Vliv infekce Helicobacter pylori na imunitní regulaci a klinický průběh u pacientů s HIV v Ghaně (HHECO)

Studovat design:

Observační případová kontrolní studie s longitudinálním sledováním

Nábor:

1000 HIV pacientů pravidelně navštěvujících HIV kliniku KATH bude vyšetřeno na infekci H. pylori a další parazitární gastrointestinální infekce (jako možné zmatky). Demografické, klinické a imunologické údaje těchto pacientů budou dokumentovány lékaři studie.

Poté se vyberou dvě skupiny, každá po 100 pacientech s infekcí H. pylori a 100 pacientech bez infekce H. pylori, seřazené podle pohlaví, věku, výchozí virové nálože HIV, počtu CD4 buněk a dalších zkreslujících faktorů.

100 zdravých dárců krve bez infekce HIV je rovnoměrně vyšetřeno na H. pylori a další gastrointestinální infekce a slouží jako kontrolní skupina.

Studijní postupy:

Základní linie:

Způsobilí pacienti budou přijati poté, co byl vysvětlen postup studie a potenciální rizika spojená s účastí ve studii a byl získán písemný informovaný souhlas. Zařazení do studie žádným způsobem neovlivní rozhodnutí zahájit HAART nebo výběr antiretrovirových léků. Pacienti mohou svůj souhlas s částečnou nebo úplnou účastí kdykoli v průběhu studie odvolat bez udání důvodů. Odvolání souhlasu nijak negativně neovlivní další hospodaření. Nábor bude zahájen po získání etického souhlasu od příslušných úřadů.

Základní demografická, klinická a socioekonomická data, jakož i anamnéza budou dokumentovány ošetřujícími lékaři zapojenými do služeb HIV, kteří jsou zaslepeni vůči imunologickým parametrům (kromě počtu buněk CD4) a výsledkům testů stolice. Z pacientových složek budou extrahovány rutinní laboratorní parametry, včetně počtu CD4 buněk, úplného krevního obrazu a také jaterních a ledvinových testů.

Vzorek stolice:

Pacienti jsou požádáni, aby poskytli čerstvý vzorek stolice k testování na vajíčka červů, prvoky a H. pylori. Po koncentraci a přípravě pomocí octanu sodného-kyseliny octové-formalinu (SAF) se vzorky obarví roztokem jódu a kinyounu pro mikroskopii. Neošetřená čerstvá stolice se zmrazí na -80 °C pro testování H. pylori pomocí komerčně dostupného testu na antigen stolice H. pylori (Premier Platinum HpSA Plus, Meridian) podle specifikací výrobce.

Krevní vzorek:

Vzorek žilní krve (2x 8ml zkumavka CPT, Becton Dickinson) je odebrán společně s odběrem krve pro rutinní laboratorní vyšetření. Plazma je separována pro analýzu cytokinů pomocí Elisa nebo cytometric bead arrays (CBA) a zbývající plazma je skladována při -80 °C. Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) jsou izolovány podle specifikací výrobce a připraveny k dalšímu testování průtokovou cytometrií. Část PBMC bude uložena v kapalném dusíku pro pozdější analýzu. Vzorky plazmy budou použity hlavně k hodnocení cytokinového profilu (zánětlivé a TH1/TH2 cytokiny) pomocí ELISA a multi-bead flow arrays. PBMC budou analyzovány průtokovou cytometrií, aby se určila frekvence a fenotyp Treg, definovaných jako buňky CD4+, CD25+, FoxP3+, a stav aktivace a profil T-buněk (např. CD3, CD4, CD8, CD45RA, CD38, CD39, CD69), stejně jako markery apoptózy. Ex vivo intracelulární cytokinový test na IL-2, IL-4, IL-10 a IL-17 bude proveden na nestimulovaných a stimulovaných PBMC. Analýzy FACS budou prováděny v imunologické laboratoři KATH pomocí průtokového cytometru FACSCalibur (Becton Dickinson) a softwaru CellQuest Pro.

