Statines pour le stress oxydatif et la fonction mitochondriale dans la polyneuropathie diabétique

Introduction Le dysfonctionnement du système nerveux chez les patients diabétiques est connu sous le nom de neuropathie diabétique et est considéré comme la complication microvasculaire la plus répandue - jusqu'à 60 % - chez les sujets atteints de diabète sucré de type 2 (DT2). La polyneuropathie diabétique (DPN) comprend ≈70 % de tous les cas. Son diagnostic est établi au moyen de scores validés basés sur des caractéristiques cliniques et des études de conduction nerveuse anormale (NCS). Les résultats physiopathologiques incluent la perte de fibres nerveuses multifocales et focales secondaire à une dégénérescence axonale et à une démyélinisation segmentaire, essentiellement due au stress oxydatif induit par l'hyperglycémie chronique, qui conduit à l'apoptose neurale. Un autre mécanisme impliqué dans les lésions nerveuses périphériques est le stress nitrosatif induit par l'oxyde nitrique (NO).

L'ézétimibe diminue la teneur en esters de cholestérol des chylomicrons en réduisant l'apport hépatique en cholestérol, ce qui augmente par conséquent l'absorption des LDL et la dépuration plasmatique ; en monothérapie, il réduit le LDL-C de 17 %. Lorsqu'il est associé à la simvastatine, la réduction du cholestérol est potentiellement augmentée ; en outre, les effets pléiotropes des statines comprennent une augmentation de l'activité du facteur nucléaire kappa B et une amélioration des ions superoxyde après 12 semaines de traitement. Un autre inhibiteur de l'hydroxy-méthyl-glutaryl coenzyme A, la rosuvastatine, a un effet antioxydant en agissant comme transporteur de radicaux libres en diminuant la production de peroxydation lipidique mitochondriale et cellulaire (LPO).

Nous avons mené cette étude pour évaluer l'effet de l'ézétimibe/simvastatine et de la rosuvastatine sur le stress oxydatif chez les patients atteints de DPN.

Méthodes Conception de l'étude Un essai clinique de phase II randomisé, en double aveugle et contrôlé par placebo a été réalisé à la Clinique et à l'Institut thérapeutique expérimental de l'Université de Guadalajara, au Mexique. Les sujets ont été assignés à trois traitements de groupe dans des blocs avec une séquence parallèle 1:1:1 par le biais d'une liste informatisée randomisée, générée par un chercheur différent ignorant les médicaments administrés. Les patients ont été divisés en : un groupe témoin qui a reçu un placebo, de l'ézétimibe/simvastatine et de la rosuvastatine en une seule dose quotidienne pendant 16 semaines. La période de sélection s'est déroulée de février 2012 à janvier 2013. Nous avons sélectionné 5 sujets sains non randomisés (HS) d'une banque de sang pour comparer l'état de stress oxydatif.

Population de l'étude Les critères d'inclusion étaient ≥18 ans, DT2 selon l'American Diabetes Association et DPN par Dyck et. al.3 critères, HbA1c <12%, et consentement éclairé signé. Ils ont été exclus en cas d'insuffisance rénale ou hépatique, de grossesse ou d'allaitement, d'autres neuropathies (alcooliques, radiculopathies, auto-immunes, liées au cancer), et éliminés en cas de non observance du traitement (<80% de la prise médicamenteuse), d'effet indésirable médicamenteux sévère et/ ou une maladie grave. Les patients ont été sélectionnés sur invitation dans des forums ; les patients externes recrutés dans les cliniques de soins primaires ; et base de données collectées précédemment par notre Institut de février 2010 à 2012. Les patients devaient prendre leurs médicaments uniquement le soir à la même heure chaque jour, comme suit : placebo 100 mg, ézétimibe/simvastatine 10/20 mg et rosuvastatine 20 mg. Tous les médicaments avaient des caractéristiques physiques similaires et étaient présentés dans des flacons sombres, soigneusement remplis par un autre chercheur du groupe, qui a placé une étiquette respective avec le code du patient. De plus, les patients recevaient un journal dans lequel ils écrivaient la date et l'heure de l'administration du médicament, ainsi que les effets indésirables ressentis. Ces informations ont été collectées et enregistrées toutes les 4 semaines. Les critères de jugement principaux étaient les marqueurs de stress oxydatif LPO, NO et TAC avant et après une intervention de 16 semaines. Les critères de jugement secondaires étaient les paramètres cliniques, NCS et métaboliques [glycémie à jeun, HbA1c, cholestérol total, lipoprotéines de haute et basse densité (HDL, LDL) et triglycérides]. Le profil d'innocuité a été évalué avec les effets indésirables du médicament, les paramètres de laboratoire rénaux (urée, créatinine) et hépatiques [(alamine- et aspartate-aminotransférase, gamma-glutamyltransférase, bilirubines et phosphokinase].

Les marqueurs du stress oxydatif et de la fonction mitochondriale LPO ont été mesurés selon les spécifications du kit (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μL de sérum ont été traités avec une substance chromogène qui réagit avec le malondialdéhyde (MDA) et les 4-hydroxy-alcénals (HNA), l'absorbance mesurée à 586 nm, et les résultats exprimés en nmol/mL.

Avant déprotéinisation des échantillons, nous avons effectué une colorimétrie pour déterminer la concentration de NO avec 85 µL de sérum (Nitric Oxide Assay Kit, User protocol 482650), avec des résultats exprimés en pmol/mL.

La capacité antioxydante totale (TAC) a été réalisée avec 200 µL de sérum, pour obtenir des valeurs d'équivalent millimole (mM) d'acide urique (Total Antioxidant Power Kit, No. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Variables cliniques et de conduction nerveuse Symptômes neuropathiques (NSS) et scores d'incapacité (NIS) décrits par Dyck, et. Al. ont été obtenues par examen physique et anamnèse. Nous avons également mesuré la latence, la durée, l'amplitude et la vitesse de conduction des nerfs moteurs des nerfs fibula, tibial, médian et ulnae, ainsi que les paramètres de sensibilité des nerfs sural, médian et ulnae, comme l'exige l'American Association of Electrodiagnostic Medicine.

Considérations éthiques L'étude a été approuvée par le Comité de recherche et d'éthique du Centre universitaire des sciences de la santé, Université de Guadalajara, Mexique. Des codes d'identification ont été attribués à chaque participant pour garantir la confidentialité du patient, et un formulaire de consentement éclairé a été signé avant d'entrer dans le protocole, conformément aux lois nationales et internationales, ainsi que stipulé par les déclarations d'Helsinki (http://www.wma.net/ es/30 publications/ 10 politiques/b3/17c.pdf, consulté en janvier 2011).

Analyse statistique La taille de l'échantillon a été obtenue par une formule de conception d'étude clinique prenant en compte un changement de différence de 0,05 nmol/mL en LPO, un intervalle de confiance à 95 %, une puissance à 80 % et un p<0,05 bilatéral, ce qui a donné 21 pour chaque groupe. Les variables quantitatives ont été exprimées en moyenne ± écart type. Les tests de Kolmogorov-Smirnov et de Shapiro-Wilk ont ​​​​été effectués pour déterminer la distribution non paramétrique des variables. Les tests de Friedman et Wilcoxon ont été réalisés pour les mesures avant et après, et Kruskal-Wallis avec U de Mann-Whitney comme analyse post-hoc pour les comparaisons entre groupes. Les variables qualitatives ont été exprimées en fréquences et en pourcentages. Le test du chi carré a été utilisé pour évaluer les différences dans les variables de dichotomie avant et après le traitement, les comparaisons entre les groupes ont été déterminées par le test exact de Fisher et χ2 au besoin. Le niveau de signification a été établi avec une valeur p <0,05.