O impacto da infecção por Helicobacter Pylori na regulação imune e curso clínico em pacientes com HIV em Gana (HHECO)

Design de estudo:

Estudo observacional de caso controle com acompanhamento longitudinal

Recrutamento:

1.000 pacientes com HIV que frequentam regularmente a clínica de HIV do KATH serão rastreados para infecção por H. pylori e outras infecções gastrointestinais parasitárias (como possíveis fatores de confusão). Os dados demográficos, clínicos e imunológicos desses pacientes serão documentados pelos médicos do estudo.

Dois grupos com cada 100 pacientes com infecção por H. pylori e 100 pacientes sem infecção por H. pylori são então selecionados, pareados de acordo com sexo, idade, carga viral de HIV basal, contagem de células CD4 e outros fatores de confusão.

100 doadores de sangue saudáveis ​​sem infecção por HIV são igualmente rastreados para H. pylori e outras infecções gastrointestinais e servem como grupo de controle.

Procedimentos de estudo:

Linha de base:

Os pacientes elegíveis serão recrutados após o procedimento do estudo e os riscos potenciais associados à participação no estudo forem explicados e o consentimento informado por escrito for obtido. A inclusão no estudo não afetará de forma alguma a decisão de iniciar a HAART ou a escolha dos medicamentos antirretrovirais. Os pacientes podem retirar o consentimento para participar parcial ou totalmente a qualquer momento durante o estudo sem dar motivos. A retirada do consentimento não afetará de forma negativa o gerenciamento posterior. O recrutamento começará após a obtenção da aprovação ética das autoridades competentes.

Dados demográficos, clínicos e socioeconômicos basais, bem como o histórico médico, serão documentados pelos médicos assistentes envolvidos nos serviços de HIV, que não têm acesso a parâmetros imunológicos (exceto contagem de células CD4) e resultados de exames de fezes. Parâmetros laboratoriais de rotina serão extraídos das pastas dos pacientes, incluindo contagem de células CD4, hemograma completo, bem como testes de função hepática e renal.

Amostra de fezes:

Os pacientes são solicitados a fornecer uma amostra de fezes frescas para serem testadas quanto a ovos de vermes, protozoários e H. pylori. Após concentração e preparo com acetato de sódio-ácido acético-formalina (SAF), os espécimes são corados com iodo e solução de kinyoun para microscopia. Fezes frescas não tratadas são congeladas a -80°C para teste de H. pylori usando um teste de antígeno fecal de H. pylori disponível comercialmente (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) de acordo com as especificações do fabricante.

Amostra de sangue:

Uma amostra de sangue venoso (tubo CPT 2x 8ml, Becton Dickinson) é coletada junto com a coleta de sangue para as investigações laboratoriais de rotina. O plasma é separado para análise de citocinas por Elisa ou arranjos de esferas citométricas (CBA) e o plasma restante é armazenado a -80°C. As células mononucleares do sangue periférico (PBMC) são isoladas de acordo com as especificações do fabricante e preparadas para testes adicionais por citometria de fluxo. Uma proporção de PBMC será armazenada em nitrogênio líquido para análise posterior. Amostras de plasma serão usadas principalmente para avaliar o perfil de citocinas (citocinas inflamatórias e TH1/TH2) por ELISA e multi-bead flow arrays. As PBMC serão analisadas por citometria de fluxo para determinar a frequência e fenótipo de Treg, definido como células CD4+, CD25+, FoxP3+, e o status de ativação e perfil de células T (por exemplo, CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), bem como marcadores de apoptose. O ensaio de citocinas intracelulares ex vivo para IL-2, IL-4, IL-10 e IL-17 será realizado em PBMC estimuladas e não estimuladas. As análises FACS serão realizadas no laboratório de imunologia KATH, utilizando o citômetro de fluxo FACSCalibur (Becton Dickinson) e o software CellQuest Pro.

