Estatinas para Estresse Oxidativo e Função Mitocondrial na Polineuropatia Diabética

Introdução A disfunção do sistema nervoso em pacientes com diabetes é conhecida como neuropatia diabética e é considerada a complicação microvascular mais prevalente - até 60% - em indivíduos com Diabetes Mellitus tipo 2 (T2DM). A polineuropatia diabética (DPN) compreende ≈70% de todos os casos. Seu diagnóstico é estabelecido por meio de escores validados com base em características clínicas e estudos anormais de condução nervosa (NCS). Os achados fisiopatológicos incluem perda de fibras nervosas multifocais e focais secundárias à degeneração axonal e desmielinização segmentar, basicamente devido ao estresse oxidativo induzido pela hiperglicemia crônica, que leva à apoptose neural. Outro mecanismo envolvido na lesão de nervos periféricos é o estresse nitrosativo induzido pelo óxido nítrico (NO).

A ezetimiba diminui o conteúdo de ésteres de colesterol em quilomícrons pela redução da ingestão de colesterol hepático, o que, consequentemente, aumenta a captação de LDL e a depuração plasmática; em monoterapia reduz o LDL-C em 17%. Quando combinado com sinvastatina, a redução do colesterol é potencialmente aumentada; além disso, os efeitos pleiotrópicos das estatinas incluem um aumento na atividade do fator nuclear kappa B e melhora dos íons superóxido após 12 semanas de tratamento. Outro inibidor da hidroxi-metil-glutaril coenzima A, a rosuvastatina, tem efeito antioxidante ao atuar como carreador de radicais livres diminuindo a produção de peroxidação lipídica (LPO) mitocondrial e celular.

Conduzimos este estudo para avaliar o efeito de ezetimiba/sinvastatina e rosuvastatina no estresse oxidativo em pacientes com DPN.

Métodos Desenho do estudo Um ensaio clínico de fase II randomizado, duplo-cego e controlado por placebo foi realizado no Instituto de Terapêutica Clínica e Experimental da Universidade de Guadalajara, México. Os indivíduos foram designados para três tratamentos de grupo em blocos com uma sequência paralela 1:1:1 por meio de uma lista aleatória baseada em computador, gerada por um pesquisador diferente que desconhecia os medicamentos administrados. Os pacientes foram divididos em: grupo controle que recebeu placebo, ezetimiba/sinvastatina e rosuvastatina em dose única diária por 16 semanas. O período de seleção foi realizado de fevereiro de 2012 a janeiro de 2013. Selecionamos 5 indivíduos saudáveis ​​não randomizados (HS) de um banco de sangue para comparar o estado de estresse oxidativo.

População do estudo Os critérios de inclusão foram ≥18 anos, DM2 de acordo com a American Diabetes Association e DPN de Dyck et. critérios al.3, HbA1c <12% e consentimento informado assinado. Eles foram excluídos em caso de insuficiência renal ou hepática, gestantes ou lactantes, outras neuropatias (induzidas por álcool, radiculopatia, autoimune, relacionadas ao câncer) e eliminados se falta de adesão ao tratamento (<80% da ingestão do medicamento), reação adversa grave a medicamentos e/ ou doença grave de saúde. Os pacientes foram selecionados por convite em fóruns; pacientes ambulatoriais recrutados em clínicas de cuidados primários; e banco de dados coletados anteriormente pelo nosso Instituto de fevereiro de 2010 a 2012. Os pacientes foram instruídos a tomar seus medicamentos apenas à noite no mesmo horário todos os dias, da seguinte forma: placebo 100 mg, ezetimiba/sinvastatina 10/20 mg e rosuvastatina 20 mg. Todas as drogas eram semelhantes nas características físicas e apresentadas em frascos escuros, cuidadosamente preenchidos por outro pesquisador do grupo, que colocou uma respectiva etiqueta com o código do paciente. Além disso, os pacientes recebiam um diário onde anotavam a data e a hora da administração do medicamento e as reações adversas ao medicamento sentidas. Tais informações foram coletadas e registradas a cada 4 semanas. Os resultados primários foram os marcadores de estresse oxidativo LPO, NO e TAC antes e após 16 semanas de intervenção. Os desfechos secundários foram parâmetros clínicos, NCS e metabólicos [glicose em jejum, HbA1c, colesterol total, lipoproteínas de alta e baixa densidade (HDL, LDL) e triglicerídeos]. O perfil de segurança foi avaliado com reações adversas a medicamentos, variáveis ​​laboratoriais renais (ureia, creatinina) e hepáticas [(alamina e aspartato-aminotransferase, gama-glutamiltransferase, bilirrubinas e fosfoquinase].

Estresse oxidativo e marcadores de função mitocondrial O LPO foi medido de acordo com as especificações do kit (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μL de soro foram processados ​​com uma substância cromógena que reage com malondialdeído (MDA) e 4-hidroxi-alquenais (HNA), a absorbância medida a 586 nm, e os resultados expressos em nmol/mL.

Previamente à desproteinização das amostras, foi realizada colorimetria para determinação da concentração de NO com 85 µL de soro (Nitric Oxide Assay Kit, protocolo do usuário 482650), com resultados expressos em pmol/mL.

A capacidade antioxidante total (TAC) foi realizada com 200 µL de soro, para obter valores de milimole (mM) equivalentes de ácido úrico (Total Antioxidant Power Kit, No. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Variáveis ​​clínicas e de condução nervosa Sintomas neuropáticos (NSS) e escores de incapacidade (NIS) descritos por Dyck, et. al. foram obtidos por exame físico e anamnese. Também medimos a latência, duração, amplitude e velocidade de condução nervosa motora dos nervos fibular, tibial, mediano e ulnar, e parâmetros de sensibilidade dos nervos sural, mediano e ulnar, conforme exigido pela American Association of Electrodiagnostic Medicine.

Considerações éticas O estudo foi aprovado pelo Comitê de Pesquisa e Ética do Centro Universitário de Ciências da Saúde, Universidade de Guadalajara, México. Códigos de identificação foram atribuídos a cada participante para garantir a confidencialidade do paciente, e um termo de consentimento informado foi assinado antes de entrar no protocolo, de acordo com as leis nacionais e internacionais, e também conforme estipulado pelas Declarações de Helsinki (http://www.wma.net/ es/30 publicações/ 10 políticas/b3/17c.pdf, acessado em janeiro de 2011).

Análise estatística O tamanho da amostra foi obtido por uma fórmula de desenho de estudo clínico levando em conta uma mudança de diferença de 0,05 nmol/mL no LPO, intervalo de confiança de 95%, potência de 80% e p bicaudal <0,05, o que resultou em 21 para cada grupo. As variáveis ​​quantitativas foram expressas como média ± desvio padrão. Os testes Kolmogorov-Smirnov e Shapiro-Wilk foram realizados para determinar a distribuição não paramétrica das variáveis. Testes de Friedman e Wilcoxon foram realizados antes e depois das medidas, e Kruskal-Wallis com U de Mann-Whitney como análise post-hoc para comparações entre grupos. As variáveis ​​qualitativas foram expressas como frequências e porcentagens. O teste qui-quadrado foi usado para avaliar as diferenças nas variáveis ​​de dicotomia antes e depois do tratamento, as comparações entre os grupos foram determinadas pelo teste exato de Fisher e χ2 conforme necessário. O nível de significância foi estabelecido com valor de p < 0,05.