Statiny pro oxidační stres a mitochondriální funkci u diabetické polyneuropatie

Úvod Nervová dysfunkce u pacientů s diabetem je známá jako diabetická neuropatie a je považována za nejčastější mikrovaskulární komplikaci – až 60 % – u pacientů s diabetes mellitus 2. typu (T2DM). Diabetická polyneuropatie (DPN) tvoří ≈70 % všech případů. Jeho diagnóza je stanovena pomocí ověřených skóre založených na klinických příznacích a abnormálních studiích nervového vedení (NCS). Patofyziologické nálezy zahrnují ztrátu multifokálních a fokálních nervových vláken sekundární k axonální degeneraci a segmentální demyelinizaci, v podstatě v důsledku oxidačního stresu vyvolaného chronickou hyperglykémií, který vede k neurální apoptóze. Dalšími mechanismy zapojenými do poranění periferních nervů je nitrosativní stres vyvolaný oxidem dusnatým (NO).

Ezetimib snižuje obsah esterů cholesterolu v chylomikronech snížením příjmu cholesterolu v játrech, což má za následek zvýšení vychytávání LDL a plazmatické depurace; jako monoterapie snižuje LDL-C o 17 %. Při kombinaci se simvastatinem je potenciálně zvýšená redukce cholesterolu; dále pleiotropní účinky statinů zahrnují zvýšení aktivity jaderného faktoru kappa B a zlepšení superoxidových iontů po 12týdenní léčbě. Další inhibitor hydroxy-methyl-glutaryl koenzymu A, rosuvastatin, má antioxidační účinek tím, že působí jako nosič volných radikálů snižující produkci mitochondriální a buněčné peroxidace lipidů (LPO).

Tuto studii jsme provedli za účelem vyhodnocení účinku ezetimibu/simvastatinu a rosuvastatinu na oxidační stres u pacientů s DPN.

Metody Uspořádání studie Randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná klinická studie fáze II byla provedena na Clinic and Experimental Therapeutics Institute, University of Guadalajara, Mexiko. Subjekty byly rozděleny do tří skupinových léčebných skupin v blocích s paralelní sekvencí 1:1:1 prostřednictvím randomizovaného počítačově založeného seznamu, vytvořeného jiným výzkumníkem, který nevěděl o podávaných drogách. Pacienti byli rozděleni do: kontrolní skupiny, která dostávala placebo, ezetimib/simvastatin a rosuvastatin v jedné denní dávce po dobu 16 týdnů. Výběrové období probíhalo od února 2012 do ledna 2013. Vybrali jsme 5 nerandomizovaných zdravých subjektů (HS) z krevní banky k porovnání stavu oxidačního stresu.

Studijní populace Kritéria pro zařazení byla ≥18 let, T2DM podle American Diabetes Association a DPN podle Dycka et. al.3 kritéria, HbA1c <12 % a podepsán informovaný souhlas. Byli vyloučeni, pokud selhání ledvin nebo jater, těhotná nebo kojená, jiné neuropatie (indukované alkoholem, radikulopatie, autoimunitní, související s rakovinou) a eliminovány, pokud nedocházelo k dodržování léčby (<80 % příjmu léku), závažné nežádoucí reakce na lék a/ nebo vážné zdravotní onemocnění. Pacienti byli vybíráni na základě pozvání na fórech; ambulantní pacienti přijatí z klinik primární péče; a databáze shromážděné dříve naším institutem od února 2010 do roku 2012. Pacienti byli instruováni, aby užívali léky pouze v noci ve stejnou dobu každý den, a to následovně: placebo 100 mg, ezetimib/simvastatin 10/20 mg a rosuvastatin 20 mg. Všechny léky měly podobné fyzikální vlastnosti a byly prezentovány v tmavých lahvičkách, pečlivě naplněných jinou výzkumnou skupinou, která umístila příslušnou značku s kódem pacienta. Pacienti také dostali deník, do kterého si zapisovali datum a čas podání léku a pociťovali nežádoucí účinky léku. Tyto informace byly shromažďovány a registrovány každé 4 týdny. Primárními výsledky byly markery oxidačního stresu LPO, NO a TAC před a po 16týdenní intervenci. Sekundárními výsledky byly klinické, NCS a metabolické parametry [glukóza nalačno, HbA1c, celkový cholesterol, lipoproteiny s vysokou a nízkou hustotou (HDL, LDL) a triglyceridy]. Bezpečnostní profil byl hodnocen pomocí nežádoucích účinků léku, renálních (močovina, kreatinin) a jaterních [(alamin- a aspartát-aminotransferáza, gama-glutamyltransferáza, bilirubiny a fosfokináza] laboratorních proměnných.

Markery oxidačního stresu a mitochondriálních funkcí LPO byl měřen podle specifikací soupravy (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μl séra bylo zpracováno s chromogenní látkou, která reaguje s malondialdehydem (MDA) a 4-hydroxyalkenaly (HNA), absorbance měřená při 586 nm a výsledky vyjádřené v nmol/ml.

Předchozí deproteinizaci vzorků jsme provedli kolorimetricky pro stanovení koncentrace NO s 85 µL séra (Nitric Oxide Assay Kit, uživatelský protokol 482650), s výsledky vyjádřenými v pmol/mL.

Celková antioxidační kapacita (TAC) byla realizována s 200 ul séra, aby byly získány hodnoty milimolového (mM) ekvivalentu kyseliny močové (Total Antioxidant Power Kit, č. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Klinické a nervově vodivé proměnné Neuropatické symptomy (NSS) a skóre invalidity (NIS) popsané v Dyck, et. al. byly získány fyzikálním vyšetřením a anamnézou. Také jsme měřili latenci, trvání, amplitudu a rychlost vedení motorického nervu z fibuly, tibiálního, středního a loketního nervu a parametry citlivosti z n. suralis, medianus a ulnae, jak požaduje Americká asociace elektrodiagnostické medicíny.

Etická hlediska Studie byla schválena Výzkumným a etickým výborem Centra zdravotní vědy University of Guadalajara, Mexiko. Identifikační kódy byly přiděleny každému účastníkovi, aby byla zaručena důvěrnost pacienta, a před vstupem do protokolu byl podepsán formulář informovaného souhlasu v souladu s národními a mezinárodními zákony a také v souladu s Helsinskými prohlášeními (http://www.wma.net/ es/30 publikace/ 10 politik/b3/17c.pdf, přístupné v lednu 2011).

Statistická analýza Velikost vzorku byla získána vzorcem návrhu klinické studie, který vzal v úvahu změnu rozdílu 0,05 nmol/ml v LPO, 95% interval spolehlivosti, 80% účinnost a dvoustranné p<0,05, což vedlo k 21 pro každý skupina. Kvantitativní proměnné byly vyjádřeny jako průměr ± standardní odchylka. Pro stanovení neparametrického rozdělení proměnných byly provedeny Kolmogorov-Smirnovův a Shapiro-Wilkův test. Byly provedeny Friedmanovy a Wilcoxonovy testy pro před a po měření a Kruskal-Wallis s Mann-Whitneyho U jako post-hoc analýza pro srovnání mezi skupinami. Kvalitativní proměnné byly vyjádřeny jako četnosti a procenta. Chí kvadrát test byl použit k vyhodnocení rozdílů v dichotomických proměnných před a po léčbě, srovnání mezi skupinami bylo stanoveno Fisherovým exaktním testem a χ2 podle potřeby. Hladina významnosti byla stanovena s hodnotou p <0,05.