Helicobacter pylori -infektion vaikutus immuunisääntelyyn ja kliiniseen kurssiin HIV-potilailla Ghanassa (HHECO)

Opintojen suunnittelu:

Havainnollinen tapauskontrollitutkimus pitkittäisseurannalla

Rekrytointi:

1000 HIV-potilasta, jotka säännöllisesti käyvät KATH:n HIV-klinikalla, seulotaan H. pylori -infektion ja muiden loisten aiheuttamien maha-suolikanavan infektioiden varalta (mahdollisina hämmennystekijöinä). Tutkimuslääkärit dokumentoivat näiden potilaiden demografiset, kliiniset ja immunologiset tiedot.

Sitten valitaan kaksi ryhmää, joissa kussakin 100 potilasta, joilla on H. pylori -infektio, ja 100 potilasta, joilla ei ole H. pylori -infektiota, ja ne sovitetaan yhteen sukupuolen, iän, lähtötason HIV-viruskuorman, CD4-solumäärän ja muiden sekaannusten mukaan.

100 tervettä verenluovuttajaa, joilla ei ole HIV-infektiota, seulotaan yhtäläisesti H. pylorin ja muiden maha-suolikanavan infektioiden varalta ja toimivat kontrolliryhmänä.

Opiskelumenettelyt:

Perustaso:

Tukikelpoiset potilaat rekrytoidaan sen jälkeen, kun tutkimusmenettely ja mahdolliset tutkimukseen osallistumiseen liittyvät riskit on selvitetty ja kirjallinen tietoinen suostumus saatu. Tutkimukseen osallistuminen ei millään tavalla vaikuta päätökseen HAART-hoidon aloittamisesta tai antiretroviraalisten lääkkeiden valintaan. Potilaat voivat peruuttaa suostumuksensa osallistua osittain tai kokonaan milloin tahansa tutkimukseen ilman syytä. Suostumuksen peruuttaminen ei vaikuta millään tavalla kielteisesti jatkohallintaan. Rekrytointi alkaa, kun eettinen hyväksyntä on saatu asianmukaisilta viranomaisilta.

Perustason demografiset, kliiniset ja sosioekonomiset tiedot sekä sairaushistoria dokumentoidaan HIV-palveluihin osallistuvien hoitavien lääkärien toimesta, jotka ovat sokeutuneet immunologisiin parametreihin (paitsi CD4-solujen määrään) ja ulostetestien tuloksiin. Potilaiden kansioista poimitaan rutiininomaiset laboratorioparametrit, mukaan lukien CD4-solujen määrä, täydellinen verenkuva sekä maksan ja munuaisten toimintakokeet.

Ulostenäyte:

Potilaita pyydetään toimittamaan tuore ulostenäyte madonmunien, alkueläinten ja H. pylorin varalta. Väkevöinnin ja natriumasetaatti-etikkahappo-formaliinilla (SAF) valmistuksen jälkeen näytteet värjätään jodilla ja kinyoun-liuoksella mikroskopiaa varten. Käsittelemätön tuore uloste jäädytetään -80 °C:ssa H. pylori -testausta varten käyttämällä kaupallisesti saatavaa H. pylori -ulosteen antigeenitestiä (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Verinäyte:

Laskimoverinäyte (2 x 8 ml CPT-putki, Becton Dickinson) otetaan yhdessä verenkeräyksen kanssa rutiinilaboratoriotutkimuksia varten. Plasma erotetaan sytokiinien analysointia varten Elisalla tai sytometrisilla helmimatriisilla (CBA) ja jäljelle jäänyt plasma säilytetään -80 °C:ssa. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC) eristetään valmistajan ohjeiden mukaisesti ja valmistetaan lisätestausta varten virtaussytometrisesti. Osa PBMC:stä varastoidaan nestetypessä myöhempää analyysiä varten. Plasmanäytteitä käytetään pääasiassa sytokiiniprofiilin (tulehdus- ja TH1/TH2-sytokiinit) arvioimiseen ELISA:lla ja monihelmivirtausjärjestelmillä. PBMC analysoidaan virtaussytometrialla Tregin esiintymistiheyden ja fenotyypin määrittämiseksi, jotka määritellään CD4+-, CD25+-, FoxP3+-soluiksi, sekä aktivaatiotila ja T-soluprofiili (esim. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), sekä apoptoosimarkkereita. Ex vivo intrasellulaarinen sytokiinimääritys IL-2:lle, IL-4:lle, IL-10:lle ja IL-17:lle suoritetaan stimuloimattomalle ja stimuloidulle PBMC:lle. FACS-analyysit suoritetaan KATH-immunologialaboratoriossa käyttämällä FACSCalibur-virtaussytometriä (Becton Dickinson) ja CellQuest Pro -ohjelmistoa.

