Эта страница была переведена автоматически, точность перевода не гарантируется. Пожалуйста, обратитесь к английской версии для исходного текста.

Потенциал трансформации гетерозиготных эпителиальных клеток молочной железы с мутацией гена восприимчивости к раку молочной железы E2

24 июля 2013 г. обновлено: Asher Salmon, Hadassah Medical Organization

Идентификация потенциала трансформации нормальных подвергающихся воздействию эстрогена BRCA1 (ген 1 предрасположенности к раку молочной железы) и BRCA2 (ген 2 предрасположенности к раку молочной железы) гетерозиготных эпителиальных клеток молочной железы в результате облучения

Восприимчивость к раку молочной железы связана с комбинацией генетических, гормональных и множества других факторов риска окружающей среды, таких как мутации в гене BRCA и избыточное воздействие экзогенного эстрогена соответственно. BRCA — это ядерный белок, который поддерживает стабильность генома, действуя как ключевой игрок в комплексе репарации ДНК. Недавно появились доказательства того, что гетерозиготная мутация BRCA сама по себе усиливает прерванную репарацию ДНК и может способствовать инициации рака молочной железы после облучения. В наших предварительных результатах по кратковременным культурам лимфоцитов мы обнаружили дополнительные доказательства того, что здоровые гетерозиготные носители мутаций BRCA1 и BRCA2 по-разному реагируют на повреждение ДНК, чем не носители.

Основной целью нашего текущего проекта является выявление транскрипционной модуляции и трансформационного потенциала нормальных гетерозиготных эпителиальных клеток молочной железы с мутациями BRCA1 и BRCA2 после облучения и изучение того, как на них влияет воздействие эстрогена. Наши гипотезы будут исследованы с помощью секвенирования РНК и секвенирования микроРНК, чтобы определить уникальный профиль молекулярной экспрессии клеток, подвергшихся воздействию эстрогена, после ионизирующего облучения.

Понимание роли гетерозиготности BRCA в клеточном ответе на воздействие эстрогена и облучение может облегчить разработку более подходящих диагностических и терапевтических стратегий для этих людей.

Обзор исследования

Статус

Неизвестный

Условия

Подробное описание

Чтобы изучить различные клеточные линии, мы планируем изолировать и размножать просветные предшественники из нормальной ткани молочной железы человека. С этой целью будет получено 10 образцов ткани молочной железы человека в результате мастэктомии, снижающей риск, у здоровых женщин в пременопаузе с мутациями BRCA1. Ткани от 10 женщин в пременопаузе, перенесших эстетическую операцию на груди без семейной истории рака молочной железы или яичников, будут служить контрольной группой. Чтобы изолировать первичные эпителиальные клетки, ткань молочной железы человека будет измельчена и подвергнута ферментативному перевариванию в течение ночи в коллагеназе и гиалуронидазе для получения суспензии эпителиальных органоидов. Эти органоиды будут собраны и дополнительно расщеплены трипсином, диспазой и дезоксирибонуклеазой 1 (ДНКазой), будут отфильтрованы для получения суспензии отдельных клеток, ресуспендированы в 2% эмбриональной бычьей сыворотке Хэнка (FBS) и 0,1 мг/мл ДНКазы, а также инкубировали с блокирующим антителом в течение 15 минут на льду.

Клетки обрабатывают эстрогеном (Е2) (10 нМ) в течение 48 ч, а затем облучают для индуцирования двухцепочечного разрыва. Клетки будут облучены дозой 8 Гр (Гр) с использованием источника Co60.

Чтобы выполнить наше исследование, гетерозиготные эпителиальные клетки молочной железы, подвергшиеся воздействию эстрогена и не подвергшиеся воздействию мутации BRCA, будут облучены, а через 1 час из клеток будет извлечена РНК с использованием Tri-реагента (Sigma). РНК будет преобразована в библиотеку фрагментов кДНК (комплементарной ДНК) и отправлена на глубокое секвенирование на платформе Illumina Hi-Seq.

Тип исследования

Наблюдательный

Регистрация (Ожидаемый)

Контакты и местонахождение

В этом разделе приведены контактные данные лиц, проводящих исследование, и информация о том, где проводится это исследование.

