Avaliação de uma Nova Abordagem do Diagnóstico dos Distúrbios Funcionais Constitucionais das Plaquetas
Avaliação Multicêntrica de uma Nova Abordagem Laboratorial para o Diagnóstico dos Distúrbios Funcionais Constitucionais das Plaquetas
Visão geral do estudo
Descrição detalhada
Pouco se sabe sobre a base molecular dos distúrbios das vias de sinalização potencialmente responsáveis por defeitos constitucionais das funções plaquetárias (adesão, agregação ou secreção) (1-5). De fato, na prática rotineira, essa investigação é limitada pela complexidade da análise por métodos bioquímicos (western blotting) e pela necessidade de grande quantidade de plaquetas.
Nós projetamos uma nova abordagem para a quantificação de fosfoproteínas citoplasmáticas de plaquetas por citometria de fluxo. As plaquetas frescas no plasma rico em plaquetas são analisadas na linha de base ou após estimulação por agonistas principais (ADP, TRAP, análogo de tromboxano ou peptídeo relacionado ao colágeno), com e sem inibidores relevantes de cada via. O código de barras multiplex é usado para identificar cada condição, permitindo uma análise de alto rendimento (6, 7). O perfil de sinalização plaquetária de Akt, Slp76, P38 MAPK e LIMK pode ser obtido a partir de uma amostra de sangue de menos de 10 ml e em 6h. O principal objetivo do estudo é padronizar o método entre laboratórios clínicos com experiência padrão em citometria de fluxo. O estudo será realizado em 4 hospitais acadêmicos membros da rede francesa de referência em doenças plaquetárias raras. Três grupos de pacientes encaminhados para distúrbios hemorrágicos leves ou graves serão incluídos: 1) um grupo de controle de pacientes (30 por centro) com um distúrbio hemorrágico definitivamente diferente de origem plaquetária (p. "baixo" von Willebrand); 2) um grupo de 10 pacientes por centro com distúrbio plaquetário constitucional definido (por exemplo, Trombastenia de Glanzmann) e 3) um grupo de 10 pacientes por centro com defeito da função plaquetária de origem desconhecida, potencialmente defeituoso na via de sinalização.
O grupo controle servirá para padronizar o método entre os centros e estabelecer os valores de referência. Um controle de qualidade será estabelecido usando preparações de plaquetas congeladas. Os pacientes com distúrbio plaquetário definido serão úteis para detectar potenciais defeitos de sinalização ainda não descritos nessas patologias. Defeitos de sinalização plaquetária que possam ser evidenciados nesses grupos serão posteriormente identificados por métodos bioquímicos e moleculares convencionais após confirmação em nova amostra.
Se essa nova abordagem puder ser proposta a laboratórios clínicos que trabalham com doenças plaquetárias raras, esperamos um avanço em nosso conhecimento na área. Além disso, o método tem potencial para inovação farmacêutica, para identificar (8) ou monitorar novos agentes antiplaquetários (9, 10), ou identificar defeitos plaquetários induzidos por novas "terapias-alvo" projetadas para outras doenças, como câncer ou patologias imunológicas (10 ).
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Locais de estudo
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-
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Toulouse, França, 31000
- University Hospital toulouse
-
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critério de inclusão:
- consulta de paciente para sintomatologia hemorrágica com um distúrbio hemorrágico definitivamente diferente de origem plaquetária (por exemplo, "baixo" von Willebrand) / ou distúrbio constitucional das plaquetas (p. Trombastenia de Glanzmann) / ou com defeito da função plaquetária de origem desconhecida, potencialmente defeituoso na via de sinalização.
- Formulário de consentimento informado
- paciente com seguro de segurança social ou equivalente
Critério de exclusão:
- tratamento que interfira com a função plaquetária dentro de 7 dias antes da inscrição
- trombocitopenia <100G/L
- fêmeas grávidas ou lactantes
- sujeitos sob tutela judicial ou medida tutelar
- sujeitos envolvidos em outro ensaio clínico
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Diagnóstico
- Alocação: Não randomizado
- Modelo Intervencional: Atribuição Paralela
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Outro: distúrbio hemorrágico
Punção de sangue em pacientes com distúrbios hemorrágicos definitivamente diferentes das plaquetas (p.