Následovat:

Po základním hodnocení jsou pacienti sledováni po dobu jednoho roku. 12 měsíců po základním hodnocení se odebere vzorek žilní krve (2x8ml CPT) a imunologické parametry se zopakují, jak je specifikováno pro základní hodnocení. Pacienti, kteří jsou léčeni střevními patogeny, nebo kterým je podle klinické indikace zahájena antiretrovirová terapie, budou požádáni o poskytnutí dalšího vzorku krve k imunologickému vyšetření tři měsíce po zahájení léčby. V případě léčby střevního patogenu bude také po třech měsících odebrán vzorek stolice pro potvrzení eradikace.

Koncové body:

Primární koncové body:

1. Frekvence a stav aktivace podskupin T-buněk u HIV pozitivních pacientů s infekcí H. pylori versus bez infekce
2. Změna CD4 buněk a virové zátěže HIV u HIV pozitivních pacientů s infekcí H. pylori oproti bez infekce během sledování
3. Incidence klinických příhod u HIV pozitivních pacientů s infekcí H. pylori versus bez infekce během sledování

Sekundární koncové body:

1. Prevalence infekce H. pylori u pacientů s HIV v Kumasi v Ghaně ve srovnání s dárci krve
2. Prevalence infekce helminty a jinými gastrointestinálními parazity u pacientů s HIV v Kumasi v Ghaně ve srovnání s dárci krve
3. Prevalence a rizikové faktory gastrointestinálních infekcí u pacientů s HIV v Kumasi, Ghana
4. Asociace gastrointestinálních infekcí s gastrointestinálními příznaky
5. Asociace gastrointestinálních infekcí se stavem výživy, chřadnutím a anémií u pacientů s HIV v Kumasi, Ghana

Léčebné režimy:

Léčba infekce HIV bude prováděna podle národních a institucionálních směrnic a nebude ovlivněna účastí ve studii. Pacienti, u kterých bylo zjištěno, že jsou infikováni patogenními parazity (např. Ascaris lumbricoides) bude nabídnuta léčba. Pacientům s infekcí H. pylori a souvisejícími příznaky bude nabídnuta eradikační terapie podle národních doporučení. Pokud náklady na léčbu nejsou hrazeny z národního systému zdravotního pojištění (NHIS), budou náklady hrazeny z rozpočtu studie.

Zásahy:

V rámci této studie nejsou prováděny žádné intervence.

Vzorový výpočet velikosti:

Byly provedeny výpočty plánované velikosti vzorku, ale nebyly uvedeny, protože nebyly dostatečně podložené. Protože neexistují žádné údaje o změnách populací T-buněk během infekce H. pylori, není možná podložená analýza velikosti vzorku. Předpokládáme, že rozdíl ve frekvenci regulačních T-buněk (Treg) jako jeden klíčový cílový bod v rozmezí 1-2 %, jako minimum, které je klinicky významné. K prokázání významného rozdílu 1 % mezi skupinami se statistickou mocností 0,9 a α=0,05 by pomocí nepárového 2stranného t-testu bylo zapotřebí vzorku o velikosti 380 pacientů. Neexistují žádné spolehlivé údaje o prevalenci infekce H. pylori mezi pacienty s HIV v Ghaně. Podle údajů z ostatních afrických zemí předpokládáme prevalenci 60–80 %. Abychom si byli jisti, že získáme dostatečný počet H. pylori negativních pacientů a abychom mohli vybrat odpovídající skupinu neinfikovaných H. pylori pacientů, stále doporučujeme provést screening 1000 pacientů infikovaných HIV. U všech pacientů přijatých a vyšetřených na H. pylori bude analyzována klinická progrese onemocnění HIV. Stejně tak neexistují žádná data pro odhad důsledků pro klinický průběh. Tyto rozdíly je však obtížné identifikovat kvůli vysoké variabilitě klinického průběhu onemocnění HIV a četnosti zmatků.

Statistická analýza:

Spojité proměnné je třeba porovnávat párovými Studentovými t-testy nebo Wilcoxonovým znaménkovým rank testem v závislosti na statistických distribucích. Pro spojité proměnné bude použita lineární regresní analýza a Fisherův transformační test. Proporce budou porovnány pomocí chí-kvadrát testů. Podle potřeby bude provedena vícenásobná regresní analýza a logistická regresní analýza, aby se napravily zmatky. P-hodnota <0,05 bude považována za statisticky významnou.