Inverkan av Helicobacter Pylori-infektion på immunreglering och kliniskt förlopp hos HIV-patienter i Ghana (HHECO)

Studera design:

Observationell fallkontrollstudie med longitudinell uppföljning

Rekrytering:

1000 HIV-patienter som regelbundet besöker KATH HIV-kliniken kommer att screenas för H. pylori-infektion och andra parasitära gastrointestinala infektioner (som möjliga konfounders). Demografiska, kliniska och immunologiska data för dessa patienter kommer att dokumenteras av studieläkare.

Två grupper med vardera 100 patienter med H. pylori-infektion och 100 patienter utan H. pylori-infektion väljs sedan ut, matchade efter kön, ålder, baslinje HIV-virusmängd, CD4-cellantal och andra konfounders.

100 friska blodgivare utan HIV-infektion screenas lika för H. pylori och andra gastrointestinala infektioner och fungerar som kontrollgrupp.

Studieprocedurer:

Baslinje:

Kvalificerade patienter kommer att rekryteras efter att studieproceduren och potentiella risker förknippade med att delta i studien har förklarats och skriftligt informerat samtycke har erhållits. Inkluderingen i studien ska inte på något sätt påverka beslutet att påbörja HAART eller valet av antiretrovirala läkemedel. Patienter kan när som helst under studien dra tillbaka samtycke till att delta delvis eller helt utan att ange skäl. Återkallande av samtycke kommer inte på något sätt att negativt påverka den fortsatta förvaltningen. Rekryteringen kommer att påbörjas efter att etiskt godkännande har erhållits från lämpliga myndigheter.

Demografiska, kliniska och socioekonomiska basdata samt medicinsk historia kommer att dokumenteras av de behandlande läkare som är involverade i HIV-tjänster, som är blinda för immunologiska parametrar (förutom antalet CD4-celler) och avföringstestresultat. Rutinmässiga laboratorieparametrar kommer att extraheras från patientens mappar, inklusive CD4-cellantal, fullt blodvärde samt lever- och njurfunktionstester.

Avföringsprov:

Patienterna uppmanas att tillhandahålla ett färskt avföringsprov som ska testas för maskägg, protozoer och H. pylori. Efter koncentration och beredning med natriumacetat-ättiksyra-formalin (SAF) färgas proverna med jod och kinyoun-lösning för mikroskopi. Obehandlad färsk avföring fryses vid -80°C för H. pylori-testning med ett kommersiellt tillgängligt H. pylori-avföringsantigentest (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) enligt tillverkarens specifikationer.

Blodprov:

Ett venöst blodprov (2x 8ml CPT-rör, Becton Dickinson) tas tillsammans med blodinsamlingen för de rutinmässiga laboratorieundersökningarna. Plasma separeras för analys av cytokiner med Elisa eller cytometriska pärlor (CBA) och den återstående plasman lagras vid -80°C. Perifera mononukleära blodceller (PBMC) isoleras enligt tillverkarens specifikationer och förbereds för ytterligare testning med flödescytometri. En del av PBMC kommer att lagras i flytande kväve för senare analys. Plasmaprover kommer huvudsakligen att användas för att bedöma cytokinprofilen (inflammatoriska och TH1/TH2 cytokiner) med ELISA och multi-bead flow arrays. PBMC kommer att analyseras med flödescytometri för att bestämma frekvensen och fenotypen av Treg, definierad som CD4+, CD25+, FoxP3+ celler, och aktiveringsstatus och T-cellsprofil (t.ex. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), såväl som apoptosmarkörer. Ex vivo intracellulär cytokinanalys för IL-2, IL-4, IL-10 och IL-17 kommer att utföras på ostimulerade och stimulerade PBMC. FACS-analyser kommer att utföras i KATH-immunologilaboratoriet med hjälp av FACSCalibur-flödescytometern (Becton Dickinson) och programvaran CellQuest Pro.

