Potencial de transformación de células mamarias epiteliales heterocigotas de mutación genética de susceptibilidad al cáncer de mama expuesta a E2
Identificación del potencial de transformación de células mamarias epiteliales heterocigotas BRCA1 (gen 1 de susceptibilidad al cáncer de mama) y BRCA2 (gen 2 de susceptibilidad al cáncer de mama) expuestas a estrógenos normales debido a la irradiación
La susceptibilidad al cáncer de mama está relacionada con la combinación de factores de riesgo ambientales genéticos, hormonales y múltiples, como mutaciones en el gen BRCA y exposición excesiva a estrógenos exógenos, respectivamente. BRCA es una proteína nuclear que mantiene la estabilidad del genoma, actuando como un actor clave en el complejo de reparación del ADN. Recientemente, ha surgido evidencia de que la heterocigosis de la mutación BRCA en sí misma mejora la reparación del ADN abortado y puede contribuir al inicio del cáncer de mama después de la exposición a la radiación. En nuestros resultados preliminares sobre cultivos de linfocitos a corto plazo, encontramos evidencia adicional de que los portadores de mutaciones BRCA1 y BRCA2 heterocigotos sanos tienen una respuesta diferente al daño en el ADN que los no portadores.
El objetivo principal de nuestro proyecto en curso es identificar la modulación transcripcional y el potencial de transformación de las células mamarias epiteliales heterocigotas normales con mutación BRCA1 y BRCA2 después de la irradiación y examinar cómo se ve afectado por la exposición al estrógeno. Nuestras hipótesis serán investigadas por RNA-seq y microRNA-seq para identificar un perfil de expresión molecular único de las células expuestas al estrógeno después de la irradiación ionizante.
Comprender el papel de la heterocigosis BRCA en la respuesta celular a la exposición a los estrógenos ya la irradiación puede facilitar el desarrollo de estrategias diagnósticas y terapéuticas más apropiadas para estas personas.
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Descripción detallada
Para estudiar los diferentes linajes celulares, planeamos aislar y propagar progenitores luminales de un tejido mamario humano normal. Para ello, se obtendrán 10 muestras de tejido mamario humano de mastectomía reductora de riesgo en mujeres sanas premenopáusicas con mutaciones en BRCA1. Los tejidos de 10 mujeres premenopáusicas que se sometieron a una cirugía estética de mama sin antecedentes familiares de cáncer de mama o de ovario servirán como grupo de control. Para aislar las células epiteliales primarias, se picará tejido mamario humano y se digerirá enzimáticamente durante la noche en colagenasa e hialuronidasa para producir una suspensión de organoides epiteliales. Estos organoides se recolectarán y se digerirán más con tripsina, dispasa y desoxirribonucleasa 1 (ADNasa), se filtrarán para generar una suspensión de células individuales, se resuspenderán en suero bovino fetal (FBS) al 2 % de Hank y 0,1 mg/mL de ADNasa, y también incubado con un anticuerpo de bloqueo durante 15 minutos en hielo.
Las células se tratarán con estrógeno (E2) (10 nM) durante 48 hy luego se irradiarán para inducir la ruptura de la doble hebra. Las células se irradiarán con 8 Gray (Gy) utilizando una fuente de Co60.
Para llevar a cabo nuestro estudio, se irradiarán células mamarias epiteliales heterocigotas con mutación BRCA expuestas y no expuestas a estrógenos y 1 h más tarde se extraerá el ARN de las células utilizando Tri-reactivo (Sigma). El ARN se convertirá en una biblioteca de fragmentos de ADNc (ADN complementario) y se enviará para una secuenciación profunda en la plataforma illumina Hi-Seq.
Tipo de estudio
Inscripción (Anticipado)
Contactos y Ubicaciones
Ubicaciones de estudio
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Jerusalem, Israel
- Hadassah Medical Center
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
- saludable
- premenopáusica
- mujer
- mutaciones BRCA1
- Mutaciones BRCA2
Criterio de exclusión:
- mujeres con cáncer de mama o de ovario
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
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no portadores
Se obtendrán tejidos de mujeres premenopáusicas sometidas a cirugía estética mamaria sin antecedentes familiares de cáncer de mama u ovario. epitelial
las células mamarias se aislarán, se tratarán con estrógeno durante 48 horas y luego se irradiarán.
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Portadores de mutación BRCA1
Tejidos de mastectomía reductora de riesgo en mujeres premenopáusicas sanas con mutaciones BRCA1 sometidas a epitelial
las células mamarias se aislarán, se tratarán con estrógeno durante 48 horas y luego se irradiarán.
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Portadores de mutación BRCA2
Tejidos de mastectomía reductora de riesgo en mujeres premenopáusicas sanas con mutaciones BRCA2 sometidas a epitelial
las células mamarias se aislarán, se tratarán con estrógeno durante 48 horas y luego se irradiarán.
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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El perfil transcripcional de las células mamarias epiteliales heterocigóticas
Periodo de tiempo: Se obtendrán muestras de tejido mamario humano de mujeres premenopáusicas que se someten a cirugía mamaria. las células se aislarán inmediatamente y 48 h después se identificará el perfil transcripcional.
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realizaremos un análisis de perfiles de expresión de ARN-seq de células epiteliales heterocigotas BRCA expuestas a estrógenos normales después de la irradiación.
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Se obtendrán muestras de tejido mamario humano de mujeres premenopáusicas que se someten a cirugía mamaria. las células se aislarán inmediatamente y 48 h después se identificará el perfil transcripcional.
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Asher Y Salmon, MD, PhD, Hadassah Medical Organization
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio
Finalización primaria (ANTICIPADO)
Finalización del estudio (ANTICIPADO)
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
Publicado por primera vez (ESTIMAR)
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (ESTIMAR)
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
Última verificación
Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Términos MeSH relevantes adicionales
Otros números de identificación del estudio
- ISF-1702/12
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