De impact van Helicobacter Pylori-infectie op de immuunregulatie en het klinische beloop bij hiv-patiënten in Ghana (HHECO)

Studie opzet:

Observationele case-control studie met longitudinale follow-up

Werving:

1000 HIV-patiënten die regelmatig de KATH HIV-kliniek bezoeken, zullen worden gescreend op H. pylori-infectie en andere parasitaire gastro-intestinale infecties (als mogelijke confounders). Demografische, klinische en immunologische gegevens van die patiënten zullen worden gedocumenteerd door onderzoeksartsen.

Twee groepen met elk 100 patiënten met H. pylori-infectie en 100 patiënten zonder H. pylori-infectie worden vervolgens geselecteerd, gematcht op basis van geslacht, leeftijd, baseline hiv-virale belasting, aantal CD4-cellen en andere confounders.

100 gezonde bloeddonoren zonder HIV-infectie worden gelijkelijk gescreend op H. pylori en andere gastro-intestinale infecties en dienen als controlegroep.

Studieprocedures:

Basislijn:

In aanmerking komende patiënten zullen worden gerekruteerd nadat de studieprocedure en mogelijke risico's verbonden aan deelname aan de studie zijn uitgelegd en schriftelijke geïnformeerde toestemming is verkregen. De opname in de studie zal op geen enkele manier invloed hebben op de beslissing om HAART te starten of de keuze van antiretrovirale geneesmiddelen. Patiënten kunnen hun toestemming om geheel of gedeeltelijk deel te nemen op elk moment tijdens het onderzoek intrekken zonder opgaaf van redenen. Het intrekken van de toestemming zal op geen enkele wijze het verdere beheer negatief beïnvloeden. Werving zal beginnen nadat ethische goedkeuring is verkregen van de bevoegde autoriteiten.

Baseline demografische, klinische en sociaal-economische gegevens, evenals de medische geschiedenis zullen worden gedocumenteerd door de behandelende artsen die betrokken zijn bij hiv-diensten, die blind zijn voor immunologische parameters (behalve het aantal CD4-cellen) en ontlastingstestresultaten. Routinematige laboratoriumparameters zullen worden geëxtraheerd uit de mappen van de patiënt, waaronder het aantal CD4-cellen, het volledige bloedbeeld en lever- en nierfunctietesten.

Ontlastingsmonster:

Patiënten wordt gevraagd om een ​​vers ontlastingsmonster te verstrekken om te testen op wormeieren, protozoa en H. pylori. Na concentratie en bereiding met natriumacetaat-azijnzuur-formaline (SAF) worden de monsters gekleurd met jodium- en kinyoun-oplossing voor microscopie. Onbehandelde verse ontlasting wordt ingevroren bij -80°C voor H. pylori-testen met behulp van een in de handel verkrijgbare H. pylori-ontlastingsantigeentest (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) volgens de specificaties van de fabrikant.

Bloedmonster:

Een veneus bloedmonster (2x 8 ml CPT-buis, Becton Dickinson) wordt samen met de bloedafname genomen voor de routinematige laboratoriumonderzoeken. Plasma wordt gescheiden voor de analyse van cytokines door Elisa of cytometrische bead arrays (CBA) en het resterende plasma wordt bewaard bij -80°C. Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) worden geïsoleerd volgens de specificaties van de fabrikant en voorbereid voor verder onderzoek door middel van flowcytometrie. Een deel van de PBMC wordt voor latere analyse in vloeibare stikstof bewaard. Plasmamonsters zullen voornamelijk gebruikt worden om het cytokineprofiel (inflammatoire en TH1/TH2-cytokines) te bepalen door middel van ELISA en multi-bead flow arrays. PBMC zal worden geanalyseerd door middel van flowcytometrie om de frequentie en het fenotype van Treg, gedefinieerd als CD4+-, CD25+-, FoxP3+-cellen, en de activeringsstatus en het T-celprofiel (bijv. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), evenals apoptose-markers. Ex vivo intracellulaire cytokinetest voor IL-2, IL-4, IL-10 en IL-17 zal worden uitgevoerd op ongestimuleerde en gestimuleerde PBMC. FACS-analyses zullen worden uitgevoerd in het KATH-immunologielaboratorium, met behulp van de FACSCalibur-flowcytometer (Becton Dickinson) en de CellQuest Pro-software.