Uppföljning:

Efter baslinjeutvärdering följs patienterna upp under ett år. 12 månader efter baslinjeutvärderingen tas ett venöst blodprov (2x8ml CPT) och de immunologiska parametrarna upprepas som specificerat för baslinjeutvärderingen. Patienter som får behandling av tarmpatogener, eller som påbörjas med antiretroviral behandling, enligt klinisk indikation, kommer att uppmanas att lämna ett extra blodprov för immunologisk utvärdering tre månader efter påbörjad behandling. Vid behandling av en tarmpatogen kommer ett avföringsprov också att tas efter tre månader för att bekräfta utrotning.

Slutpunkter:

Primära slutpunkter:

1. Frekvens och aktiveringsstatus för T-cellsundergrupper i HIV-positiva patienter med kontra utan H. pylori-infektion
2. Förändring av CD4-celler och HIV-virusmängd hos HIV-positiva patienter med kontra utan H. pylori-infektion under uppföljning
3. Incidensen av kliniska händelser hos HIV-positiva patienter med kontra utan H. pylori-infektion under uppföljning

Sekundära slutpunkter:

1. Prevalens av H. pylori-infektion hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana, jämfört med blodgivare
2. Prevalensen av infektion med helmint och andra gastrointestinala parasiter hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana, jämfört med blodgivare
3. Prevalens och riskfaktorer för gastrointestinala infektioner hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana
4. Förening av gastrointestinala infektioner med gastrointestinala symtom
5. Förening av gastrointestinala infektioner med näringsstatus, slöseri och anemi hos HIV-patienter i Kumasi, Ghana

Behandlingsregimer:

Hanteringen av HIV-infektionen kommer att utföras enligt nationella och institutionella riktlinjer och kommer inte att påverkas av studiedeltagandet. Patienter som befunnits vara infekterade med patogenparasiter (t. Ascaris lumbricoides) kommer att erbjudas behandling. Patienter med H. pylori-infektion och relevanta symtom kommer att erbjudas eradikeringsterapi enligt nationella riktlinjer. Om behandlingskostnaderna inte täcks av National Health Insurance Scheme (NHIS) kommer kostnaderna att täckas av studiebudgeten.

Interventioner:

Inga interventioner genomförs inom denna studie.

Provstorleksberäkning:

Beräkningar av den planerade urvalsstorleken gjordes men citerades inte eftersom de inte var väl underbyggda. Eftersom det inte finns några data om förändringar av T-cellspopulationer under H. pylori-infektion, är en underbyggd provstorleksanalys inte möjlig. Vi antar en skillnad i frekvensen av regulatoriska T-celler (Treg), som en nyckelslutpunkt, i intervallet 1-2%, som det minsta för att vara kliniskt signifikant. För att visa en signifikant skillnad på 1 % mellan grupperna med en statistisk styrka på 0,9 och α=0,05, med användning av det oparade, 2-sidiga t-testet, skulle en provstorlek på 380 patienter behövas. Det finns inga tillförlitliga data om förekomsten av H. pylori-infektion bland HIV-patienter i Ghana. Enligt data från andra afrikanska länder antar vi en prevalens på 60-80%. För att vara säker på att få tillräckligt många H. pylori-negativa patienter och för att kunna välja en matchad grupp av H. pylori-oinfekterade patienter, föreslår vi fortfarande att man screenar 1000 HIV-infekterade patienter. Alla patienter som rekryteras och screenas för H. pylori kommer att analyseras för klinisk progression av HIV-sjukdom. Likaså finns det inga data för att uppskatta konsekvenserna för det kliniska förloppet. Sådana skillnader är emellertid svåra att identifiera på grund av den stora variationen i det kliniska förloppet av HIV-sjukdom och mångfalden av konfounders.

Statistisk analys:

Kontinuerliga variabler ska jämföras med parade Students t-test eller Wilcoxon signerade rangtest beroende på statistiska fördelningar. Linjär regressionsanalys och Fishers transformationstest kommer att användas för kontinuerliga variabler. Proportioner kommer att jämföras med chi-kvadrattest. Multipel regressionsanalys och logistisk regressionsanalys kommer att utföras på lämpligt sätt för att korrigera för konfounders. Ett p-värde <0,05 anses vara statistiskt signifikant.