Влияние инфекции Helicobacter Pylori на иммунную регуляцию и клиническое течение у пациентов с ВИЧ в Гане (HHECO)

Дизайн исследования:

Обсервационное исследование случай-контроль с лонгитюдным наблюдением

Набор персонала:

1000 пациентов с ВИЧ, регулярно посещающих клинику KATH HIV, будут обследованы на наличие инфекции H. pylori и других паразитарных желудочно-кишечных инфекций (как возможных сопутствующих факторов). Демографические, клинические и иммунологические данные этих пациентов будут документированы врачами-исследователями.

Затем отбирают две группы по 100 пациентов с инфекцией H. pylori и по 100 пациентов без инфекции H. pylori, сопоставляя их по полу, возрасту, исходной вирусной нагрузке ВИЧ, количеству клеток CD4 и другим искажающим факторам.

100 здоровых доноров крови без ВИЧ-инфекции в равной степени обследуются на H. pylori и другие желудочно-кишечные инфекции и служат контрольной группой.

Процедуры исследования:

Исходный уровень:

Подходящие пациенты будут набраны после того, как будет объяснена процедура исследования и потенциальные риски, связанные с участием в исследовании, и получено письменное информированное согласие. Включение в исследование никоим образом не повлияет на решение о начале ВААРТ или выборе антиретровирусных препаратов. Пациенты могут отозвать согласие на участие частично или полностью в любое время в ходе исследования без объяснения причин. Отзыв согласия никоим образом не повлияет негативно на дальнейшее управление. Прием на работу начнется после получения этического одобрения от соответствующих органов.

Исходные демографические, клинические и социально-экономические данные, а также история болезни будут задокументированы лечащими врачами, участвующими в службах по борьбе с ВИЧ, которые не знают иммунологических параметров (за исключением количества клеток CD4) и результатов анализов кала. Обычные лабораторные параметры будут извлечены из папок пациента, включая количество клеток CD4, общий анализ крови, а также тесты функции печени и почек.

Образец кала:

Пациентов просят предоставить свежий образец стула для тестирования на наличие яиц глистов, простейших и H. pylori. После концентрирования и приготовления раствором ацетата натрия-уксусной кислоты-формалином (САФ) образцы окрашивают йодом и раствором киньюна для микроскопии. Необработанный свежий стул замораживают при -80°C для тестирования на H.pylori с использованием коммерчески доступного теста на антиген стула H.pylori (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) в соответствии со спецификациями производителя.

Образец крови:

Образец венозной крови (2x 8 мл CPT-пробирки, Becton Dickinson) берется вместе с кровью для рутинных лабораторных исследований. Плазму отделяют для анализа цитокинов с помощью ELISA или цитометрических матриц (CBA), а оставшуюся плазму хранят при -80°C. Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяют в соответствии со спецификациями производителя и готовят для дальнейшего тестирования с помощью проточной цитометрии. Часть РВМС будет храниться в жидком азоте для последующего анализа. Образцы плазмы будут в основном использоваться для оценки профиля цитокинов (воспалительных и цитокинов TH1/TH2) с помощью ELISA и массивов потока с несколькими шариками. PBMC будут анализировать с помощью проточной цитометрии для определения частоты и фенотипа Treg, определяемого как клетки CD4+, CD25+, FoxP3+, а также статуса активации и профиля Т-клеток (например, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), а также маркеры апоптоза. Анализ внутриклеточных цитокинов ex vivo на ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 и ИЛ-17 будет проводиться на нестимулированных и стимулированных РВМС. Анализы FACS будут проводиться в иммунологической лаборатории KATH с использованием проточного цитометра FACSCalibur (Becton Dickinson) и программного обеспечения CellQuest Pro.

Следовать за:

После исходной оценки пациенты наблюдаются в течение одного года. Через 12 месяцев после исходной оценки берут образец венозной крови (2x8 мл СРТ) и повторяют иммунологические параметры, как указано для исходной оценки. Пациентам, получающим лечение от кишечных патогенов или начинающим антиретровирусную терапию по клиническим показаниям, будет предложено предоставить дополнительный образец крови для иммунологического исследования через три месяца после начала лечения. В случае лечения кишечного патогена образец стула также будет собран через три месяца для подтверждения эрадикации.

