Statine für oxidativen Stress und mitochondriale Funktion bei diabetischer Polyneuropathie

Einführung Nervenfunktionsstörungen bei Patienten mit Diabetes sind als diabetische Neuropathie bekannt und gelten als die am weitesten verbreitete mikrovaskuläre Komplikation – bis zu 60 % – bei Patienten mit Typ-2-Diabetes mellitus (T2DM). Diabetische Polyneuropathie (DPN) macht etwa 70 % aller Fälle aus. Die Diagnose wird anhand validierter Scores gestellt, die auf klinischen Merkmalen und abnormen Nervenleitungsstudien (NCS) basieren. Pathophysiologische Befunde umfassen den Verlust von multifokalen und fokalen Nervenfasern als Folge einer axonalen Degeneration und einer segmentalen Demyelinisierung, hauptsächlich aufgrund von oxidativem Stress, der durch chronische Hyperglykämie induziert wird, was zu neuraler Apoptose führt. Andere Mechanismen, die an der Verletzung peripherer Nerven beteiligt sind, sind nitrosativer Stress, der durch Stickoxid (NO) induziert wird.

Ezetimib verringert den Gehalt an Cholesterinestern in Chylomikronen, indem es die Cholesterinaufnahme in der Leber reduziert, was folglich die Aufnahme von LDL und die Plasmaausscheidung erhöht; als Monotherapie senkt es LDL-C um 17 %. In Kombination mit Simvastatin wird die Cholesterinsenkung potenziell erhöht; Darüber hinaus umfassen die pleiotropen Wirkungen von Statinen eine Erhöhung der Kernfaktor-Kappa-B-Aktivität und eine Verbesserung der Superoxidionen nach 12-wöchiger Behandlung. Ein weiterer Hydroxy-Methyl-Glutaryl-Coenzym-A-Hemmer, Rosuvastatin, hat eine antioxidative Wirkung, indem es als Träger freier Radikale fungiert und die mitochondriale und zelluläre Lipidperoxidation (LPO)-Produktion verringert.

Wir haben diese Studie durchgeführt, um die Wirkung von Ezetimib/Simvastatin und Rosuvastatin auf oxidativen Stress bei Patienten mit DPN zu bewerten.

Methoden Studiendesign Eine randomisierte, doppelblinde, Placebo-kontrollierte klinische Studie der Phase II wurde am Clinic and Experimental Therapeutics Institute der Universität Guadalajara, Mexiko, durchgeführt. Die Probanden wurden drei Gruppenbehandlungen in Blöcken mit einer parallelen Sequenz 1:1:1 durch eine randomisierte computerbasierte Liste zugewiesen, die von einem anderen Forscher erstellt wurde, der keine Kenntnis von verabreichten Medikamenten hatte. Die Patienten wurden eingeteilt in: Kontrollgruppe, die 16 Wochen lang Placebo, Ezetimib/Simvastatin und Rosuvastatin als tägliche Einzeldosis erhielt. Der Auswahlzeitraum wurde von Februar 2012 bis Januar 2013 durchgeführt. Wir haben 5 nicht randomisierte gesunde Probanden (HS) aus einer Blutbank ausgewählt, um den oxidativen Stressstatus zu vergleichen.

Studienpopulation Einschlusskriterien waren ≥18 Jahre alt, T2DM gemäß American Diabetes Association und DPN von Dyck et. al.3-Kriterien, HbA1c <12 % und Einverständniserklärung unterzeichnet. Sie wurden bei Nieren- oder Leberversagen, Schwangerschaft oder Stillzeit, anderen Neuropathien (alkoholinduziert, Radikulopathie, Autoimmunerkrankungen, krebsbedingt) ausgeschlossen und bei mangelnder Therapietreue (< 80 % der Arzneimitteleinnahme), schweren unerwünschten Arzneimittelwirkungen und/ oder schwere gesundheitliche Erkrankung. Die Patienten wurden auf Einladung in Foren ausgewählt; aus Primärversorgungskliniken rekrutierte ambulante Patienten; und Datenbank, die zuvor von unserem Institut von Februar 2010 bis 2012 gesammelt wurden. Die Patienten wurden angewiesen, ihre Medikamente nur abends zur gleichen Tageszeit wie folgt einzunehmen: Placebo 100 mg, Ezetimib/Simvastatin 10/20 mg und Rosuvastatin 20 mg. Alle Medikamente hatten ähnliche physikalische Eigenschaften und wurden in dunklen Fläschchen präsentiert, die sorgfältig von einem anderen Gruppenforscher gefüllt wurden, der ein entsprechendes Etikett mit dem Patientencode anbrachte. Außerdem wurde den Patienten ein Tagebuch zur Verfügung gestellt, in dem sie das Datum und die Uhrzeit der Arzneimittelverabreichung und die Nebenwirkungen des Arzneimittels aufschrieben. Diese Informationen wurden alle 4 Wochen gesammelt und registriert. Primäre Endpunkte waren die oxidativen Stressmarker LPO, NO und TAC vor und nach einer 16-wöchigen Intervention. Sekundäre Endpunkte waren klinische, NCS- und metabolische [Nüchternglukose, HbA1c, Gesamtcholesterin, High- und Low-Density-Lipoproteine ​​(HDL, LDL) und Triglyceride] Parameter. Das Sicherheitsprofil wurde anhand von Arzneimittelnebenwirkungen, renalen (Harnstoff, Kreatinin) und hepatischen [(Alamin- und Aspartat-Aminotransferase, Gama-Glutamyltransferase, Bilirubine und Phosphokinase] Laborvariablen bewertet.

