Оценка нового подхода к диагностике конституциональных функциональных нарушений тромбоцитов
Многоцентровая оценка нового лабораторного подхода к диагностике конституциональных функциональных нарушений тромбоцитов
Обзор исследования
Подробное описание
Мало что известно о молекулярной основе нарушений сигнальных путей, потенциально ответственных за конституциональные дефекты функций тромбоцитов (адгезия, агрегация или секреция) (1-5). Действительно, в рутинной практике это исследование ограничено сложностью анализа биохимическими методами (вестерн-блоттинг) и необходимостью большого количества тромбоцитов.
Мы разработали новый подход для количественного определения цитоплазматических фосфопротеинов тромбоцитов с помощью проточной цитометрии. Свежие тромбоциты в богатой тромбоцитами плазме анализируют на исходном уровне или после стимуляции основными агонистами (АДФ, TRAP, аналог тромбоксана или родственный коллагену пептид) с соответствующими ингибиторами каждого пути и без них. Для идентификации каждого состояния используется мультиплексное штриховое кодирование, что позволяет проводить высокопроизводительный анализ (6, 7). Профилирование сигналов тромбоцитов Akt, Slp76, P38 MAPK и LIMK можно получить из образца крови объемом менее 10 мл и в течение 6 часов. Основная цель исследования - стандартизировать метод между клиническими лабораториями со стандартным опытом в проточной цитометрии. Исследование будет проводиться в 4 академических клиниках, входящих во французскую референсную сеть редких заболеваний тромбоцитов. Будут включены три группы пациентов, направленных по поводу легких или тяжелых нарушений свертываемости крови: 1) контрольная группа пациентов (30 в каждом центре) с нарушениями свертываемости крови, явно отличными от тромбоцитарного происхождения (например, «низкий» фон Виллебранд); 2) группа из 10 пациентов на центр с определенным конституциональным нарушением тромбоцитов (например, тромбастения Гланцмана) и 3) группа по 10 пациентов на центр с дефектом функции тромбоцитов неизвестного генеза, потенциально дефектным по сигнальному пути.
Контрольная группа будет служить для стандартизации метода между центрами и для установления контрольных значений. Будет организован контроль качества с использованием замороженных препаратов тромбоцитов. Пациенты с определенным нарушением тромбоцитов будут полезны для выявления потенциальных сигнальных дефектов, еще не описанных при этих патологиях. Дефекты передачи сигнала тромбоцитами, которые могут быть обнаружены в этих группах, будут дополнительно идентифицированы обычными биохимическими и молекулярными методами после подтверждения на новом образце.
Если этот новый подход можно будет предложить клиническим лабораториям, работающим с редкими заболеваниями тромбоцитов, мы ожидаем прогресса в наших знаниях в этой области. Кроме того, этот метод может быть использован в фармацевтических инновациях для выявления (8) или мониторинга новых антиагрегантов (9, 10) или выявления дефектов тромбоцитов, вызванных новыми «таргетными препаратами», разработанными для других заболеваний, таких как рак или иммунные патологии (10). ).
Тип исследования
Регистрация (Действительный)
Фаза
- Непригодный
Контакты и местонахождение
Места учебы
-
-
-
Toulouse, Франция, 31000
- University Hospital toulouse
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Описание
Критерии включения:
- пациент, консультирующийся по поводу геморрагической симптоматики с нарушением свертываемости крови определенно другого происхождения, чем тромбоцитарное происхождение (например, «низкий» фон Виллебранда) / или конституциональное нарушение тромбоцитов (например, тромбастения Гланцмана)/или с дефектом функции тромбоцитов неизвестного происхождения, потенциально с дефектом сигнального пути.
- Форма информированного согласия
- пациент с социальным страхованием или эквивалентным
Критерий исключения:
- лечение, нарушающее функцию тромбоцитов, в течение 7 дней до включения в исследование
- тромбоцитопения <100 г/л
- беременные или кормящие самки
- субъекты, находящиеся под судебной защитой или мерой попечительства
- субъекты, участвующие в другом клиническом исследовании
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
- Основная цель: Диагностика
- Распределение: Нерандомизированный
- Интервенционная модель: Параллельное назначение
- Маскировка: Нет (открытая этикетка)
Оружие и интервенции
Группа участников / Армия |
Вмешательство/лечение |
|---|---|
|
Другой: нарушение свертываемости крови
Пункция крови у пациентов с нарушением свертываемости крови определенно не тромбоцитарного происхождения (напр.
