Potentiel de transformation des cellules mammaires épithéliales épithéliales hétérozygotes exposées à la mutation génique de susceptibilité au cancer du sein

Pour étudier les différentes lignées cellulaires, nous prévoyons d'isoler et de propager des progéniteurs luminaux à partir d'un tissu mammaire humain normal. À cette fin, 10 échantillons de tissu mammaire humain seront obtenus à partir d'une mastectomie à risque réduit chez des femmes préménopausées en bonne santé présentant des mutations BRCA1. Les tissus de 10 femmes préménopausées subissant une chirurgie esthétique du sein sans antécédents familiaux de cancer du sein ou de l'ovaire serviront de groupe témoin. Afin d'isoler les cellules épithéliales primaires, le tissu mammaire humain sera haché et digéré par voie enzymatique pendant la nuit dans de la collagénase et de l'hyaluronidase pour donner une suspension d'organoïdes épithéliaux. Ces organoïdes seront collectés et digérés avec de la trypsine, de la dispase et de la désoxyribonucléase 1 (DNAse), seront filtrés pour générer une suspension cellulaire unique, remise en suspension dans Hank's + 2 % de sérum bovin fœtal (FBS) et 0,1 mg/mL de DNAse, et également incubé avec un anticorps bloquant pendant 15 minutes sur de la glace.

Les cellules seront traitées avec de l'œstrogène (E2) (10 nM) pendant 48 h puis seront irradiées pour induire une rupture double brin. Les cellules seront irradiées avec 8 Gray (Gy) à l'aide d'une source de Co60.

Pour accomplir notre étude, les cellules épithéliales mammaires hétérozygotes de mutation BRCA exposées et non exposées aux œstrogènes seront irradiées et 1 h plus tard, l'ARN sera extrait des cellules à l'aide de Tri-reagent (Sigma). L'ARN sera converti en une bibliothèque de fragments d'ADNc (ADN complémentaire) et sera envoyé pour un séquençage en profondeur dans la plateforme illumina Hi-Seq.