"baixo" von Willebrand)
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T1 e T2: uma punção sanguínea com teste de sinalização (T1 para cada braço, T2 aos +6 meses apenas se for detectada anomalia no teste de sinalização) teste de sinalização é feito por citometria de fluxo Etapa 1: para "distúrbio hemorrágico" do braço: análise de citometria de fluxo para estabelecer valores de referência observados em indivíduos sem trombopatia para cada marcador após estimulação agonista e pesquisa correspondente de um efeito se um efeito centro-centro for observado nos valores de referência, sua origem será procurado e corrigido. Etapa 2: para os outros dois braços: Serão analisados vários marcadores, correspondentes a percursos ou níveis de sinalização diferentes. Para cada um desses marcadores, o teste avaliará quantitativamente a atividade de fosforilação da proteína testada. |
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Outro: distúrbio constitucional de plaquetas
Punção de sangue em pacientes com distúrbio constitucional de plaquetas (por exemplo,
Trombastenia de Glanzmann)
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T1 e T2: uma punção sanguínea com teste de sinalização (T1 para cada braço, T2 aos +6 meses apenas se for detectada anomalia no teste de sinalização) teste de sinalização é feito por citometria de fluxo Etapa 1: para "distúrbio hemorrágico" do braço: análise de citometria de fluxo para estabelecer valores de referência observados em indivíduos sem trombopatia para cada marcador após estimulação agonista e pesquisa correspondente de um efeito se um efeito centro-centro for observado nos valores de referência, sua origem será procurado e corrigido. Etapa 2: para os outros dois braços: Serão analisados vários marcadores, correspondentes a percursos ou níveis de sinalização diferentes. Para cada um desses marcadores, o teste avaliará quantitativamente a atividade de fosforilação da proteína testada. |
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Outro: defeito da função plaquetária
Punção sanguínea em pacientes com defeito da função plaquetária de origem desconhecida, potencialmente defeituoso na via de sinalização.
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T1 e T2: uma punção sanguínea com teste de sinalização (T1 para cada braço, T2 aos +6 meses apenas se for detectada anomalia no teste de sinalização) teste de sinalização é feito por citometria de fluxo Etapa 1: para "distúrbio hemorrágico" do braço: análise de citometria de fluxo para estabelecer valores de referência observados em indivíduos sem trombopatia para cada marcador após estimulação agonista e pesquisa correspondente de um efeito se um efeito centro-centro for observado nos valores de referência, sua origem será procurado e corrigido. Etapa 2: para os outros dois braços: Serão analisados vários marcadores, correspondentes a percursos ou níveis de sinalização diferentes. Para cada um desses marcadores, o teste avaliará quantitativamente a atividade de fosforilação da proteína testada. |
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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padronizar o método entre os laboratórios clínicos
Prazo: 3 anos
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Este é um estudo piloto de uma nova abordagem de triagem de distúrbios das vias de sinalização plaquetária por citometria de fluxo com resultados metodológicos primários (12) como segue: 1) padronizar o método entre laboratórios clínicos, 2) estabelecer valores de referência do método e 3) para projetar uma avaliação de controle de qualidade O endpoint primário se concentrará na variabilidade geral dos valores de referência observados em indivíduos sem trombopatia para cada marcador após a estimulação do agonista e a pesquisa correspondente de um efeito se um efeito centro-centro for observado nos valores de referência, sua origem será procurada (desvio do protocolo, lote de reagentes .....) e corrigido. O "efeito de centro" também será analisado pelo controle de qualidade trimestral, que comparará os resultados obtidos nos mesmos testes de wafer analisados simultaneamente em três sites. |
3 anos
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Descrever as vias de sinalização em distúrbios plaquetários
Prazo: 3 anos
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Descrever as vias de sinalização em distúrbios plaquetários com diagnóstico definido. Rastrear defeitos putativos em pacientes hemorrágicos com distúrbios da função plaquetária de origem desconhecida. Identificar mais profundamente os defeitos encontrados nesses grupos. Serão analisados vários marcadores, correspondentes a percursos ou níveis de sinalização diferentes. Para cada um desses marcadores, o teste avaliará quantitativamente a atividade de fosforilação da proteína testada. Podemos assim determinar para cada sujeito e cada marcador, a resposta ao teste definido por:
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3 anos
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Pierre SIE, MD PhD, University Hospital, Toulouse
Publicações e links úteis
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Estimado)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Estimado)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- 12 068 08
- PHRCI 2012 (Número de outro subsídio/financiamento: French Ministry of Health)
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