Opvolgen:

Na baseline-evaluatie worden patiënten gedurende een jaar gevolgd. 12 maanden na de baseline-evaluatie wordt een veneus bloedmonster (2x8 ml CPT) afgenomen en worden de immunologische parameters herhaald zoals gespecificeerd voor de baseline-evaluatie. Patiënten die behandeld worden voor darmpathogenen, of die gestart zijn met antiretrovirale therapie, volgens klinische indicatie, zullen drie maanden na aanvang van de behandeling worden gevraagd om een ​​aanvullend bloedmonster af te staan ​​voor immunologisch onderzoek. Bij behandeling van een darmpathogeen wordt na drie maanden ook een ontlastingsstaal genomen om de uitroeiing te bevestigen.

Eindpunten:

Primaire eindpunten:

1. Frequentie en activeringsstatus van subsets van T-cellen bij HIV-positieve patiënten met versus zonder H. pylori-infectie
2. Verandering van CD4-cellen en hiv-virale belasting bij hiv-positieve patiënten met versus zonder H. pylori-infectie tijdens de follow-up
3. Incidentie van klinische gebeurtenissen bij HIV-positieve patiënten met versus zonder H. pylori-infectie tijdens de follow-up

Secundaire eindpunten:

1. Prevalentie van H. pylori-infectie bij hiv-patiënten in Kumasi, Ghana, in vergelijking met bloeddonoren
2. Prevalentie van infectie met helminth en andere gastro-intestinale parasieten bij hiv-patiënten in Kumasi, Ghana, in vergelijking met bloeddonoren
3. Prevalentie en risicofactoren voor gastro-intestinale infecties bij HIV-patiënten in Kumasi, Ghana
4. Associatie van gastro-intestinale infecties met gastro-intestinale symptomen
5. Associatie van gastro-intestinale infecties met voedingsstatus, verspilling en bloedarmoede bij HIV-patiënten in Kumasi, Ghana

Behandelingsregimes:

Het beheer van de hiv-infectie zal worden uitgevoerd volgens de nationale en institutionele richtlijnen en zal niet worden beïnvloed door de studiedeelname. Patiënten die besmet bleken te zijn met pathogene parasieten (bijv. Ascaris lumbricoides) behandeling aangeboden krijgen. Patiënten met een H. pylori-infectie en relevante symptomen krijgen uitroeiingstherapie aangeboden volgens de nationale richtlijnen. Als de behandelingskosten niet worden vergoed door de Nationale Zorgverzekering (NHIS), worden de kosten vergoed uit het studiebudget.

Interventies:

Binnen dit onderzoek vinden geen interventies plaats.

Berekening van de steekproefomvang:

Berekeningen op de geplande steekproefomvang zijn gedaan, maar niet geciteerd omdat ze niet goed onderbouwd waren. Aangezien er geen gegevens bestaan ​​over de veranderingen van T-celpopulaties tijdens H. pylori-infectie, is een onderbouwde analyse van de steekproefomvang niet mogelijk. We gaan ervan uit dat een verschil in de frequentie van regulatoire T-cellen (Treg), als een belangrijk eindpunt, in het bereik van 1-2%, het minimum is om klinisch significant te zijn. Om een ​​significant verschil van 1% aan te tonen tussen de groepen met een statistisch vermogen van 0,9 en α=0,05, met behulp van de ongepaarde, tweezijdige t-toets, zou een steekproefomvang van 380 patiënten nodig zijn. Er zijn geen betrouwbare gegevens over de prevalentie van H. pylori-infectie bij hiv-patiënten in Ghana. Volgens gegevens uit andere Afrikaanse landen gaan we uit van een prevalentie van 60-80%. Om er zeker van te zijn voldoende H. pylori-negatieve patiënten te krijgen en om een ​​gematchte groep van H. pylori niet-geïnfecteerde patiënten te kunnen selecteren, raden we toch aan om 1000 HIV-geïnfecteerde patiënten te screenen. Alle patiënten die worden gerekruteerd en gescreend op H. pylori zullen worden geanalyseerd op klinische progressie van de HIV-ziekte. Evenzo zijn er geen gegevens om de gevolgen voor het klinisch beloop in te schatten. Dergelijke verschillen zijn echter moeilijk te identificeren vanwege de grote variabiliteit van het klinische beloop van de hiv-ziekte en de veelheid aan confounders.

Statistische analyse:

Continue variabelen moeten worden vergeleken door middel van gepaarde Student's t-tests of Wilcoxon ondertekende rangtest, afhankelijk van statistische verdelingen. Lineaire regressieanalyse en Fisher's transformatietest zullen worden gebruikt voor continue variabelen. Verhoudingen zullen worden vergeleken door middel van chikwadraattoetsen. Meervoudige regressieanalyse en logistische regressieanalyse zullen waar nodig worden uitgevoerd om te corrigeren voor confounders. Een p-waarde <0,05 wordt als statistisch significant beschouwd.