Места учебы

Израиль
- - Jerusalem, Израиль
    - Hadassah Medical Center

Критерии участия

Исследователи ищут людей, которые соответствуют определенному описанию, называемому критериям приемлемости. Некоторыми примерами этих критериев являются общее состояние здоровья человека или предшествующее лечение.

Критерии приемлемости

Возраст, подходящий для обучения

От 25 лет до 50 лет (ВЗРОСЛЫЙ)

Принимает здоровых добровольцев

Да

Полы, имеющие право на обучение

Женский

Метод выборки

Невероятностная выборка

Исследуемая популяция

Образцы ткани молочной железы человека будут получены в результате мастэктомии, снижающей риск, у здоровых женщин в пременопаузе с мутациями BRCA1 и BRCA2. Также будут получены ткани от женщин в пременопаузе, перенесших эстетическую операцию на груди без семейного анамнеза рака молочной железы или яичников.

Описание

Критерии включения:

здоровый
пременопаузальный
женщины
Мутации BRCA1
Мутации BRCA2

Критерий исключения:

женщины с раком молочной железы или яичников

Учебный план

В этом разделе представлена подробная информация о плане исследования, в том числе о том, как планируется исследование и что оно измеряет.

Как устроено исследование?

Детали дизайна

Количество групп / когорт

Когорты и вмешательства

Группа / когорта
неперевозчики Будут получены ткани от женщин в пременопаузе, перенесших эстетическую операцию на груди, без семейного анамнеза рака груди или яичников. клетки молочной железы будут выделены, обработаны эстрогеном в течение 48 часов, а затем подвергнуты облучению.
Носители мутации BRCA1 Эпителиальные ткани после мастэктомии, снижающей риск, у здоровых женщин в пременопаузе с мутациями BRCA1. клетки молочной железы будут выделены, обработаны эстрогеном в течение 48 часов, а затем подвергнуты облучению.
Носители мутации BRCA2 Эпителиальные ткани после мастэктомии, снижающей риск, у здоровых женщин в пременопаузе с мутациями BRCA2. клетки молочной железы будут выделены, обработаны эстрогеном в течение 48 часов, а затем подвергнуты облучению.

Что измеряет исследование?

Первичные показатели результатов

Мера результата	Мера Описание	Временное ограничение
Транскрипционный профиль гетерозиготных эпителиальных клеток молочной железы Временное ограничение: образцы ткани молочной железы человека будут получены от женщин в пременопаузе, перенесших операцию на груди. клетки будут немедленно выделены, а через 48 часов будет идентифицирован профиль транскрипции.	мы проведем анализ профиля экспрессии РНК-seq в гетерозиготных эпителиальных клетках BRCA, подвергшихся воздействию эстрогена, после облучения.	образцы ткани молочной железы человека будут получены от женщин в пременопаузе, перенесших операцию на груди. клетки будут немедленно выделены, а через 48 часов будет идентифицирован профиль транскрипции.

Соавторы и исследователи

Здесь вы найдете людей и организации, участвующие в этом исследовании.

Спонсор

Hadassah Medical Organization

Следователи

Главный следователь: Asher Y Salmon, MD, PhD, Hadassah Medical Organization

Даты записи исследования

Эти даты отслеживают ход отправки отчетов об исследованиях и сводных результатов на сайт ClinicalTrials.gov. Записи исследований и сообщаемые результаты проверяются Национальной медицинской библиотекой (NLM), чтобы убедиться, что они соответствуют определенным стандартам контроля качества, прежде чем публиковать их на общедоступном веб-сайте.

Изучение основных дат

Начало исследования

1 сентября 2013 г.

Первичное завершение (ОЖИДАЕТСЯ)

1 сентября 2014 г.

Завершение исследования (ОЖИДАЕТСЯ)

1 сентября 2015 г.

Даты регистрации исследования

Первый отправленный

22 июля 2013 г.

Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества

24 июля 2013 г.

Первый опубликованный (ОЦЕНИВАТЬ)

25 июля 2013 г.

Обновления учебных записей

Последнее опубликованное обновление (ОЦЕНИВАТЬ)