Transformasjonspotensial for E2-eksponert brystkreftmottakelighet Genmutasjon Heterozygote epiteliale brystceller

For å studere de forskjellige cellelinjene planlegger vi å isolere og forplante luminale stamceller fra et normalt menneskelig brystvev. For dette formål vil 10 humane brystvevsprøver bli tatt fra risikoreduserende mastektomi hos friske premenopausale kvinner med BRCA1-mutasjoner. Vev fra 10 premenopausale kvinner som gjennomgår estetisk brystkirurgi uten familiehistorie med bryst- eller eggstokkreft vil fungere som kontrollgruppe. For å isolere primære epitelceller, vil humant brystvev bli hakket og enzymatisk fordøyd over natten i kollagenase og hyaluronidase for å gi suspensjon av epitelorganoider. Disse organoidene vil bli samlet og videre fordøyd med trypsin, dispase og deoksyribonuklease 1 (DNAse), vil bli filtrert for å generere en enkelt cellesuspensjon, resuspendert i Hank's + 2% føtalt bovint serum (FBS) og 0,1 mg/ml DNAse, og også inkubert med et blokkerende antistoff i 15 minutter på is.

Celler vil bli behandlet med østrogen (E2) (10 nM) i 48 timer og vil deretter bli bestrålet for å indusere dobbelttrådsbrudd. Celler vil bli bestrålt med 8 Gray (Gy) ved å bruke en Co60-kilde.

For å gjennomføre studien vår, vil østrogeneksponerte og ueksponerte BRCA-mutasjonsheterozygote epiteliale brystceller bli bestrålt og 1 time senere vil RNA ekstraheres fra cellene ved hjelp av Tri-reagens (Sigma). RNA vil bli konvertert til et bibliotek av cDNA (komplementært DNA) fragmenter og vil bli sendt for dyp sekvensering i illumina Hi-Seq plattformen.