Конечные точки:

Первичные конечные точки:

1. Частота и статус активации субпопуляций Т-клеток у ВИЧ-позитивных пациентов с инфекцией H. pylori по сравнению с отсутствием инфекции.
2. Изменение клеток CD4 и вирусной нагрузки ВИЧ у ВИЧ-позитивных пациентов с инфекцией H. pylori по сравнению с отсутствием инфекции во время наблюдения
3. Частота клинических событий у ВИЧ-позитивных пациентов с инфекцией H. pylori по сравнению с отсутствием инфекции во время последующего наблюдения

Вторичные конечные точки:

1. Распространенность инфекции H. pylori у пациентов с ВИЧ в Кумаси, Гана, по сравнению с донорами крови
2. Распространенность заражения гельминтами и другими желудочно-кишечными паразитами у пациентов с ВИЧ в Кумаси, Гана, по сравнению с донорами крови
3. Распространенность и факторы риска желудочно-кишечных инфекций у пациентов с ВИЧ в Кумаси, Гана
4. Ассоциация желудочно-кишечных инфекций с желудочно-кишечными симптомами
5. Связь желудочно-кишечных инфекций с состоянием питания, истощением и анемией у пациентов с ВИЧ в Кумаси, Гана

Схемы лечения:

Лечение ВИЧ-инфекции будет осуществляться в соответствии с национальными и институциональными рекомендациями, и участие в исследовании не повлияет на него. Пациенты, инфицированные возбудителями паразитов (например, Ascaris lumbricoides) будет предложено лечение. Пациентам с инфекцией H. pylori и соответствующими симптомами будет предложена эрадикационная терапия в соответствии с национальными рекомендациями. Если расходы на лечение не покрываются Национальной схемой медицинского страхования (NHIS), расходы будут покрываться за счет бюджета исследования.

Вмешательства:

Никаких вмешательств в рамках данного исследования не проводится.

Расчет размера выборки:

Расчеты по планируемому объему выборки были сделаны, но не приводились, так как недостаточно обоснованы. Поскольку нет данных об изменениях популяций Т-клеток во время инфекции H. pylori, обоснованный анализ размера выборки невозможен. Мы предполагаем разницу частоты регуляторных Т-клеток (Treg) в качестве одной из ключевых конечных точек в диапазоне 1-2%, как минимум, чтобы быть клинически значимым. Чтобы продемонстрировать значительную разницу в 1% между группами со статистической мощностью 0,9 и α = 0,05, используя непарный двусторонний t-критерий, потребуется выборка из 380 пациентов. Нет надежных данных о распространенности инфекции H. pylori среди пациентов с ВИЧ в Гане. По данным из других африканских стран мы предполагаем распространенность 60-80%. Чтобы быть уверенным в получении достаточного количества пациентов с отрицательным результатом на H. pylori и иметь возможность выбрать соответствующую группу пациентов, не инфицированных H. pylori, мы по-прежнему предлагаем провести скрининг 1000 ВИЧ-инфицированных пациентов. Все пациенты, набранные и прошедшие скрининг на H. pylori, будут проанализированы на предмет клинического прогрессирования ВИЧ-инфекции. Точно так же нет данных для оценки последствий для клинического течения. Однако такие различия трудно выявить из-за высокой вариабельности клинического течения ВИЧ-инфекции и множества вмешивающихся факторов.

Статистический анализ:

Непрерывные переменные следует сравнивать с помощью парных t-тестов Стьюдента или критерия знакового ранга Уилкоксона в зависимости от статистического распределения. Для непрерывных переменных будут использоваться линейный регрессионный анализ и критерий преобразования Фишера. Пропорции будут сравниваться с помощью теста хи-квадрат. Множественный регрессионный анализ и логистический регрессионный анализ будут выполнены по мере необходимости, чтобы исправить искажающие факторы. Значение p <0,05 будет считаться статистически значимым.