Voies moléculaires impliquées dans la pathogenèse et le comportement des tumeurs mésenchymateuses phosphaturiques provoquant une ostéomalacie oncogène

Protocole de l'étude Culture cellulaire Des échantillons de moelle osseuse et de tissus seront obtenus des patients après qu'ils auront donné leur consentement éclairé écrit. Le matériel sera maintenu dans un milieu de culture RPMI (Sigma, R0883, Allemagne). Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) provenant de donneurs sains seront utilisées comme contrôle. Pour la détection des cellules cancéreuses dans nos échantillons, nous effectuons une cytométrie en flux à l'aide de billes magnétiques EpCAM (39-EPC-50 ; Gentaur), et les cellules de sélection négative (non cancéreuses) sont isolées puis cultivées dans un flacon de 25 cm2 (5520100 ; Orange Scientific) avec le milieu RPMI-1640 (R6504 ; Sigma).

Analyse moléculaire L'ARN est extrait des cultures cellulaires à l'aide du RNeasy Mini Kit (74105 ; Qiagen, Hilden ; Allemagne). Le kit de synthèse d'ADNc iScript (1708891 ; Bio-Rad, CA ; États-Unis) est utilisé pour la synthèse d'ADNc et la réaction en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel, à l'aide de l'iTaq Universal SYBR Green Supermix (1725124 ; Bio-Rad). Des amorces spécifiques pour chaque marqueur et pour un gène de contrôle endogène (ARNr 18S) sont conçues à l'aide du logiciel Genamic Expression 1.1. Un ARN de référence universel composé de 10 lignées de cellules cancéreuses humaines (740000-41 ; Agilent) ainsi que d'ADN génomique humain (G304A ; Promega) sera utilisé dans les réactions de PCR quantitative (qPCR). Analyse statistique Les résultats de la qPCR seront testés selon les essai de Kolmogorov-Smirnov ; Toutes les réactions (dosages moléculaires, cytométrie en flux) sont réalisées en triple. Une valeur p <0,05 est considérée comme significative.