Statiner för oxidativ stress och mitokondriell funktion vid diabetisk polyneuropati

Inledning Nervdysfunktion hos patienter med diabetes är känd som diabetisk neuropati och anses vara den vanligaste mikrovaskulära komplikationen - upp till 60 % - hos patienter med typ 2-diabetes mellitus (T2DM). Diabetisk polyneuropati (DPN) utgör ≈70% av alla fall. Dess diagnos fastställs med hjälp av validerade poäng baserade på kliniska egenskaper och abnorma nervledningsstudier (NCS). Patofysiologiska fynd inkluderar förlust av multifokala och fokala nervfibrer sekundärt till axonal degeneration och segmentell demyelinisering, huvudsakligen på grund av oxidativ stress inducerad av kronisk hyperglykemi, vilket leder till neural apoptos. Andra mekanismer som är involverade i perifer nervskada är nitrosativ stress inducerad av kväveoxid (NO).

Ezetimib minskar innehållet av kolesterolestrar i chylomikroner genom att minska kolesterolintaget i levern, vilket i sin tur ökar LDL-upptaget och plasmautsöndringen; som monoterapi minskar den LDL-C med 17 %. I kombination med simvastatin kan kolesterolsänkningen potentiellt öka; dessutom inkluderar pleiotropa effekter av statiner en ökning av nukleär faktor kappa B-aktivitet och förbättring av superoxidjoner efter 12 veckors behandling. En annan hydroxi-metyl-glutaryl-koenzym A-hämmare, rosuvastatin, har en antioxidanteffekt genom att fungera som bärare av fria radikaler som minskar produktionen av mitokondriell och cellulär lipidperoxidation (LPO).

Vi genomförde denna studie för att utvärdera effekten av ezetimib/simvastatin och rosuvastatin på oxidativ stress hos patienter med DPN.

Metoder Studiedesign En randomiserad, dubbelblind, placebokontrollerad klinisk fas II-studie utfördes i Clinic and Experimental Therapeutics Institute, University of Guadalajara, Mexiko. Försökspersonerna tilldelades tre gruppbehandlingar i block med en parallell sekvens 1:1:1 genom en randomiserad datorbaserad lista, genererad av en annan forskare omedveten om läkemedel som gavs. Patienterna delades in i: kontrollgrupp som fick placebo, ezetimib/simvastatin och rosuvastatin som en daglig singeldos under 16 veckor. Urvalsperioden genomfördes från februari 2012 till januari 2013. Vi valde ut 5 icke-randomiserade friska försökspersoner (HS) från en blodbank för att jämföra oxidativ stressstatus.

Studiepopulationens inklusionskriterier var ≥18 år gamla, T2DM enligt American Diabetes Association och DPN av Dyck et. al.3 kriterier, HbA1c <12%, och informerat samtycke undertecknat. De exkluderades om njur- eller leversvikt, gravid eller ammande, andra neuropatier (alkoholinducerade, radikulopati, autoimmuna, cancerrelaterade) och eliminerades om behandlingen inte följs (<80 % av läkemedelsintaget), allvarliga biverkningar och/ eller allvarlig hälsosjukdom. Patienter valdes ut genom inbjudan i forum; öppenvårdspatienter rekryterade från primärvårdskliniker; och databas som tidigare samlats in av vårt institut från februari 2010 till 2012. Patienterna instruerades att ta sina läkemedel endast på natten vid samma tidpunkt varje dag, enligt följande: placebo 100 mg, ezetimib/simvastatin 10/20 mg och rosuvastatin 20 mg. Alla droger var lika i fysiska egenskaper och presenterades i mörka flaskor, noggrant fyllda av en annan gruppforskare, som placerade en respektive tagg med patientkoden. Patienterna försågs också med en dagbok där de skulle skriva ner datum och tid för läkemedelsadministrering, och läkemedelsbiverkningar kändes. Sådan information samlades in och registrerades var 4:e vecka. Primära utfall var oxidativ stressmarkörer LPO, NO och TAC före och efter 16 veckors intervention. Sekundära utfall var kliniska, NCS och metaboliska [fasteglukos, HbA1c, totalt kolesterol, hög- och lågdensitetslipoproteiner (HDL, LDL) och triglycerider] parametrar. Säkerhetsprofilen utvärderades med läkemedelsbiverkningar, njurar (urea, kreatinin) och lever [(alamin- och aspartat-aminotransferas, gama-glutamyltransferas, bilirubin och fosfokinas] laboratorievariabler.

Oxidativ stress och mitokondriell funktionsmarkörer LPO mättes enligt kitspecifikationer (Oxford Biomedical Research Inc., FR12), 200 μL serum där det bearbetades med en kromogen substans som reagerar med malondialdehyd (MDA) och 4-hydroxialkenaler (HNA), absorbansen mätt vid 586 nm och resultaten uttryckta i nmol/ml.

Tidigare avproteinisering av proverna utförde vi en kolorimetri för att bestämma koncentrationen av NO med 85 µL serum (Nitric Oxide Assay Kit, användarprotokoll 482650), med resultat uttryckta som pmol/ml.

Total antioxidantkapacitet (TAC) realiserades med 200 µL serum för att erhålla värden på millimol (mM) ekvivalent urinsyra (Total Antioxidant Power Kit, nr. 02090130, Oxford Biomedical Research®).

Kliniska och nervledningsvariabler Neuropatiska symptom (NSS) och funktionshinderspoäng (NIS) beskrivna av Dyck, et. al. erhölls genom fysisk undersökning och anamnes. Vi mätte också latens, varaktighet, amplitud och motorisk nervledningshastighet från fibula-, tibial-, median- och ulnae-nerver och känslighetsparametrar från sural-, median- och ulnae-nerver, som krävs av American Association of Electrodiagnostic Medicine.

Etiska överväganden Studien godkändes av forsknings- och etikkommittén vid Health Science University Center, University of Guadalajara, Mexiko. Identifikationskoder tilldelades varje deltagare för att garantera patientens konfidentialitet, och ett formulär för informerat samtycke undertecknades innan protokollet gick in, i enlighet med nationella och internationella lagar, och även enligt Helsingforsförklaringarna (http://www.wma.net/ es/30 publikationer/ 10 policys/b3/17c.pdf, tillgänglig januari 2011).

Statistisk analys Provstorleken erhölls genom en designformel för kliniska studier som tog hänsyn till en skillnadsförändring på 0,05 nmol/ml i LPO, 95 % konfidensintervall, 80 % potens och tvåsvansad p<0,05, vilket resulterade i 21 för varje grupp. Kvantitativa variabler uttrycktes som medelvärde ± standardavvikelse. Kolmogorov-Smirnov- och Shapiro-Wilk-tester utfördes för att bestämma den icke-parametriska fördelningen av variabler. Friedman och Wilcoxon tester genomfördes för före och efter mätningar, och Kruskal-Wallis med Mann-Whitneys U som post-hoc analys för jämförelser mellan grupper. Kvalitativa variabler uttrycktes som frekvenser och procentsatser. Chi square test användes för att utvärdera skillnader i dikotomivariabler före och efter behandling, mellan gruppjämförelser bestämdes med Fishers exakta test och χ2 efter behov. Signifikansnivå fastställdes med p-värde <0,05.