Virkningen af ​​Helicobacter Pylori-infektion på immunregulering og klinisk forløb hos HIV-patienter i Ghana (HHECO)

Studere design:

Observationel case kontrol undersøgelse med longitudinel opfølgning

Rekruttering:

1000 HIV-patienter, der regelmæssigt går på KATH HIV-klinikken, vil blive screenet for H. pylori-infektion og andre parasitære mave-tarminfektioner (som mulige konfoundere). Demografiske, kliniske og immunologiske data for disse patienter vil blive dokumenteret af undersøgelseslæger.

To grupper med hver 100 patienter med H. pylori-infektion og 100 patienter uden H. pylori-infektion udvælges derefter, matchet efter køn, alder, baseline HIV-virusmængde, CD4-celletal og andre konfoundere.

100 raske bloddonorer uden HIV-infektion screenes ligeligt for H. pylori og andre gastrointestinale infektioner og fungerer som kontrolgruppe.

Studieprocedurer:

Baseline:

Kvalificerede patienter vil blive rekrutteret efter undersøgelsesproceduren og potentielle risici forbundet med deltagelse i undersøgelsen er blevet forklaret og skriftligt informeret samtykke er indhentet. Inddragelsen i undersøgelsen skal på ingen måde påvirke beslutningen om at starte HAART eller valget af antiretrovirale lægemidler. Patienter kan trække samtykket til at deltage helt eller delvist tilbage på et hvilket som helst tidspunkt under undersøgelsen uden at angive grunde. Tilbagetrækningen af ​​samtykke vil på ingen måde påvirke den videre ledelse negativt. Rekruttering vil begynde efter etisk godkendelse er opnået fra de relevante myndigheder.

Baseline demografiske, kliniske og socioøkonomiske data samt sygehistorien vil blive dokumenteret af de behandlende læger, der er involveret i HIV-tjenester, som er blindet for immunologiske parametre (undtagen CD4-celletal) og afføringstestresultater. Rutinemæssige laboratorieparametre vil blive ekstraheret fra patientens mapper, herunder CD4-celletal, fuld blodtælling samt lever- og nyrefunktionstest.

Afføringsprøve:

Patienterne bliver bedt om at give en frisk afføringsprøve, der skal testes for ormeæg, protozoer og H. pylori. Efter koncentrering og klargøring med natriumacetat-eddikesyre-formalin (SAF) farves prøverne med jod og kinyoun-opløsning til mikroskopi. Ubehandlet frisk afføring fryses ved -80°C til H. pylori-testning ved brug af en kommercielt tilgængelig H. pylori-stolantigentest (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) i henhold til producentens specifikationer.

Blodprøve:

En venøs blodprøve (2x 8 ml CPT-rør, Becton Dickinson) udtages sammen med blodopsamlingen til de rutinemæssige laboratorieundersøgelser. Plasma adskilles til analyse af cytokiner ved hjælp af Elisa eller cytometriske perlearrays (CBA), og det resterende plasma opbevares ved -80°C. Perifere blodmononukleære celler (PBMC) isoleres i henhold til producentens specifikationer og forberedes til yderligere test ved flowcytometri. En del af PBMC vil blive opbevaret i flydende nitrogen til senere analyse. Plasmaprøver vil hovedsageligt blive brugt til at vurdere cytokinprofilen (inflammatoriske og TH1/TH2 cytokiner) ved hjælp af ELISA og multi-bead flow arrays. PBMC vil blive analyseret ved flowcytometri for at bestemme frekvensen og fænotypen af ​​Treg, defineret som CD4+, CD25+, FoxP3+ celler, og aktiveringsstatus og T-celleprofil (f.eks. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), såvel som apoptosemarkører. Ex vivo intracellulær cytokinassay for IL-2, IL-4, IL-10 og IL-17 vil blive udført på ustimuleret og stimuleret PBMC. FACS-analyser vil blive udført i KATH-immunologilaboratoriet ved hjælp af FACSCalibur flowcytometeret (Becton Dickinson) og CellQuest Pro-softwaren.

Opfølgning:

Efter baseline-evaluering følges patienterne op i et år. 12 måneder efter baseline-evalueringen udtages en venøs blodprøve (2x8ml CPT), og de immunologiske parametre gentages som specificeret for baseline-evalueringen. Patienter, der modtager behandling af tarmpatogener, eller som er startet på antiretroviral behandling, alt efter klinisk indikation, vil blive bedt om at afgive en ekstra blodprøve til immunologisk evaluering tre måneder efter påbegyndelse af behandlingen. I tilfælde af behandling for et tarmpatogen, vil en afføringsprøve også blive indsamlet efter tre måneder for at bekræfte udryddelse.

Slutpunkter:

Primære slutpunkter:

1. Hyppighed og aktiveringsstatus af T-celle undergrupper i HIV-positive patienter med versus uden H. pylori-infektion
2. Ændring af CD4-celler og HIV-virusbelastning hos HIV-positive patienter med versus uden H. pylori-infektion under opfølgning
3. Forekomst af kliniske hændelser hos HIV-positive patienter med versus uden H. pylori-infektion under opfølgning

Sekundære slutpunkter:

1. Forekomst af H. pylori-infektion hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana, sammenlignet med bloddonorer
2. Forekomst af infektion med helminth og andre gastrointestinale parasitter hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana, sammenlignet med bloddonorer
3. Prævalens og risikofaktorer for gastrointestinale infektioner hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana
4. Sammenslutning af mave-tarminfektioner med mave-tarmsymptomer
5. Sammenslutning af gastrointestinale infektioner med ernæringsstatus, svind og anæmi hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana

Behandlingsregimer:

Håndteringen af ​​HIV-infektionen vil blive udført i henhold til nationale og institutionelle retningslinjer og vil ikke blive påvirket af undersøgelsesdeltagelsen. Patienter fundet inficeret med patogene parasitter (f. Ascaris lumbricoides) vil blive tilbudt behandling. Patienter med H. pylori-infektion og relevante symptomer vil blive tilbudt eradikationsterapi i henhold til nationale retningslinjer. Hvis behandlingsudgifter ikke dækkes af Sygesikringen (NHIS), dækkes udgifterne over undersøgelsesbudgettet.

Interventioner:

Der udføres ingen interventioner i denne undersøgelse.

Beregning af prøvestørrelse:

Beregninger af den planlagte stikprøvestørrelse blev udført, men ikke citeret, da de ikke var velunderbyggede. Da der ikke eksisterer data om ændringer af T-cellepopulationer under H. pylori-infektion, er en underbygget prøvestørrelsesanalyse ikke mulig. Vi antager en forskel i frekvensen af ​​regulatoriske T-celler (Treg), som et nøgleendepunkt, i intervallet 1-2 %, som minimum for at være klinisk signifikant. For at påvise en signifikant forskel på 1 % mellem grupperne med en statistisk styrke på 0,9 og α=0,05, ved brug af den uparrede, 2-sidede t-test, ville der være behov for en stikprøvestørrelse på 380 patienter. Der findes ingen pålidelige data om forekomsten af ​​H. pylori-infektion blandt HIV-patienter i Ghana. Ifølge data fra andre afrikanske lande antager vi en prævalens på 60-80 %. For at være sikker på at få tilstrækkeligt med H. pylori-negative patienter og for at kunne udvælge en matchet gruppe af H. pylori-uinficerede patienter, foreslår vi stadig at screene 1000 HIV-inficerede patienter. Alle patienter rekrutteret og screenet for H. pylori vil blive analyseret for klinisk progression af HIV-sygdom. Ligeledes findes der ingen data til at vurdere konsekvenserne for det kliniske forløb. Sådanne forskelle er imidlertid vanskelige at identificere på grund af den høje variabilitet af det kliniske forløb af HIV-sygdom og mangfoldigheden af ​​konfoundere.

Statistisk analyse:

Kontinuerlige variabler skal sammenlignes med parrede Students t-test eller Wilcoxon signed rank test afhængigt af statistiske fordelinger. Lineær regressionsanalyse og Fishers transformationstest vil blive brugt til kontinuerte variable. Andele vil blive sammenlignet ved chi-square test. Multipel regressionsanalyse og logistisk regressionsanalyse vil blive udført efter behov for at korrigere for konfoundere. En p-værdi <0,05 vil blive betragtet som statistisk signifikant.