"низкий" фон Виллебранд)
|
T1 и T2: одна пункция крови с сигнальным тестом (T1 для каждой руки, T2 через +6 месяцев, только если обнаружена аномалия в сигнальном тесте) сигнализационный тест проводится с помощью проточной цитометрии Этап 1: для группы «нарушение свертываемости крови»: анализ проточной цитометрии для установления референтных значений, наблюдаемых у субъектов без тромбопатии для каждого маркера после стимуляции агонистом, и соответствующий поиск эффекта, если эффект центр-центр наблюдается на референтных значениях, его происхождение будет искал и исправлял. Этап 2: для двух других ветвей: будут проанализированы несколько маркеров, соответствующих маршрутам или уровням различной сигнализации. Для каждого из этих маркеров тест будет количественно оценивать активность фосфорилирования тестируемого белка. |
|
Другой: конституциональное нарушение тромбоцитов
Пункция крови у пациентов с конституциональными нарушениями тромбоцитов (напр.
тромбастения Гланцмана)
|
T1 и T2: одна пункция крови с сигнальным тестом (T1 для каждой руки, T2 через +6 месяцев, только если обнаружена аномалия в сигнальном тесте) сигнализационный тест проводится с помощью проточной цитометрии Этап 1: для группы «нарушение свертываемости крови»: анализ проточной цитометрии для установления референтных значений, наблюдаемых у субъектов без тромбопатии для каждого маркера после стимуляции агонистом, и соответствующий поиск эффекта, если эффект центр-центр наблюдается на референтных значениях, его происхождение будет искал и исправлял. Этап 2: для двух других ветвей: будут проанализированы несколько маркеров, соответствующих маршрутам или уровням различной сигнализации. Для каждого из этих маркеров тест будет количественно оценивать активность фосфорилирования тестируемого белка. |
|
Другой: нарушение функции тромбоцитов
Пункция крови у пациентов с нарушением функции тромбоцитов неизвестного генеза, потенциально дефектных по сигнальному пути.
|
T1 и T2: одна пункция крови с сигнальным тестом (T1 для каждой руки, T2 через +6 месяцев, только если обнаружена аномалия в сигнальном тесте) сигнализационный тест проводится с помощью проточной цитометрии Этап 1: для группы «нарушение свертываемости крови»: анализ проточной цитометрии для установления референтных значений, наблюдаемых у субъектов без тромбопатии для каждого маркера после стимуляции агонистом, и соответствующий поиск эффекта, если эффект центр-центр наблюдается на референтных значениях, его происхождение будет искал и исправлял. Этап 2: для двух других ветвей: будут проанализированы несколько маркеров, соответствующих маршрутам или уровням различной сигнализации. Для каждого из этих маркеров тест будет количественно оценивать активность фосфорилирования тестируемого белка. |
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
стандартизировать метод между клиническими лабораториями
Временное ограничение: 3 года
|
Это пилотное исследование нового подхода к скринингу нарушений сигнальных путей тромбоцитов с помощью проточной цитометрии со следующими методологическими первичными результатами (12): 1) стандартизировать метод между клиническими лабораториями, 2) установить референтные значения метода и 3) разработать оценку контроля качества Первичная конечная точка будет сосредоточена на общей вариабельности референсных значений, наблюдаемых у субъектов без тромбопатии для каждого маркера после стимуляции агонистом, и соответствующего поиска эффекта, если эффект центр-центр наблюдается на референсных значениях, будет искаться его происхождение (отклонение от протокол, партия реагентов.....) и исправлено. «Эффект центра» также будет анализироваться ежеквартальным контролем качества, в ходе которого будут сравниваться результаты, полученные в ходе одних и тех же тестов пластин, проанализированных одновременно на трех объектах. |
3 года
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Описать сигнальные пути при нарушениях тромбоцитов.
Временное ограничение: 3 года
|
Описать сигнальные пути при нарушениях тромбоцитов с определенным диагнозом. Выявить предполагаемые дефекты при кровотечениях у больных с нарушениями функции тромбоцитов неизвестного происхождения. Более глубоко выявить дефекты, обнаруженные в этих группах. Будет проанализировано несколько маркеров, соответствующих маршрутам или уровням различной сигнализации. Для каждого из этих маркеров тест будет количественно оценивать активность фосфорилирования тестируемого белка. Таким образом, мы можем определить для каждого субъекта и каждого маркера ответ на тест, определяемый следующим образом:
|
3 года
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Следователи
- Главный следователь: Pierre SIE, MD PhD, University Hospital, Toulouse
Публикации и полезные ссылки
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования
Первичное завершение (Действительный)
Завершение исследования (Действительный)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Оцененный)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Оцененный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Дополнительные соответствующие термины MeSH
Другие идентификационные номера исследования
- 12 068 08
- PHRCI 2012 (Другой номер гранта/финансирования: French Ministry of Health)
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .