Statines voor oxidatieve stress en mitochondriale functie bij diabetische polyneuropathie

Inleiding Zenuwdisfunctie bij patiënten met diabetes staat bekend als diabetische neuropathie en wordt beschouwd als de meest voorkomende microvasculaire complicatie - tot 60% - bij patiënten met diabetes mellitus type 2 (T2DM). Diabetische polyneuropathie (DPN) omvat ≈70% van alle gevallen. De diagnose wordt gesteld door middel van gevalideerde scores op basis van klinische kenmerken en abnormale zenuwgeleidingsonderzoeken (NCS). Pathofysiologische bevindingen omvatten verlies van multifocale en focale zenuwvezels secundair aan axonale degeneratie en segmentale demyelinisatie, voornamelijk als gevolg van oxidatieve stress veroorzaakt door chronische hyperglycemie, wat leidt tot neurale apoptose. Andere mechanismen die betrokken zijn bij perifere zenuwbeschadiging is nitrosatieve stress veroorzaakt door stikstofmonoxide (NO).

Ezetimibe verlaagt het gehalte aan cholesterolesters in chylomicronen door de inname van cholesterol in de lever te verminderen, wat als gevolg daarvan de LDL-opname en plasmadepuratie verhoogt; als monotherapie verlaagt het LDL-C met 17%. In combinatie met simvastatine wordt de cholesterolverlaging mogelijk verhoogd; bovendien omvatten de pleiotrope effecten van statines een toename van de nucleaire factor kappa B-activiteit en verbetering van superoxide-ionen na een behandeling van 12 weken. Een andere hydroxy-methyl-glutaryl-co-enzym A-remmer, rosuvastatine, heeft een antioxiderende werking door als drager van vrije radicalen te fungeren en de productie van mitochondriale en cellulaire lipideperoxidatie (LPO) te verminderen.

We hebben deze studie uitgevoerd om het effect van ezetimibe/simvastatine en rosuvastatine op oxidatieve stress bij patiënten met DPN te evalueren.

Methoden Onderzoeksopzet Een gerandomiseerde, dubbelblinde, placebogecontroleerde klinische fase II-studie werd uitgevoerd in de Clinic and Experimental Therapeutics Institute, Universiteit van Guadalajara, Mexico. Proefpersonen werden toegewezen aan drie groepsbehandelingen in blokken met een parallelle volgorde 1:1:1 via een gerandomiseerde computergebaseerde lijst, opgesteld door een andere onderzoeker die niet op de hoogte was van de gegeven medicijnen. De patiënten werden ingedeeld in: controlegroep die gedurende 16 weken placebo, ezetimibe/simvastatine en rosuvastatine als een dagelijkse enkelvoudige dosis kreeg. De selectieperiode liep van februari 2012 tot januari 2013. We selecteerden 5 niet-gerandomiseerde gezonde proefpersonen (HS) uit een bloedbank om de oxidatieve stressstatus te vergelijken.

Studiepopulatie Inclusiecriteria waren ≥18 jaar oud, T2DM volgens American Diabetes Association en DPN door Dyck et. al.3-criteria, HbA1c <12% en geïnformeerde toestemming ondertekend. Ze werden uitgesloten bij nier- of leverfalen, zwangerschap of borstvoeding, andere neuropathieën (door alcohol veroorzaakt, radiculopathie, auto-immuunziekten, kankergerelateerd), en geëlimineerd bij onvoldoende therapietrouw (<80% van de geneesmiddelinname), ernstige bijwerkingen en/of of ernstige gezondheidsziekte. Patiënten werden op uitnodiging in fora geselecteerd; poliklinische patiënten geworven uit eerstelijnsklinieken; en database eerder verzameld door ons Instituut van februari 2010 tot 2012. Patiënten kregen de instructie om hun medicijnen alleen 's avonds op hetzelfde tijdstip elke dag in te nemen, als volgt: placebo 100 mg, ezetimibe/simvastatine 10/20 mg en rosuvastatine 20 mg. Alle medicijnen waren qua fysieke kenmerken vergelijkbaar en werden gepresenteerd in donkere flesjes, zorgvuldig gevuld door een andere groepsonderzoeker, die een respectieve tag plaatste met de patiëntcode. Patiënten kregen ook een dagboek waarin ze de datum en het tijdstip van medicijntoediening en de bijwerkingen van het medicijn konden noteren. Dergelijke informatie werd elke 4 weken verzameld en geregistreerd. Primaire uitkomsten waren oxidatieve stress markers LPO, NO en TAC voor en na 16 weken interventie. Secundaire uitkomsten waren klinische, NCS en metabole [nuchtere glucose, HbA1c, totaal cholesterol, hoge en lage dichtheid lipoproteïnen (HDL, LDL) en triglyceriden] parameters. Het veiligheidsprofiel werd beoordeeld met geneesmiddelbijwerkingen, renale (ureum, creatinine) en hepatische [(alamine- en aspartaat-aminotransferase, gamaglutamyltransferase, bilirubines en fosfokinase] laboratoriumvariabelen.

