Statyny dla stresu oksydacyjnego i funkcji mitochondriów w polineuropatii cukrzycowej

Wprowadzenie Dysfunkcja układu nerwowego u pacjentów z cukrzycą jest określana jako neuropatia cukrzycowa i jest uważana za najpowszechniejsze powikłanie mikronaczyniowe - do 60% - u pacjentów z cukrzycą typu 2 (T2DM). Polineuropatia cukrzycowa (DPN) stanowi około 70% wszystkich przypadków. Jego diagnozę ustala się za pomocą zwalidowanych wyników opartych na cechach klinicznych i nieprawidłowych badaniach przewodnictwa nerwowego (NCS). Odkrycia patofizjologiczne obejmują utratę wieloogniskowych i ogniskowych włókien nerwowych wtórną do degeneracji aksonów i segmentowej demielinizacji, zasadniczo z powodu stresu oksydacyjnego wywołanego przez przewlekłą hiperglikemię, która prowadzi do apoptozy neuronów. Innym mechanizmem zaangażowanym w uszkodzenie nerwów obwodowych jest stres nitrozowy wywołany przez tlenek azotu (NO).

Ezetymib zmniejsza zawartość estrów cholesterolu w chylomikronach poprzez zmniejszenie wchłaniania cholesterolu przez wątrobę, co w konsekwencji zwiększa wychwyt LDL i wydalanie z osocza; w monoterapii obniża LDL-C o 17%. W połączeniu z symwastatyną potencjalnie zwiększa się obniżenie poziomu cholesterolu; ponadto plejotropowe działanie statyn obejmuje zwiększenie aktywności jądrowego czynnika kappa B i poprawę jonów ponadtlenkowych po 12 tygodniach leczenia. Inny inhibitor hydroksy-metylo-glutarylo-koenzymu A, rozuwastatyna, ma działanie przeciwutleniające, działając jako nośnik wolnych rodników, zmniejszając wytwarzanie mitochondrialnej i komórkowej peroksydacji lipidów (LPO).

Przeprowadziliśmy to badanie, aby ocenić wpływ ezetymibu/symwastatyny i rozuwastatyny na stres oksydacyjny u pacjentów z DPN.

Metody Projekt badania Randomizowane, podwójnie zaślepione, kontrolowane placebo badanie kliniczne fazy II przeprowadzono w Klinice i Instytucie Terapii Doświadczalnej Uniwersytetu Guadalajara w Meksyku. Badani zostali przydzieleni do trzech terapii grupowych w blokach z równoległą sekwencją 1:1:1 poprzez losową listę komputerową, wygenerowaną przez innego badacza nieświadomego podanych leków. Pacjentów podzielono na: grupę kontrolną, która otrzymywała placebo, ezetymib/symwastatynę i rozuwastatynę w pojedynczej dawce dziennej przez 16 tygodni. Okres selekcji przeprowadzono od lutego 2012 do stycznia 2013 roku. Wybraliśmy 5 nierandomizowanych zdrowych osób (HS) z banku krwi, aby porównać stan stresu oksydacyjnego.

Badana populacja Kryteriami włączenia były wiek ≥18 lat, T2DM według American Diabetes Association oraz DPN według Dycka i in. al.3 kryteria, HbA1c <12% i podpisana świadoma zgoda. Wykluczono je w przypadku niewydolności nerek lub wątroby, ciąży lub karmienia piersią, innych neuropatii (wywołanych alkoholem, radikulopatii, autoimmunologicznych, związanych z rakiem) i wyeliminowano w przypadku nieprzestrzegania zaleceń dotyczących leczenia (<80% przyjmowanego leku), ciężkiej niepożądanej reakcji na lek i/lub lub poważna choroba zdrowotna. Pacjenci byli wybierani na zaproszenie na forach; pacjenci ambulatoryjni rekrutowani z poradni podstawowej opieki zdrowotnej; oraz baza danych zgromadzona wcześniej przez nasz Instytut od lutego 2010 do 2012 roku. Pacjentów poinstruowano, aby przyjmowali leki wyłącznie na noc o tej samej porze każdego dnia, w następujący sposób: placebo 100 mg, ezetymib/symwastatyna 10/20 mg i rozuwastatyna 20 mg. Wszystkie leki miały podobne właściwości fizyczne i były prezentowane w ciemnych fiolkach, starannie napełnianych przez innego badacza grupy, który umieszczał odpowiednią etykietę z kodem pacjenta. Pacjenci otrzymywali również dzienniczek, w którym odnotowywali datę i godzinę podania leku oraz odczuwane działania niepożądane leku. Takie informacje były zbierane i rejestrowane co 4 tygodnie. Głównymi wynikami były markery stresu oksydacyjnego LPO, NO i TAC przed i po 16-tygodniowej interwencji. Drugorzędowymi punktami końcowymi były parametry kliniczne, NCS i metaboliczne [glukoza na czczo, HbA1c, cholesterol całkowity, lipoproteiny o wysokiej i niskiej gęstości (HDL, LDL) oraz trójglicerydy]. Profil bezpieczeństwa oceniano na podstawie parametrów laboratoryjnych związanych z działaniami niepożądanymi leku, nerkami (mocznik, kreatynina) i wątrobą [(aminotransferaza aminowa i asparaginianowa, gamma-glutamylotransferaza, bilirubina i fosfokinaza).

