godt underbygget. Siden det ikke eksisterer data om endringene av T-cellepopulasjoner under H. pylori-infeksjon, er en underbygget prøvestørrelsesanalyse ikke mulig. Vi antar en forskjell i frekvensen av regulatoriske T-celler (Treg), som ett nøkkelendepunkt, i området 1-2 %, som minimum for å være klinisk signifikant. For å demonstrere en signifikant forskjell på 1 % mellom gruppene med en statistisk styrke på 0,9 og α=0,05, ved bruk av den uparrede, 2-sidige t-testen, ville en prøvestørrelse på 380 pasienter være nødvendig. Det finnes ingen pålitelige data om prevalensen av H. pylori-infeksjon blant HIV-pasienter i Ghana. I følge data fra andre afrikanske land antar vi en prevalens på 60-80 %. For å være sikker på å få tilstrekkelig med H. pylori-negative pasienter og for å kunne velge en matchet gruppe av H. pylori uinfiserte pasienter, foreslår vi fortsatt screening av 1000 HIV-infiserte pasienter. Alle pasienter som rekrutteres og screenes for H. pylori vil bli analysert for klinisk progresjon av HIV-sykdom. Likeledes finnes det ingen data for å estimere konsekvensene for det kliniske forløpet. Imidlertid er slike forskjeller vanskelige å identifisere på grunn av den høye variasjonen i det kliniske forløpet av HIV-sykdom, og mangfoldet av konfoundere.

Statistisk analyse:

Kontinuerlige variabler skal sammenlignes med sammenkoblede Students t-tester eller Wilcoxon signerte rangeringstest avhengig av statistiske fordelinger. Lineær regresjonsanalyse og Fishers transformasjonstest vil bli brukt for kontinuerlige variabler. Proporsjoner vil bli sammenlignet med kjikvadrat-tester. Multippel regresjonsanalyse og logistisk regresjonsanalyse vil bli utført etter behov for å korrigere for konfoundere. En p-verdi <0,05 vil bli vurdert som statistisk signifikant.