El impacto de la infección por Helicobacter Pylori en la regulación inmunológica y el curso clínico en pacientes con VIH en Ghana (HHECO)

Diseño del estudio:

Estudio observacional de casos y controles con seguimiento longitudinal

Reclutamiento:

1000 pacientes con VIH que asisten regularmente a la clínica de VIH KATH serán examinados para detectar infección por H. pylori y otras infecciones gastrointestinales parasitarias (como posibles factores de confusión). Los datos demográficos, clínicos e inmunológicos de esos pacientes serán documentados por los médicos del estudio.

A continuación, se seleccionan dos grupos con 100 pacientes con infección por H. pylori y 100 pacientes sin infección por H. pylori, emparejados según el sexo, la edad, la carga viral inicial del VIH, el recuento de células CD4 y otros factores de confusión.

100 donantes de sangre sanos sin infección por VIH se examinan por igual para H. pylori y otras infecciones gastrointestinales y sirven como grupo de control.

Procedimientos de estudio:

Base:

Los pacientes elegibles serán reclutados después de que se haya explicado el procedimiento del estudio y los riesgos potenciales asociados con la participación en el estudio y se haya obtenido el consentimiento informado por escrito. La inclusión en el estudio no afectará en modo alguno la decisión de iniciar TARGA o la elección de fármacos antirretrovirales. Los pacientes pueden retirar su consentimiento para participar en parte o en su totalidad en cualquier momento durante el estudio sin dar razones. La retirada del consentimiento no afectará negativamente en modo alguno a la gestión posterior. El reclutamiento comenzará después de que se haya obtenido la aprobación ética de las autoridades correspondientes.

Los datos demográficos, clínicos y socioeconómicos iniciales, así como el historial médico, serán documentados por los médicos tratantes involucrados en los servicios de VIH, que no conocen los parámetros inmunológicos (excepto el recuento de células CD4) y ​​los resultados de las pruebas de heces. Los parámetros de laboratorio de rutina se extraerán de las carpetas del paciente, incluido el recuento de células CD4, el hemograma completo y las pruebas de función hepática y renal.

Muestra de heces:

Se les pide a los pacientes que proporcionen una muestra de heces frescas para analizar si hay huevos de gusanos, protozoos y H. pylori. Después de la concentración y preparación con acetato de sodio-ácido acético-formalina (SAF), las muestras se tiñen con solución de yodo y kinyoun para microscopía. Las heces frescas no tratadas se congelan a -80 °C para la prueba de H. pylori utilizando una prueba de antígenos en heces de H. pylori disponible comercialmente (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) de acuerdo con las especificaciones del fabricante.

Muestra de sangre:

Se toma una muestra de sangre venosa (2 tubos CPT de 8 ml, Becton Dickinson) junto con la extracción de sangre para las investigaciones de laboratorio de rutina. El plasma se separa para el análisis de citocinas mediante Elisa o matrices de perlas citométricas (CBA) y el plasma restante se almacena a -80 °C. Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aíslan de acuerdo con las especificaciones del fabricante y se preparan para realizar más pruebas mediante citometría de flujo. Una parte de las PBMC se almacenará en nitrógeno líquido para su posterior análisis. Las muestras de plasma se utilizarán principalmente para evaluar el perfil de citoquinas (citoquinas inflamatorias y TH1/TH2) mediante ELISA y arreglos de flujo de múltiples perlas. Las PBMC se analizarán mediante citometría de flujo para determinar la frecuencia y el fenotipo de Treg, definidas como células CD4+, CD25+, FoxP3+, y el estado de activación y el perfil de células T (p. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), así como marcadores de apoptosis. El ensayo de citoquinas intracelulares ex vivo para IL-2, IL-4, IL-10 e IL-17 se realizará en PBMC no estimuladas y estimuladas. Los análisis FACS se realizarán en el laboratorio de inmunología KATH, utilizando el citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) y el software CellQuest Pro.

