Évaluation d'une nouvelle approche du diagnostic des troubles fonctionnels constitutionnels des plaquettes
Évaluation multicentrique d'une nouvelle approche de laboratoire pour le diagnostic des troubles fonctionnels constitutionnels des plaquettes
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Les bases moléculaires des troubles des voies de signalisation potentiellement responsables de défauts constitutionnels des fonctions plaquettaires (adhésion, agrégation ou sécrétion) sont peu connues (1-5). En effet, en pratique courante, cette investigation est limitée par la complexité de l'analyse par des méthodes biochimiques (western blot), et l'exigence d'une grande quantité de plaquettes.
Nous avons conçu une nouvelle approche pour la quantification des phosphoprotéines cytoplasmiques plaquettaires par cytométrie en flux. Les plaquettes fraîches dans le plasma riche en plaquettes sont analysées au départ ou après stimulation par des agonistes majeurs (ADP, TRAP, analogue du thromboxane ou peptide lié au collagène), avec et sans inhibiteurs pertinents de chaque voie. Un code-barres multiplex est utilisé pour identifier chaque condition, permettant une analyse à haut débit (6, 7). Le profilage de la signalisation plaquettaire d'Akt, Slp76, P38 MAPK et LIMK peut être obtenu à partir d'un échantillon de sang de moins de 10 ml, et dans les 6h L'objectif principal de l'étude est de standardiser la méthode entre les laboratoires cliniques ayant une expertise standard en cytométrie en flux. L'étude sera réalisée dans 4 hôpitaux universitaires membres du réseau français de référence des maladies plaquettaires rares. Trois groupes de patients référés pour troubles hémorragiques légers ou sévères seront inclus : 1) un groupe témoin de patients (30 par centre) ayant un trouble hémorragique définitivement autre que d'origine plaquettaire (ex. "faible" de Willebrand) ; 2) un groupe de 10 patients par centre avec un trouble plaquettaire constitutionnel certain (par ex. thrombasthénie de Glanzmann) et 3) un groupe de 10 patients par centre présentant une anomalie de la fonction plaquettaire d'origine inconnue, potentiellement défectueuse dans la voie de signalisation.
Le groupe témoin servira à standardiser la méthode entre les centres et à établir les valeurs de référence. Un contrôle qualité sera mis en place en utilisant des préparations plaquettaires congelées. Les patients présentant un trouble plaquettaire certain seront utiles pour détecter d'éventuels défauts de signalisation encore non décrits dans ces pathologies. Les défauts de signalisation plaquettaire qui pourraient être mis en évidence dans ces groupes seront ensuite identifiés par des méthodes biochimiques et moléculaires conventionnelles après confirmation sur un nouvel échantillon.
Si cette nouvelle approche peut être proposée aux laboratoires cliniques travaillant sur les maladies plaquettaires rares, nous attendons une avancée de nos connaissances dans le domaine. De plus la méthode a un potentiel d'innovation pharmaceutique, pour l'identification (8) ou le suivi de nouveaux agents antiplaquettaires (9, 10), ou l'identification des défauts plaquettaires induits par de nouvelles "thérapies cibles" destinées à d'autres maladies comme le cancer ou les pathologies immunitaires (10 ).
Type d'étude
Inscription (Réel)
Phase
- N'est pas applicable
Contacts et emplacements
Lieux d'étude
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Toulouse, France, 31000
- University Hospital toulouse
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
La description
Critère d'intégration:
- patient consultant pour une symptomatologie hémorragique avec un trouble hémorragique définitivement autre que d'origine plaquettaire (ex. "faible" von Willebrand) / ou trouble plaquettaire constitutionnel (par ex. Thrombasthénie de Glanzmann) / ou avec un défaut de la fonction plaquettaire d'origine inconnue, potentiellement défectueux dans la voie de signalisation.
- Formulaire de consentement éclairé
- patient avec assurance sociale ou équivalent
Critère d'exclusion:
- traitement interférant avec la fonction des plaquettes dans les 7 jours précédant l'inscription
- thrombocytopénie <100G/L
- femelles gestantes ou allaitantes
- sujets sous protection juridique tutelle ou mesure de tutelle
- sujets impliqués dans un autre essai clinique
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
- Objectif principal: Diagnostique
- Répartition: Non randomisé
- Modèle interventionnel: Affectation parallèle
- Masquage: Aucun (étiquette ouverte)
Armes et Interventions
Groupe de participants / Bras |
Intervention / Traitement |
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Autre: trouble de saignement
La ponction sanguine chez les patients présentant un trouble hémorragique définitivement autre que d'origine plaquettaire (par ex.
"faible" de Willebrand)
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T1 et T2 : une ponction sanguine avec test de signalisation (T1 pour chaque bras, T2 à +6 mois uniquement si une anomalie au test de signalisation est détectée) le test de signalisation est réalisé par cytométrie en flux Etape 1 : pour le bras « trouble hémorragique » : analyse par cytométrie en flux pour établir des valeurs de référence observées chez les sujets sans thrombopathie pour chaque marqueur après stimulation agoniste et recherche correspondante d'un effet si un effet centre-centre est observé sur les valeurs de référence son origine sera recherché et corrigé. Etape 2 : pour les deux autres bras : Plusieurs marqueurs seront analysés, correspondant à des trajets ou niveaux de signalisation différents. Pour chacun de ces marqueurs, le test évaluera quantitativement l'activité de phosphorylation de la protéine testée. |
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Autre: trouble plaquettaire constitutionnel
La ponction sanguine chez les patients présentant un trouble plaquettaire constitutionnel (par ex.
thrombasthénie de Glanzmann)
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T1 et T2 : une ponction sanguine avec test de signalisation (T1 pour chaque bras, T2 à +6 mois uniquement si une anomalie au test de signalisation est détectée) le test de signalisation est réalisé par cytométrie en flux Etape 1 : pour le bras « trouble hémorragique » : analyse par cytométrie en flux pour établir des valeurs de référence observées chez les sujets sans thrombopathie pour chaque marqueur après stimulation agoniste et recherche correspondante d'un effet si un effet centre-centre est observé sur les valeurs de référence son origine sera recherché et corrigé. Etape 2 : pour les deux autres bras : Plusieurs marqueurs seront analysés, correspondant à des trajets ou niveaux de signalisation différents. Pour chacun de ces marqueurs, le test évaluera quantitativement l'activité de phosphorylation de la protéine testée. |
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Autre: défaut de la fonction plaquettaire
La ponction sanguine chez les patients présentant un défaut de la fonction plaquettaire d'origine inconnue, potentiellement défectueuse dans la voie de signalisation.
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T1 et T2 : une ponction sanguine avec test de signalisation (T1 pour chaque bras, T2 à +6 mois uniquement si une anomalie au test de signalisation est détectée) le test de signalisation est réalisé par cytométrie en flux Etape 1 : pour le bras « trouble hémorragique » : analyse par cytométrie en flux pour établir des valeurs de référence observées chez les sujets sans thrombopathie pour chaque marqueur après stimulation agoniste et recherche correspondante d'un effet si un effet centre-centre est observé sur les valeurs de référence son origine sera recherché et corrigé. Etape 2 : pour les deux autres bras : Plusieurs marqueurs seront analysés, correspondant à des trajets ou niveaux de signalisation différents. Pour chacun de ces marqueurs, le test évaluera quantitativement l'activité de phosphorylation de la protéine testée. |
Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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standardiser la méthode entre les laboratoires cliniques
Délai: 3 années
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Il s'agit d'une étude pilote d'une nouvelle approche de dépistage des troubles des voies de signalisation plaquettaires par cytométrie en flux avec les principaux résultats méthodologiques (12) suivants : 1) standardiser la méthode entre les laboratoires cliniques, 2) établir des valeurs de référence de la méthode et 3) pour concevoir une évaluation de contrôle de la qualité Le critère de jugement principal portera sur la variabilité globale des valeurs de référence observées chez les sujets sans thrombopathie pour chaque marqueur après stimulation agoniste et recherche correspondante d'un effet si un effet centre-centre est observé sur les valeurs de référence son origine sera recherchée (écart à la protocole, lot de réactifs.....) et corrigé. L'"effet centre" sera également analysé par le contrôle qualité trimestriel, qui comparera les résultats obtenus à partir des mêmes tests de plaquette analysés simultanément dans trois sites. |
3 années
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Décrire les voies de signalisation dans les troubles plaquettaires
Délai: 3 années
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Décrire les voies de signalisation dans les troubles plaquettaires avec un diagnostic définitif. Dépister les défauts putatifs chez les patients hémorragiques présentant des troubles de la fonction plaquettaire d'origine inconnue. Identifier plus profondément les défauts trouvés dans ces groupes. Plusieurs marqueurs seront analysés, correspondant à des voies ou à des niveaux de signalisation différents. Pour chacun de ces marqueurs, le test évaluera quantitativement l'activité de phosphorylation de la protéine testée. On peut ainsi déterminer pour chaque sujet et chaque marqueur, la réponse au test définie par :
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3 années
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Les enquêteurs
- Chercheur principal: Pierre SIE, MD PhD, University Hospital, Toulouse
Publications et liens utiles
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude
Achèvement primaire (Réel)
Achèvement de l'étude (Réel)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Estimé)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Estimé)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Mots clés
Termes MeSH pertinents supplémentaires
Autres numéros d'identification d'étude
- 12 068 08
- PHRCI 2012 (Autre subvention/numéro de financement: French Ministry of Health)
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