Wpływ zakażenia Helicobacter pylori na regulację odporności i przebieg kliniczny u pacjentów z HIV w Ghanie (HHECO)

Projekt badania:

Obserwacyjne badanie kliniczno-kontrolne z obserwacją podłużną

Rekrutacja:

1000 pacjentów z HIV regularnie uczęszczających do kliniki KATH HIV zostanie przebadanych pod kątem zakażenia H. pylori i innych pasożytniczych infekcji żołądkowo-jelitowych (jako możliwych czynników zakłócających). Dane demograficzne, kliniczne i immunologiczne tych pacjentów zostaną udokumentowane przez lekarzy prowadzących badanie.

Następnie wybiera się dwie grupy, po 100 pacjentów z zakażeniem H. pylori i 100 pacjentów bez zakażenia H. pylori, dopasowując je pod względem płci, wieku, wyjściowego miana wirusa HIV, liczby komórek CD4 i innych czynników zakłócających.

100 zdrowych dawców krwi bez zakażenia wirusem HIV jest jednakowo przebadanych pod kątem H. pylori i innych infekcji żołądkowo-jelitowych i służy jako grupa kontrolna.

Procedury badania:

Linia bazowa:

Kwalifikujący się pacjenci zostaną zrekrutowani po procedurze badania i wyjaśnieniu potencjalnego ryzyka związanego z udziałem w badaniu oraz uzyskaniu pisemnej świadomej zgody. Włączenie do badania nie wpływa w żaden sposób na decyzję o rozpoczęciu HAART ani na wybór leków antyretrowirusowych. Pacjenci mogą wycofać zgodę na udział w części lub w całości w dowolnym momencie trwania badania bez podania przyczyny. Cofnięcie zgody nie wpłynie w żaden sposób negatywnie na dalsze zarządzanie. Rekrutacja rozpocznie się po uzyskaniu aprobaty etycznej od odpowiednich władz.

Wyjściowe dane demograficzne, kliniczne i socjoekonomiczne, a także historia medyczna będą dokumentowane przez lekarzy prowadzących zaangażowanych w usługi związane z HIV, którzy nie znają parametrów immunologicznych (z wyjątkiem liczby komórek CD4) i wyników badań kału. Rutynowe parametry laboratoryjne zostaną wyodrębnione z teczek pacjentów, w tym liczba komórek CD4, pełna morfologia krwi oraz testy czynnościowe wątroby i nerek.

Próbka kału:

Pacjenci proszeni są o dostarczenie świeżej próbki kału do badania na obecność jaj robaków, pierwotniaków i H. pylori. Po zatężeniu i przygotowaniu za pomocą octanu sodu, kwasu octowego i formaliny (SAF), próbki barwi się roztworem jodu i kinyouna do mikroskopii. Nietraktowany świeży stolec zamraża się w temperaturze -80°C w celu przeprowadzenia testu na obecność H. pylori przy użyciu dostępnego w handlu testu na obecność antygenu H. pylori w kale (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) zgodnie ze specyfikacjami producenta.

Próbka krwi:

Próbkę krwi żylnej (2x 8ml probówka CPT, Becton Dickinson) pobiera się razem z pobraniem krwi do rutynowych badań laboratoryjnych. Osocze oddziela się do analizy cytokin za pomocą Elisa lub cytometrycznych zestawów kulek (CBA), a pozostałe osocze przechowuje się w temperaturze -80°C. Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) są izolowane zgodnie ze specyfikacjami producenta i przygotowywane do dalszych badań za pomocą cytometrii przepływowej. Część PBMC będzie przechowywana w ciekłym azocie do późniejszej analizy. Próbki osocza będą wykorzystywane głównie do oceny profilu cytokin (cytokiny zapalne i TH1/TH2) za pomocą testu ELISA i multi-bead flow arrays. PBMC będą analizowane za pomocą cytometrii przepływowej w celu określenia częstości i fenotypu Treg, zdefiniowanego jako komórki CD4+, CD25+, FoxP3+ oraz statusu aktywacji i profilu limfocytów T (np. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), jak również markery apoptozy. Test cytokin wewnątrzkomórkowych ex vivo dla IL-2, IL-4, IL-10 i IL-17 zostanie przeprowadzony na niestymulowanych i stymulowanych PBMC. Analizy FACS będą prowadzone w laboratorium immunologicznym KATH przy użyciu cytometru przepływowego FACSCalibur (Becton Dickinson) i oprogramowania CellQuest Pro.

Podejmować właściwe kroki:

Po ocenie wyjściowej pacjenci są obserwowani przez rok. 12 miesięcy po ocenie wyjściowej pobiera się próbkę krwi żylnej (2x8 ml CPT) i powtarza się parametry immunologiczne, jak określono dla oceny wyjściowej. Pacjenci leczeni z powodu patogenów jelitowych lub rozpoczynający terapię przeciwretrowirusową, zgodnie ze wskazaniami klinicznymi, zostaną poproszeni o pobranie dodatkowej próbki krwi do oceny immunologicznej po trzech miesiącach od rozpoczęcia leczenia. W przypadku leczenia patogenu jelitowego po trzech miesiącach zostanie również pobrana próbka kału w celu potwierdzenia eradykacji.