Markery stresu oksydacyjnego i funkcji mitochondriów LPO mierzono zgodnie ze specyfikacjami zestawu (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μl surowicy poddano obróbce z substancją chromogenną, która reaguje z dialdehydem malonowym (MDA) i 4-hydroksy-alkenalami (HNA), absorbancję zmierzono przy 586 nm, a wyniki wyrażono w nmol/ml.

Uprzednie odbiałczenie próbek wykonaliśmy kolorymetrycznie w celu określenia stężenia NO za pomocą 85 µl surowicy (zestaw do oznaczania tlenku azotu, protokół użytkownika 482650), z wynikami wyrażonymi jako pmol/ml.

Całkowitą pojemność przeciwutleniającą (TAC) uzyskano z 200 µl surowicy, aby uzyskać wartości milimolowego (mM) równoważnika kwasu moczowego (zestaw Total Antioxidant Power Kit, nr 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Kliniczne i zmienne przewodnictwa nerwowego Objawy neuropatyczne (NSS) i wskaźniki niepełnosprawności (NIS) opisane przez Dycka i in. glin. uzyskano na podstawie badania fizykalnego i wywiadu. Zmierzyliśmy również latencję, czas trwania, amplitudę i prędkość przewodzenia nerwów ruchowych nerwów strzałkowych, piszczelowych, pośrodkowych i łokciowych oraz parametry czułości nerwów łydkowych, pośrodkowych i łokciowych, zgodnie z wymaganiami Amerykańskiego Stowarzyszenia Medycyny Elektrodiagnostycznej.

Względy etyczne Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję ds. Badań i Etyki Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Guadalajara w Meksyku. Kody identyfikacyjne zostały przypisane każdemu uczestnikowi, aby zagwarantować poufność pacjenta, a formularz świadomej zgody został podpisany przed wejściem do protokołu, zgodnie z prawem krajowym i międzynarodowym, a także zgodnie z Oświadczeniami z Helsinek (http://www.wma.net/ es/30 publikacje/ 10 polityk/b3/17c.pdf, dostęp styczeń 2011).

Analiza statystyczna Wielkość próby uzyskano za pomocą wzoru projektu badania klinicznego, biorąc pod uwagę zmianę różnicy 0,05 nmol/ml w LPO, 95% przedział ufności, 80% siłę działania i dwustronne p<0,05, co dało 21 dla każdego Grupa. Zmienne ilościowe wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe. W celu określenia nieparametrycznego rozkładu zmiennych przeprowadzono testy Kołmogorowa-Smirnowa i Shapiro-Wilka. Testy Friedmana i Wilcoxona przeprowadzono dla pomiarów przed i po pomiarach, a testy Kruskala-Wallisa z U Manna-Whitneya jako analizę post-hoc dla porównań między grupami. Zmienne jakościowe wyrażono jako częstości i procenty. Test chi-kwadrat zastosowano do oceny różnic w zmiennych dychotomii przed i po leczeniu, porównania między grupami określono za pomocą dokładnego testu Fishera i χ2 w razie potrzeby. Poziom istotności ustalono przy wartości p <0,05.