Statiner for oksidativt stress og mitokondriell funksjon ved diabetisk polynevropati

Innledning Nervedysfunksjonssystem hos pasienter med diabetes er kjent som diabetisk nevropati og regnes som den mest utbredte mikrovaskulære komplikasjonen – opptil 60 % – hos pasienter med type 2 diabetes mellitus (T2DM). Diabetisk polynevropati (DPN) utgjør ≈70 % av alle tilfeller. Diagnosen er etablert ved hjelp av validerte skårer basert på kliniske egenskaper og unormale nerveledningsstudier (NCS). Patofysiologiske funn inkluderer tap av multifokale og fokale nervefibre sekundært til aksonal degenerasjon og segmentell demyelinisering, hovedsakelig på grunn av oksidativt stress indusert av kronisk hyperglykemi, som fører til nevral apoptose. Andre mekanismer involvert i perifer nerveskade er nitrosativt stress indusert av nitrogenoksid (NO).

Ezetimib reduserer kolesterolesterinnholdet i chylomikroner ved å redusere leverens kolesterolinntak som følgelig øker LDL-opptaket og plasmadepurasjonen; som monoterapi reduserer den LDL-C med 17 %. Når det kombineres med simvastatin, øker kolesterolreduksjonen potensielt; videre inkluderer pleiotropiske effekter av statiner en økning i nukleær faktor kappa B-aktivitet og forbedring av superoksidioner etter 12 ukers behandling. En annen hydroksy-metyl-glutaryl koenzym A-hemmer, rosuvastatin, har en antioksidanteffekt ved å fungere som frie radikalbærer som reduserer produksjonen av mitokondriell og cellulær lipidperoksidasjon (LPO).

Vi utførte denne studien for å evaluere effekten av ezetimib/simvastatin og rosuvastatin på oksidativt stress hos pasienter med DPN.

Metoder Studiedesign En randomisert, dobbeltblindet, placebokontrollert fase II klinisk studie ble utført i Clinic and Experimental Therapeutics Institute, University of Guadalajara, Mexico. Forsøkspersonene ble tildelt tre gruppebehandlinger i blokker med en parallell sekvens 1:1:1 gjennom en randomisert datamaskinbasert liste, generert av en annen forsker uvitende om medisiner gitt. Pasientene ble delt inn i: kontrollgruppe som fikk placebo, ezetimib/simvastatin og rosuvastatin som en daglig enkeltdose i 16 uker. Utvelgelsesperioden ble utført fra februar 2012 til januar 2013. Vi valgte 5 ikke-randomiserte friske personer (HS) fra en blodbank for å sammenligne oksidativt stressstatus.

Studiepopulasjon Inklusjonskriterier var ≥18 år gamle, T2DM ifølge American Diabetes Association og DPN av Dyck et. al.3 kriterier, HbA1c <12 %, og informert samtykke signert. De ble ekskludert dersom nyre- eller leversvikt, gravid eller ammende, andre nevropatier (alkoholindusert, radikulopati, autoimmun, kreftrelatert), og eliminert dersom behandlingsoverholdelse (<80 % av legemiddelinntaket) mangler, alvorlig bivirkning og/ eller alvorlig helsesykdom. Pasienter ble valgt etter invitasjon i fora; polikliniske pasienter rekruttert fra primærklinikker; og database som tidligere ble samlet inn av instituttet vårt fra februar 2010 til 2012. Pasientene ble bedt om å ta medisinene sine bare om natten til samme tid hver dag, som følger: placebo 100 mg, ezetimib/simvastatin 10/20 mg og rosuvastatin 20 mg. Alle legemidler var like i fysiske egenskaper og presentert i mørke hetteglass, nøye fylt av en annen gruppeforsker, som plasserte en respektive merkelapp med pasientkoden. Pasientene ble også utstyrt med en dagbok der de kunne skrive ned dato og klokkeslett for administrering av medikamenter, og bivirkninger som ble kjent. Slike opplysninger ble samlet inn og registrert hver 4. uke. Primære utfall var oksidative stressmarkører LPO, NO og TAC før og etter 16 ukers intervensjon. Sekundære utfall var kliniske, NCS og metabolske parametere [fastende glukose, HbA1c, totalkolesterol, høy- og lavdensitetslipoproteiner (HDL, LDL) og triglyserider]. Sikkerhetsprofilen ble vurdert med legemiddelbivirkninger, nyre (urea, kreatinin) og lever [(alamin- og aspartat-aminotransferase, gama-glutamyltransferase, bilirubin og fosfokinase] laboratorievariabler.

Oksidativt stress og mitokondriell funksjonsmarkører LPO ble målt i henhold til kitspesifikasjoner (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μL serum hvor det ble behandlet med et kromogen stoff som reagerer med malondialdehyd (MDA) og 4-hydroksyalkenaler (HNA), absorbansen målt ved 586 nm, og resultatene uttrykt i nmol/ml.

Tidligere deproteinisering av prøvene utførte vi en kolorimetri for å bestemme konsentrasjonen av NO med 85 µL serum (Nitric Oxide Assay Kit, brukerprotokoll 482650), med resultater uttrykt som pmol/ml.

Total antioksidantkapasitet (TAC) ble realisert med 200 µL serum for å oppnå verdier av millimol (mM) ekvivalent urinsyre (Total Antioxidant Power Kit, nr. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Kliniske og nerveledningsvariabler Nevropatiske symptomer (NSS) og funksjonshemmingsskår (NIS) beskrevet av Dyck, et. al. ble oppnådd ved fysisk undersøkelse og anamnese. Vi målte også latens, varighet, amplitude og motorisk nerveledningshastighet fra fibula-, tibial-, median- og ulnae-nerver, og sensitivitetsparametre fra sural-, median- og ulnae-nerver, som kreves av American Association of Electrodiagnostic Medicine.

Etiske betraktninger Studien ble godkjent av forsknings- og etikkkomiteen ved Health Science University Center, University of Guadalajara, Mexico. Identifikasjonskoder ble tildelt hver deltaker for å garantere pasientens konfidensialitet, og et informert samtykkeskjema ble signert før protokollen gikk inn, i henhold til nasjonale og internasjonale lover, og også som fastsatt av Helsinki-erklæringene (http://www.wma.net/ es/30 publikasjoner/ 10 retningslinjer/b3/17c.pdf, åpnet januar 2011).

Statistisk analyse Prøvestørrelsen ble oppnådd ved en designformel for kliniske studier som tok hensyn til en forskjellsendring på 0,05 nmol/ml i LPO, 95 % konfidensintervall, 80 % styrke og to-halet p<0,05, noe som resulterte i 21 for hver gruppe. Kvantitative variabler ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik. Kolmogorov-Smirnov og Shapiro-Wilk-tester ble utført for å bestemme den ikke-parametriske fordelingen av variabler. Friedman og Wilcoxon tester ble realisert for før og etter målinger, og Kruskal-Wallis med Mann-Whitneys U som post-hoc analyse for sammenligninger mellom grupper. Kvalitative variabler ble uttrykt som frekvenser og prosenter. Chi square test ble brukt for å evaluere forskjeller i dikotomivariabler før og etter behandling, mellom gruppesammenlikninger ble bestemt ved Fishers eksakte test og χ2 etter behov. Signifikansnivå ble etablert med p-verdi <0,05.