Molekylära vägar involverade i patogenesen och beteendet hos mesenkymala fosfaturiska tumörer som orsakar onkogen osteomalaci

Studieprotokoll Cellkultur Benmärgs- och vävnadsprover kommer att erhållas från patienterna efter att de har gett sitt skriftliga informerade samtycke. Materialet kommer att hållas i RPMI-odlingsmedium (Sigma, R0883, Tyskland). Perifera mononukleära blodceller (PBMC) från friska donatorer kommer att användas som kontroll. För detektion av cancerceller i våra prover utför vi flödescytometri med EpCAM magnetiska pärlor (39-EPC-50; Gentaur), och de negativa selektionscellerna (icke-cancerösa) isoleras och odlas sedan i en 25 cm2 kolv (5520100; Orange Scientific) med RPMI-1640-medium (R6504; Sigma).

Molekylär analys RNA extraheras från cellkulturer med användning av RNeasy Mini Kit (74105; Qiagen, Hilden; Tyskland). iScript cDNA-syntessats (1708891; Bio-Rad, CA; USA), används för cDNA-syntes och realtidspolymeraskedjereaktion (PCR), utförs med iTaq Universal SYBR Green Supermix (1725124; Bio-Rad). Specifika primrar för varje markör och för en endogen kontrollgen (18S rRNA) är designad med hjälp av programvaran Genamic Expression 1.1. Ett universellt referens-RNA bestående av 10 humana cancercellinjer (740000-41; Agilent) såväl som humant genomiskt DNA (G304A; Promega) kommer att användas i kvantitativa PCR (qPCR)-reaktioner Statistisk analys qPCR-resultaten kommer att testas enligt Kolmogorov-Smirnov test; Alla reaktioner (molekylära analyser, flödescytometri) utförs i triplikat. Ett p-värde <0,05 anses signifikant.