Seguir:

Após a avaliação inicial, os pacientes são acompanhados por um ano. 12 meses após a avaliação inicial, uma amostra de sangue venoso (2x8ml CPT) é coletada e os parâmetros imunológicos são repetidos conforme especificado para a avaliação inicial. Os pacientes que receberem tratamento para patógenos intestinais, ou que iniciarem terapia antirretroviral, conforme indicação clínica, serão solicitados a fornecer uma amostra de sangue adicional para avaliação imunológica três meses após o início do tratamento. No caso de tratamento para um patógeno intestinal, uma amostra de fezes também será coletada após três meses para confirmar a erradicação.

Pontos finais:

Pontos finais primários:

1. Frequência e status de ativação de subconjuntos de células T em pacientes HIV positivos com versus sem infecção por H. pylori
2. Mudança de células CD4 e carga viral do HIV em pacientes HIV positivos com versus sem infecção por H. pylori durante o acompanhamento
3. Incidência de eventos clínicos em pacientes HIV positivos com versus sem infecção por H. pylori durante o acompanhamento

Pontos finais secundários:

1. Prevalência da infecção por H. pylori em pacientes com HIV em Kumasi, Gana, em comparação com doadores de sangue
2. Prevalência de infecção por helmintos e outros parasitas gastrointestinais em pacientes com HIV em Kumasi, Gana, em comparação com doadores de sangue
3. Prevalência e fatores de risco para infecções gastrointestinais em pacientes com HIV em Kumasi, Gana
4. Associação de infecções gastrointestinais com sintomas gastrointestinais
5. Associação de infecções gastrointestinais com estado nutricional, emagrecimento e anemia em pacientes com HIV em Kumasi, Gana

Regimes de tratamento:

O manejo da infecção pelo HIV será realizado de acordo com as diretrizes nacionais e institucionais e não será influenciado pela participação no estudo. Pacientes infectados com parasitas patogênicos (p. Ascaris lumbricoides) receberá tratamento. Pacientes com infecção por H. pylori e sintomas pertinentes receberão terapia de erradicação de acordo com as diretrizes nacionais. Se os custos do tratamento não forem cobertos pelo National Health Insurance Scheme (NHIS), os custos serão cobertos pelo orçamento do estudo.

Intervenções:

Nenhuma intervenção é realizada neste estudo.

Cálculo do tamanho da amostra:

Cálculos sobre o tamanho planejado da amostra foram feitos, mas não citados, pois não são bem fundamentados. Uma vez que não existem dados sobre as alterações das populações de células T durante a infecção por H. pylori, não é possível uma análise fundamentada do tamanho da amostra. Assumimos uma diferença da frequência de células T reguladoras (Treg), como um ponto final chave, na faixa de 1-2%, como o mínimo para ser clinicamente significativo. Para demonstrar uma diferença significativa de 1% entre os grupos com poder estatístico de 0,9 e α=0,05, usando o teste t bilateral não pareado, seria necessário um tamanho amostral de 380 pacientes. Não existem dados confiáveis ​​sobre a prevalência da infecção por H. pylori entre pacientes com HIV em Gana. De acordo com dados de outros países africanos, assumimos uma prevalência de 60-80%. Para garantir a obtenção de pacientes H. pylori negativos suficientes e para poder selecionar um grupo correspondente de pacientes não infectados por H. pylori, sugerimos a triagem de 1.000 pacientes infectados pelo HIV. Todos os pacientes recrutados e rastreados para H. pylori serão analisados ​​quanto à progressão clínica da doença pelo HIV. Da mesma forma, não existem dados para estimar as consequências para o curso clínico. No entanto, essas diferenças são difíceis de identificar devido à alta variabilidade do curso clínico da doença pelo HIV e à multiplicidade de fatores de confusão.

Análise estatística:

Variáveis ​​contínuas devem ser comparadas por testes t de Student pareados ou teste de postos sinalizados de Wilcoxon, dependendo das distribuições estatísticas. Análise de regressão linear e teste de transformação de Fisher serão utilizados para variáveis ​​contínuas. As proporções serão comparadas por testes qui-quadrado. A análise de regressão múltipla e a análise de regressão logística serão realizadas conforme apropriado para corrigir os fatores de confusão. Um valor de p < 0,05 será considerado estatisticamente significativo.