Статины при окислительном стрессе и митохондриальной функции при диабетической полинейропатии

Введение Нервная дисфункция у пациентов с диабетом известна как диабетическая невропатия и считается наиболее распространенным микрососудистым осложнением — до 60% — у пациентов с сахарным диабетом 2 типа (СД2). Диабетическая полинейропатия (ДПН) составляет ≈70% всех случаев. Его диагноз устанавливается с помощью подтвержденных баллов, основанных на клинических признаках и исследованиях аномальной нервной проводимости (NCS). Патофизиологические данные включают потерю мультифокальных и фокальных нервных волокон, вторичную по отношению к аксональной дегенерации и сегментарной демиелинизации, в основном из-за окислительного стресса, вызванного хронической гипергликемией, что приводит к нервному апоптозу. Другими механизмами, участвующими в повреждении периферических нервов, является нитрозативный стресс, вызванный оксидом азота (NO).

Эзетимиб уменьшает содержание сложных эфиров холестерина в хиломикронах за счет уменьшения поступления холестерина в печень, что, как следствие, увеличивает поглощение ЛПНП и очистку плазмы; в качестве монотерапии снижает уровень холестерина ЛПНП на 17%. В сочетании с симвастатином потенциально увеличивается снижение уровня холестерина; кроме того, плейотропные эффекты статинов включают повышение активности ядерного фактора каппа В и улучшение ионов супероксида после 12-недельного лечения. Другой ингибитор гидроксиметилглутарилкоэнзима А, розувастатин, оказывает антиоксидантное действие, действуя как переносчик свободных радикалов, снижая продукцию перекисного окисления липидов (ПОЛ) в митохондриях и клетках.

Мы провели это исследование, чтобы оценить влияние эзетимиба/симвастатина и розувастатина на окислительный стресс у пациентов с ДПН.

Методы. Дизайн исследования. Рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое клиническое исследование фазы II было проведено в Институте клинической и экспериментальной терапии Университета Гвадалахары, Мексика. Субъекты были разделены на три группы лечения блоками с параллельной последовательностью 1:1:1 посредством рандомизированного компьютерного списка, созданного другим исследователем, не знающим о назначенных препаратах. Пациенты были разделены на: контрольную группу, которая получала плацебо, эзетимиб/симвастатин и розувастатин в виде однократной ежедневной дозы в течение 16 недель. Отбор проводился с февраля 2012 года по январь 2013 года. Мы выбрали 5 нерандомизированных здоровых субъектов (HS) из банка крови, чтобы сравнить состояние окислительного стресса.

Исследуемая популяция Критерии включения: возраст ≥18 лет, СД2 по данным Американской диабетической ассоциации и ДПН по Dyck et. al.3 критерии, HbA1c <12% и подписанное информированное согласие. Их исключали при почечной или печеночной недостаточности, беременности или кормлении грудью, других нейропатиях (алкогольной, радикулопатии, аутоиммунной, связанной с раком) и исключали при несоблюдении режима лечения (<80% приема лекарств), тяжелых побочных реакциях на лекарства и/или или серьезное заболевание. Пациенты отбирались по приглашению на форумах; амбулаторные пациенты, набранные из клиник первичной медико-санитарной помощи; и база данных, собранная ранее нашим институтом с февраля 2010 по 2012 год. Пациенты были проинструктированы принимать свои препараты только на ночь в одно и то же время каждый день следующим образом: плацебо 100 мг, эзетимиб/симвастатин 10/20 мг и розувастатин 20 мг. Все препараты были схожи по физическим характеристикам и представлены в темных флаконах, тщательно заполненных исследователем другой группы, который поместил соответствующую бирку с кодом пациента. Также пациентам был предоставлен дневник, в который они записывали дату и время приема препарата, а также ощущаемые побочные реакции препарата. Такая информация собиралась и регистрировалась каждые 4 недели. Первичными результатами были маркеры окислительного стресса LPO, NO и TAC до и после 16-недельного вмешательства. Вторичными результатами были клинические, NCS и метаболические [глюкоза натощак, HbA1c, общий холестерин, липопротеины высокой и низкой плотности (ЛПВП, ЛПНП) и триглицериды] параметры. Профиль безопасности оценивали по побочным реакциям, почечным (мочевина, креатинин) и печеночным [(аламин- и аспартатаминотрансфераза, гамма-глутамилтрансфераза, билирубин и фосфокиназа] лабораторным показателям.

Окислительный стресс и маркеры митохондриальной функции LPO измеряли в соответствии со спецификациями набора (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 мкл сыворотки обрабатывали хромогенным веществом, которое реагирует с малоновым диальдегидом (MDA) и 4-гидроксиалкеналями (HNA), поглощение измеряли при 586 нм, результаты выражали в нмоль/мл.

Предварительно депротеинизировав образцы, мы выполнили колориметрию для определения концентрации NO с 85 мкл сыворотки (набор для анализа оксида азота, протокол пользователя 482650) с результатами, выраженными в пмоль/мл.

Общую антиоксидантную способность (ТАС) определяли с использованием 200 мкл сыворотки для получения значений миллимольного (мМ) эквивалента мочевой кислоты (Total Antioxidant Power Kit, No. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Клинические переменные и переменные нервной проводимости. Нейропатические симптомы (NSS) и показатели инвалидности (NIS), описанные Dyck, et. др. были получены при физикальном обследовании и анамнезе. Мы также измерили латентность, продолжительность, амплитуду и скорость проведения по двигательным нервам малоберцового, большеберцового, срединного и локтевого нервов, а также параметры чувствительности икроножного, срединного и локтевого нервов, как того требует Американская ассоциация электродиагностической медицины.

Этические соображения Исследование было одобрено Комитетом по исследованиям и этике Университетского центра медицинских наук Университета Гвадалахары, Мексика. Каждому участнику были присвоены идентификационные коды, чтобы гарантировать конфиденциальность пациента, а перед входом в протокол была подписана форма информированного согласия в соответствии с национальными и международными законами, а также в соответствии с Хельсинкскими заявлениями (http://www.wma.net/). эс/30 публикации/ 10 политик/b3/17c.pdf, по состоянию на январь 2011 г.).

Статистический анализ Размер выборки был получен по формуле дизайна клинического исследования с учетом изменения разницы в ПОЛ на 0,05 нмоль/мл, 95% доверительного интервала, 80% эффективности и двустороннего p<0,05, что привело к 21 для каждого группа. Количественные переменные выражали как среднее ± стандартное отклонение. Для определения непараметрического распределения переменных были проведены тесты Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка. Критерии Фридмана и Уилкоксона были реализованы для измерений до и после измерений, а критерий Крускала-Уоллиса с критерием U Манна-Уитни в качестве апостериорного анализа для сравнений между группами. Качественные переменные были выражены в виде частот и процентов. Критерий хи-квадрат использовался для оценки различий в переменных дихотомии до и после лечения, сравнения между группами определялись с помощью точного критерия Фишера и χ2 при необходимости. Уровень значимости был установлен со значением p <0,05.