Oxidativer Stress und mitochondriale Funktionsmarker LPO wurde gemäß den Kit-Spezifikationen (Oxford Biomedical Research Inc., FR12) gemessen, 200 μl Serum wurden mit einer chromogenen Substanz verarbeitet, die mit Malondialdehyd (MDA) und 4-Hydroxyalkenalen (HNA) reagiert. die bei 586 nm gemessene Extinktion und die Ergebnisse in nmol/ml.

Vor der Deproteinisierung der Proben führten wir eine Kolorimetrie zur Bestimmung der NO-Konzentration mit 85 µl Serum (Nitric Oxide Assay Kit, Benutzerprotokoll 482650) durch, wobei die Ergebnisse als pmol/ml ausgedrückt wurden.

Die gesamte antioxidative Kapazität (TAC) wurde mit 200 &mgr;l Serum realisiert, um Werte von Millimol (mM) Äquivalent von Harnsäure zu erhalten (Total Antioxidant Power Kit, Nr. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Klinische und Nervenleitungsvariablen Neuropathische Symptome (NSS) und Behinderungswerte (NIS), beschrieben von Dyck, et. Al. wurden durch körperliche Untersuchung und Anamnese erhoben. Wir haben auch die Latenz, Dauer, Amplitude und motorische Nervenleitungsgeschwindigkeit von Fibula-, Tibial-, Medianus- und Ulnae-Nerven und Empfindlichkeitsparameter von Sural-, Medianus- und Ulnae-Nerven gemessen, wie von der American Association of Electrodiagnostic Medicine gefordert.

Ethische Erwägungen Die Studie wurde von der Forschungs- und Ethikkommission des Health Science University Center der Universität Guadalajara, Mexiko, genehmigt. Jedem Teilnehmer wurden Identifikationscodes zugewiesen, um die Vertraulichkeit der Patienten zu gewährleisten, und vor Eingabe des Protokolls wurde eine Einwilligungserklärung gemäß nationaler und internationaler Gesetze und auch gemäß den Bestimmungen von Helsinki Statements (http://www.wma.net/) unterzeichnet. es/30 Publikationen/ 10 Richtlinien/b3/17c.pdf, Zugriff Januar 2011).

Statistische Analyse Die Stichprobengröße wurde durch eine Designformel für klinische Studien unter Berücksichtigung einer Differenzänderung von 0,05 nmol/ml bei LPO, 95 % Konfidenzintervall, 80 % Wirksamkeit und zweiseitigem p < 0,05 ermittelt, was jeweils 21 ergab Gruppe. Quantitative Variablen wurden als Mittelwert ± Standardabweichung ausgedrückt. Kolmogorov-Smirnov- und Shapiro-Wilk-Tests wurden durchgeführt, um die nichtparametrische Verteilung von Variablen zu bestimmen. Friedman- und Wilcoxon-Tests wurden für Vorher-Nachher-Messungen und Kruskal-Wallis-Tests mit Mann-Whitneys U als Post-hoc-Analyse für Zwischengruppenvergleiche durchgeführt. Qualitative Variablen wurden als Häufigkeiten und Prozentsätze ausgedrückt. Der Chi-Quadrat-Test wurde verwendet, um die Unterschiede in den Dichotomie-Variablen vor und nach der Behandlung zu bewerten, die Vergleiche zwischen den Gruppen wurden durch den exakten Test von Fisher und χ2 nach Bedarf bestimmt. Das Signifikanzniveau wurde mit einem p-Wert < 0,05 festgelegt.