Oxidatieve stress en mitochondriale functiemarkers LPO werd gemeten volgens kitspecificaties (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μl serum werd verwerkt met een chromogene stof die reageert met malondialdehyde (MDA) en 4-hydroxy-alkenalen (HNA), de absorptie gemeten bij 586 nm, en resultaten uitgedrukt in nmol/ml.

Eerdere deproteïnisatie van de monsters, we voerden een colorimetrie uit voor het bepalen van de NO-concentratie met 85 μL serum (stikstofmonoxide-assaykit, gebruikersprotocol 482650), met resultaten uitgedrukt als pmol/ml.

Totale antioxidantcapaciteit (TAC) werd gerealiseerd met 200 µL serum, om waarden te verkrijgen van millimol (mM) equivalent van urinezuur (Total Antioxidant Power Kit, nr. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Klinische en zenuwgeleidingsvariabelen Neuropathische symptomen (NSS) en invaliditeitsscores (NIS) beschreven door Dyck, et. al. verkregen door lichamelijk onderzoek en anamnese. We maten ook de latentie, duur, amplitude en motorische zenuwgeleidingssnelheid van fibula-, tibiale, mediane en ellepijpzenuwen, en gevoeligheidsparameters van surale, mediane en ellepijpzenuwen, zoals vereist door de American Association of Electrodiagnostic Medicine.

Ethische overwegingen De studie werd goedgekeurd door de Research and Ethics Committee van het Health Science University Center, University of Guadalajara, Mexico. Identificatiecodes werden aan elke deelnemer toegewezen om de vertrouwelijkheid van de patiënt te garanderen, en er werd een formulier voor geïnformeerde toestemming ondertekend voordat het protocol werd ingevoerd, in overeenstemming met nationale en internationale wetten, en ook zoals bepaald door de Helsinki-verklaringen (http://www.wma.net/ es/30 publicaties/ 10 beleid/b3/17c.pdf, geraadpleegd in januari 2011).

Statistische analyse De steekproefomvang werd verkregen door een opzetformule voor klinisch onderzoek waarbij rekening werd gehouden met een verschilverandering van 0,05 nmol/ml in LPO, 95% betrouwbaarheidsinterval, 80% potentie en tweezijdige p<0,05, wat resulteerde in 21 voor elk groep. Kwantitatieve variabelen werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaarddeviatie. Kolmogorov-Smirnov- en Shapiro-Wilk-testen werden uitgevoerd om de niet-parametrische verdeling van variabelen te bepalen. Er werden Friedman- en Wilcoxon-testen uitgevoerd voor voor- en nametingen, en Kruskal-Wallis met Mann-Whitney's U als post-hocanalyse voor vergelijkingen tussen groepen. Kwalitatieve variabelen werden uitgedrukt in frequenties en percentages. Chi-kwadraat-test werd gebruikt om verschillen in dichotomievariabelen voor en na behandeling te evalueren, tussen groepsvergelijkingen werden bepaald door Fisher's exact-test en χ2 indien nodig. Significantieniveau werd vastgesteld met p-waarde <0,05.