Punkty końcowe:

Główne punkty końcowe:

1. Częstotliwość i stan aktywacji podzbiorów komórek T u pacjentów zakażonych wirusem HIV z zakażeniem H. pylori w porównaniu z pacjentami bez zakażenia
2. Zmiana liczby komórek CD4 i miana wirusa HIV u pacjentów zakażonych wirusem HIV z zakażeniem H. pylori w porównaniu z pacjentami bez zakażenia H. pylori podczas obserwacji
3. Częstość występowania zdarzeń klinicznych u pacjentów zakażonych wirusem HIV z zakażeniem H. pylori w porównaniu z pacjentami bez zakażenia H. pylori w okresie obserwacji

Drugorzędowe punkty końcowe:

1. Częstość występowania zakażenia H. pylori u pacjentów z HIV w Kumasi w Ghanie w porównaniu z krwiodawcami
2. Rozpowszechnienie zakażenia robakami pasożytniczymi i innymi pasożytami przewodu pokarmowego u pacjentów zakażonych wirusem HIV w Kumasi w Ghanie w porównaniu z krwiodawcami
3. Częstość występowania i czynniki ryzyka infekcji żołądkowo-jelitowych u pacjentów z HIV w Kumasi w Ghanie
4. Związek infekcji żołądkowo-jelitowych z objawami żołądkowo-jelitowymi
5. Związek infekcji żołądkowo-jelitowych ze stanem odżywienia, wyniszczeniem i niedokrwistością u pacjentów z HIV w Kumasi w Ghanie

Schematy leczenia:

Postępowanie w przypadku zakażenia wirusem HIV będzie prowadzone zgodnie z krajowymi i instytucjonalnymi wytycznymi i udział w badaniu nie będzie miał na nie wpływu. Pacjenci, u których stwierdzono zakażenie patogenami pasożytniczymi (np. Ascaris lumbricoides) zostanie zaoferowane leczenie. Pacjentom z zakażeniem H. pylori i występującymi objawami zostanie zaproponowana terapia eradykacyjna zgodnie z krajowymi wytycznymi. Jeśli koszty leczenia nie są pokrywane przez Narodowy System Ubezpieczeń Zdrowotnych (NHIS), koszty zostaną pokryte z budżetu badania.

Interwencje:

W ramach tego badania nie przeprowadza się żadnych interwencji.

Obliczenie wielkości próbki:

Obliczenia dotyczące planowanej wielkości próby zostały wykonane, ale nie zostały zacytowane, ponieważ nie były dobrze uzasadnione. Ponieważ nie ma danych na temat zmian populacji komórek T podczas zakażenia H. pylori, uzasadniona analiza wielkości próby nie jest możliwa. Przyjmujemy różnicę częstości limfocytów T regulatorowych (Treg), jako jeden kluczowy punkt końcowy, w zakresie 1-2%, jako minimum istotne klinicznie. Aby wykazać istotną różnicę wynoszącą 1% między grupami z mocą statystyczną 0,9 i α=0,05, przy użyciu niesparowanego, dwustronnego testu t, potrzebna byłaby próba o wielkości 380 pacjentów. Brak jest wiarygodnych danych na temat rozpowszechnienia zakażenia H. pylori wśród pacjentów z HIV w Ghanie. Według danych z innych krajów afrykańskich zakładamy chorobowość na poziomie 60-80%. Aby mieć pewność, że uzyskamy wystarczającą liczbę pacjentów z ujemnym wynikiem H. pylori i aby móc wybrać dopasowaną grupę pacjentów niezakażonych H. pylori, nadal sugerujemy badanie przesiewowe 1000 pacjentów zakażonych wirusem HIV. Wszyscy pacjenci rekrutowani i badani przesiewowo w kierunku H. pylori będą analizowani pod kątem klinicznego postępu choroby HIV. Podobnie nie ma danych pozwalających oszacować konsekwencje dla przebiegu klinicznego. Różnice te są jednak trudne do zidentyfikowania ze względu na dużą zmienność przebiegu klinicznego zakażenia wirusem HIV oraz mnogość czynników zakłócających.

Analiza statystyczna:

Zmienne ciągłe porównuje się za pomocą sparowanych testów t-Studenta lub testu rang ze znakiem Wilcoxona w zależności od rozkładów statystycznych. Analiza regresji liniowej i test transformacji Fishera zostaną użyte dla zmiennych ciągłych. Proporcje zostaną porównane za pomocą testów chi-kwadrat. W razie potrzeby zostanie przeprowadzona analiza regresji wielokrotnej i analiza regresji logistycznej w celu skorygowania czynników zakłócających. Wartość p <0,05 zostanie uznana za istotną statystycznie.