Seuranta:

Lähtötilanteen arvioinnin jälkeen potilaita seurataan vuoden ajan. 12 kuukauden kuluttua lähtötilanteen arvioinnista otetaan laskimoverinäyte (2 x 8 ml CPT) ja immunologiset parametrit toistetaan perustason arvioinnin mukaisesti. Potilaita, jotka saavat hoitoa suoliston taudinaiheuttajista tai jotka aloitetaan antiretroviraaliseen hoitoon kliinisen indikaation mukaan, pyydetään toimittamaan ylimääräinen verinäyte immunologista arviointia varten kolmen kuukauden kuluttua hoidon aloittamisesta. Suolistopatogeenin hoidossa otetaan kolmen kuukauden kuluttua myös ulostenäyte hävittämisen varmistamiseksi.

Loppupisteet:

Ensisijaiset päätepisteet:

1. T-solujen alaryhmien esiintymistiheys ja aktivaatiotila HIV-positiivisilla potilailla, joilla on H. pylori -infektio, verrattuna ilman sitä
2. CD4-solujen ja HIV-viruskuorman muutos seurannan aikana HIV-positiivisilla potilailla, joilla on H. pylori-infektio
3. Kliinisten tapahtumien ilmaantuvuus HIV-positiivisilla potilailla, joilla on H. pylori -infektio ja joilla ei ole ollut H. pylori -infektiota seurannan aikana

Toissijaiset päätepisteet:

1. H. pylori -infektion esiintyvyys HIV-potilailla Kumasissa, Ghanassa verrattuna verenluovuttajiin
2. Helmintin ja muiden maha-suolikanavan loisten aiheuttaman infektion esiintyvyys HIV-potilailla Kumasissa, Ghanassa verrattuna verenluovuttajiin
3. Ruoansulatuskanavan infektioiden esiintyvyys ja riskitekijät HIV-potilailla Kumasissa, Ghanassa
4. Ruoansulatuskanavan infektioiden yhdistäminen maha-suolikanavan oireisiin
5. Ruoansulatuskanavan infektioiden yhdistäminen ravitsemustilaan, kuihtumiseen ja anemiaan HIV-potilailla Kumasissa, Ghanassa

Hoito-ohjelmat:

HIV-tartunnan hallinta toteutetaan kansallisten ja instituutioiden ohjeiden mukaisesti, eikä tutkimukseen osallistuminen vaikuta siihen. Potilaat, joiden on todettu olevan patogeenisten loisten (esim. Ascaris lumbricoides) tarjotaan hoitoa. Potilaille, joilla on H. pylori -infektio ja asiaankuuluvat oireet, tarjotaan kansallisten ohjeiden mukaista häätöhoitoa. Jos hoitokustannukset eivät kata sairausvakuutusjärjestelmää (NHIS), kustannukset katetaan opintobudjetista.

Interventiot:

Tässä tutkimuksessa ei tehdä interventioita.

Näytteen kokolaskenta:

Suunniteltua otoskokoa koskevat laskelmat tehtiin, mutta niitä ei lainattu, koska niitä ei perusteltu hyvin. Koska ei ole olemassa tietoja T-solupopulaatioiden muutoksista H. pylori -infektion aikana, perusteltu näytekoko-analyysi ei ole mahdollista. Oletamme, että säätelevien T-solujen (Treg) frekvenssi ero on yksi keskeinen päätepiste, joka on 1-2 %, jotta se olisi kliinisesti merkittävä. Merkittävän 1 %:n eron osoittamiseksi ryhmien välillä, joiden tilastollinen teho on 0,9 ja α = 0,05, käytettäessä paritonta, kaksipuolista t-testiä, tarvittaisiin 380 potilaan otoskoko. H. pylori -infektion esiintyvyydestä HIV-potilaiden keskuudessa Ghanassa ei ole luotettavia tietoja. Muiden Afrikan maiden tietojen mukaan oletamme esiintyvyyden olevan 60-80 %. Jotta varmistetaan, että saadaan riittävästi H. pylori -negatiivisia potilaita ja pystymme valitsemaan vastaavan ryhmän H. pylori -tartunnan saamattomia potilaita, ehdotamme silti 1000 HIV-tartunnan saaneen potilaan seulomista. Kaikki potilaat, jotka on värvätty ja seulottu H. pylorin varalta, analysoidaan HIV-taudin kliinisen etenemisen suhteen. Ei myöskään ole olemassa tietoja kliinisen kulun seurausten arvioimiseksi. Tällaisia ​​eroja on kuitenkin vaikea tunnistaa HIV-taudin kliinisen kulun suuren vaihtelun ja monien sekaannusten vuoksi.

Tilastollinen analyysi:

Jatkuvia muuttujia verrataan parillisilla Studentin t-testeillä tai Wilcoxonin etumerkillä tilastollisista jakaumista riippuen. Jatkuville muuttujille käytetään lineaarista regressioanalyysiä ja Fisherin muunnostestiä. Suhteita verrataan khin neliötesteillä. Usein regressioanalyysi ja logistinen regressioanalyysi suoritetaan tarpeen mukaan sekatekijöiden korjaamiseksi. P-arvo <0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi.