Die Auswirkungen einer Helicobacter-pylori-Infektion auf die Immunregulation und den klinischen Verlauf bei HIV-Patienten in Ghana (HHECO)

Studiendesign:

Fall-Kontroll-Beobachtungsstudie mit Längsschnitt-Follow-up

Rekrutierung:

1000 HIV-Patienten, die regelmäßig die KATH-HIV-Klinik aufsuchen, werden auf eine H. pylori-Infektion und andere parasitäre Magen-Darm-Infektionen (als mögliche Confounder) untersucht. Demografische, klinische und immunologische Daten dieser Patienten werden von den Studienärzten dokumentiert.

Anschließend werden zwei Gruppen mit jeweils 100 Patienten mit H. pylori-Infektion und 100 Patienten ohne H. pylori-Infektion ausgewählt, die nach Geschlecht, Alter, Ausgangs-HIV-Viruslast, CD4-Zellzahl und anderen Confoundern abgeglichen werden.

100 gesunde Blutspender ohne HIV-Infektion werden gleichermaßen auf H. pylori und andere Magen-Darm-Infektionen untersucht und dienen als Kontrollgruppe.

Studienablauf:

Grundlinie:

Geeignete Patienten werden rekrutiert, nachdem das Studienverfahren und potenzielle Risiken im Zusammenhang mit der Teilnahme an der Studie erklärt wurden und eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt wurde. Die Aufnahme in die Studie hat keinerlei Einfluss auf die Entscheidung zur Einleitung einer HAART oder die Wahl der antiretroviralen Medikamente. Patienten können ihre Einwilligung zur Teilnahme an der Studie jederzeit ohne Angabe von Gründen ganz oder teilweise widerrufen. Der Widerruf der Einwilligung wirkt sich in keiner Weise negativ auf die weitere Verwaltung aus. Die Rekrutierung beginnt, nachdem die ethische Genehmigung von den zuständigen Behörden eingeholt wurde.

Die demografischen, klinischen und sozioökonomischen Basisdaten sowie die Krankengeschichte werden von den behandelnden Ärzten der HIV-Dienste dokumentiert, die gegenüber immunologischen Parametern (außer CD4-Zellzahl) und Stuhltestergebnissen verblindet sind. Routine-Laborparameter werden aus den Patientenakten extrahiert, darunter CD4-Zellzahl, Vollblutbild sowie Leber- und Nierenfunktionstests.

Stuhlprobe:

Die Patienten werden gebeten, eine frische Stuhlprobe zur Untersuchung auf Wurmeier, Protozoen und H. pylori abzugeben. Nach Konzentration und Vorbereitung mit Natriumacetat-Essigsäure-Formalin (SAF) werden die Proben mit Jod und Kinyoun-Lösung für die Mikroskopie gefärbt. Unbehandelter frischer Stuhl wird für den H. pylori-Test unter Verwendung eines kommerziell erhältlichen H. pylori-Stuhl-Antigentests (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) gemäß den Spezifikationen des Herstellers bei -80 °C eingefroren.

Blutprobe:

Eine venöse Blutprobe (2x 8ml CPT-Röhrchen, Becton Dickinson) wird zusammen mit der Blutentnahme für die routinemäßigen Laboruntersuchungen entnommen. Plasma wird für die Analyse von Zytokinen durch Elisa oder zytometrische Bead-Arrays (CBA) getrennt und das verbleibende Plasma wird bei -80 °C gelagert. Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden gemäß den Angaben des Herstellers isoliert und für weitere Tests durch Durchflusszytometrie vorbereitet. Ein Teil der PBMC wird für spätere Analysen in flüssigem Stickstoff gelagert. Plasmaproben werden hauptsächlich zur Beurteilung des Zytokinprofils (entzündliche und TH1/TH2-Zytokine) durch ELISA und Multi-Bead-Flow-Arrays verwendet. PBMC werden durch Durchflusszytometrie analysiert, um die Häufigkeit und den Phänotyp von Treg, definiert als CD4+-, CD25+-, FoxP3+-Zellen, sowie den Aktivierungsstatus und das T-Zell-Profil (z. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69) sowie Apoptosemarker. Ein intrazellulärer Ex-vivo-Zytokin-Assay für IL-2, IL-4, IL-10 und IL-17 wird an unstimulierten und stimulierten PBMC durchgeführt. FACS-Analysen werden im KATH-Immunologielabor unter Verwendung des FACSCalibur-Durchflusszytometers (Becton Dickinson) und der CellQuest Pro-Software durchgeführt.

Nachverfolgen:

Nach der Baseline-Evaluierung werden die Patienten ein Jahr lang nachbeobachtet. 12 Monate nach der Baseline-Evaluierung wird eine venöse Blutprobe (2x8ml CPT) entnommen und die immunologischen Parameter wie für die Baseline-Evaluation vorgegeben wiederholt. Patienten, die je nach klinischer Indikation eine Behandlung von Darmpathogenen erhalten oder mit einer antiretroviralen Therapie begonnen werden, werden gebeten, drei Monate nach Beginn der Behandlung eine zusätzliche Blutprobe zur immunologischen Untersuchung abzugeben. Im Falle einer Behandlung gegen einen Darmkeim wird nach drei Monaten zusätzlich eine Stuhlprobe entnommen, um die Eradikation zu bestätigen.

Endpunkte:

Primäre Endpunkte:

1. Häufigkeit und Aktivierungsstatus von T-Zell-Subpopulationen bei HIV-positiven Patienten mit versus ohne H.-pylori-Infektion
2. Veränderung der CD4-Zellen und der HIV-Viruslast bei HIV-positiven Patienten mit versus ohne H.-pylori-Infektion während der Nachbeobachtung
3. Inzidenz klinischer Ereignisse bei HIV-positiven Patienten mit versus ohne H.-pylori-Infektion während der Nachsorge

Sekundäre Endpunkte:

1. Prävalenz der H. pylori-Infektion bei HIV-Patienten in Kumasi, Ghana, im Vergleich zu Blutspendern
2. Prävalenz der Infektion mit Helminthen und anderen Magen-Darm-Parasiten bei HIV-Patienten in Kumasi, Ghana, im Vergleich zu Blutspendern
3. Prävalenz und Risikofaktoren für Magen-Darm-Infektionen bei HIV-Patienten in Kumasi, Ghana
4. Assoziation von Magen-Darm-Infektionen mit Magen-Darm-Symptomen
5. Assoziation von Magen-Darm-Infektionen mit Ernährungszustand, Auszehrung und Anämie bei HIV-Patienten in Kumasi, Ghana

Behandlungsschemata:

Das Management der HIV-Infektion erfolgt gemäß den nationalen und institutionellen Richtlinien und wird durch die Studienteilnahme nicht beeinflusst. Patienten, bei denen eine Infektion mit pathogenen Parasiten (z. Ascaris lumbricoides) wird eine Behandlung angeboten. Patienten mit H. pylori-Infektion und entsprechenden Symptomen wird eine Eradikationstherapie gemäß den nationalen Leitlinien angeboten. Wenn die Behandlungskosten nicht von der Nationalen Krankenversicherung (NHIS) übernommen werden, werden die Kosten aus dem Studienbudget gedeckt.

Eingriffe:

Im Rahmen dieser Studie werden keine Interventionen durchgeführt.

Berechnung der Stichprobengröße:

Berechnungen zur geplanten Stichprobengröße wurden durchgeführt, aber nicht zitiert, da nicht gut belegt. Da keine Daten zu den Veränderungen von T-Zell-Populationen während einer H.-pylori-Infektion vorliegen, ist eine fundierte Stichprobenanalyse nicht möglich. Wir gehen davon aus, dass ein Unterschied in der Frequenz regulatorischer T-Zellen (Treg) als ein wichtiger Endpunkt im Bereich von 1-2 % als klinisch signifikantes Minimum gilt. Um einen signifikanten Unterschied von 1 % zwischen den Gruppen mit einer statistischen Aussagekraft von 0,9 und α = 0,05 unter Verwendung des ungepaarten, zweiseitigen t-Tests nachzuweisen, wäre eine Stichprobengröße von 380 Patienten erforderlich. Zur Prävalenz der H.-pylori-Infektion bei HIV-Patienten in Ghana liegen keine verlässlichen Daten vor. Nach Daten aus anderen afrikanischen Ländern gehen wir von einer Prävalenz von 60-80% aus. Um sicherzugehen, genügend H. pylori-negative Patienten zu erhalten und eine passende Gruppe von nicht H. pylori-infizierten Patienten auswählen zu können, schlagen wir dennoch vor, 1000 HIV-infizierte Patienten zu screenen. Alle rekrutierten und auf H. pylori untersuchten Patienten werden auf das klinische Fortschreiten der HIV-Erkrankung untersucht. Ebenso liegen keine Daten zur Abschätzung der Folgen für den klinischen Verlauf vor. Solche Unterschiede sind jedoch aufgrund der hohen Variabilität des klinischen Verlaufs der HIV-Erkrankung und der Vielzahl von Confoundern schwer zu identifizieren.

Statistische Analyse:

Kontinuierliche Variablen müssen in Abhängigkeit von statistischen Verteilungen mit gepaarten Student-t-Tests oder Wilcoxon-Vorzeichen-Rang-Test verglichen werden. Lineare Regressionsanalyse und Fisher-Transformationstest werden für kontinuierliche Variablen verwendet. Proportionen werden durch Chi-Quadrat-Tests verglichen. Multiple Regressionsanalysen und logistische Regressionsanalysen werden nach Bedarf durchgeführt, um Confounder zu korrigieren. Ein p-Wert < 0,05 gilt als statistisch signifikant.