Hacer un seguimiento:

Después de la evaluación inicial, se realiza un seguimiento de los pacientes durante un año. 12 meses después de la evaluación inicial, se toma una muestra de sangre venosa (2x8ml CPT) y se repiten los parámetros inmunológicos como se especifica para la evaluación inicial. A los pacientes que reciben tratamiento de patógenos intestinales, o que inician terapia antirretroviral, según indicación clínica, se les solicitará una muestra de sangre adicional para evaluación inmunológica tres meses después de iniciado el tratamiento. En caso de tratamiento por un patógeno intestinal, también se recogerá una muestra de heces a los tres meses para confirmar la erradicación.

Puntos finales:

Puntos finales primarios:

1. Frecuencia y estado de activación de los subconjuntos de células T en pacientes VIH positivos con versus sin infección por H. pylori
2. Cambio de células CD4 y carga viral del VIH en pacientes VIH positivos con versus sin infección por H. pylori durante el seguimiento
3. Incidencia de eventos clínicos en pacientes VIH positivos con versus sin infección por H. pylori durante el seguimiento

Puntos finales secundarios:

1. Prevalencia de infección por H. pylori en pacientes con VIH en Kumasi, Ghana, en comparación con donantes de sangre
2. Prevalencia de infección por helmintos y otros parásitos gastrointestinales en pacientes con VIH en Kumasi, Ghana, en comparación con donantes de sangre
3. Prevalencia y factores de riesgo de infecciones gastrointestinales en pacientes con VIH en Kumasi, Ghana
4. Asociación de infecciones gastrointestinales con síntomas gastrointestinales
5. Asociación de infecciones gastrointestinales con estado nutricional, emaciación y anemia en pacientes con VIH en Kumasi, Ghana

Regímenes de tratamiento:

El manejo de la infección por VIH se llevará a cabo de acuerdo con las pautas nacionales e institucionales y no se verá influenciado por la participación en el estudio. Pacientes infectados con parásitos patógenos (p. ej. Ascaris lumbricoides) se les ofrecerá tratamiento. A los pacientes con infección por H. pylori y síntomas pertinentes se les ofrecerá terapia de erradicación de acuerdo con las pautas nacionales. Si los costos del tratamiento no están cubiertos por el Plan Nacional de Seguro de Salud (NHIS), los costos serán cubiertos por el presupuesto del estudio.

Intervenciones:

No se realizan intervenciones dentro de este estudio.

Cálculo del tamaño de la muestra:

Se realizaron cálculos sobre el tamaño de muestra planificado, pero no se citaron porque no estaban bien fundamentados. Dado que no existen datos sobre las alteraciones de las poblaciones de células T durante la infección por H. pylori, no es posible realizar un análisis comprobado del tamaño de la muestra. Asumimos una diferencia de la frecuencia de las células T reguladoras (Treg), como punto final clave, en el rango de 1-2%, como el mínimo para ser clínicamente significativo. Para demostrar una diferencia significativa del 1 % entre los grupos con un poder estadístico de 0,9 y α=0,05, utilizando la prueba t bilateral no pareada, se necesitaría un tamaño de muestra de 380 pacientes. No existen datos fiables sobre la prevalencia de la infección por H. pylori entre los pacientes con VIH en Ghana. Según datos de otros países africanos, suponemos una prevalencia del 60-80%. Para asegurarse de obtener suficientes pacientes negativos para H. pylori y para poder seleccionar un grupo compatible de pacientes no infectados con H. pylori, aún sugerimos evaluar a 1000 pacientes infectados por el VIH. Todos los pacientes reclutados y examinados para H. pylori serán analizados para la progresión clínica de la enfermedad por VIH. Asimismo, no existen datos para estimar las consecuencias en el curso clínico. Sin embargo, tales diferencias son difíciles de identificar debido a la gran variabilidad del curso clínico de la enfermedad por VIH y la multiplicidad de factores de confusión.

Análisis estadístico:

Las variables continuas se compararán mediante pruebas t de Student pareadas o la prueba de rangos con signo de Wilcoxon según las distribuciones estadísticas. Para las variables continuas se utilizará el análisis de regresión lineal y la prueba de transformación de Fisher. Las proporciones se compararán mediante pruebas de chi-cuadrado. Se realizarán análisis de regresión múltiple y análisis de regresión logística según corresponda para corregir los factores de confusión. Un valor de p <0,05 se considerará estadísticamente significativo.